UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

Guía No. 1: Preparación de Medios de cultivo

Facultad: Facultad de Medicina

Programa: Programa de Medicina

Curso: Microbiología y Laboratorio Clínico

Docente: Melissa Portilla Chaves

COMPETENCIAS

 El estudiante identificara los medios de cultivo requeridos por un microorganismos

para poder ser fácilmente recuperado en el laboratorio.
 El estudiante clasificara los diferentes medios de cultivo atendiendo a su
composición, estado físico y origen.
 El estudiante aprenderá a preparar diferentes medios de cultivo dependiendo de
la muestra biológica y el microorganismo a estudiar.

FUNDAMENTO

Un medio de cultivo, es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias como temperatura, humedad,
presión de oxígeno, acidez o alcanidad, características requeridas para el desarrollo
de microorganismos en un laboratorio.

Entre los constituyentes más importantes de un medio de cultivo encontramos:

 Agar: es un agente gelificante que le da solides a los medios de cultivo. Se obtiene

de algas marinas y tiene la capacidad de gelificar un medio a partir de los 40°C.
 Extractos: compuestos por órganos y tejidos de animales y vegetales (hígado,
cerebro, semillas. Se extraen con agua y calor hasta la concentración final de
polvo.
 Peptonas: son mezclas de compuestos orgánicos nitrogenados y sales minerales,
que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o
vegetales. Son ricas en péptidos y aminoácidos, pero deficientes en vitaminas.
 Fluidos corporales: Los más comunes son sangre completa, plasma o suero
sanguíneo. Se deben obtener en condiciones asépticas ya que no se pueden
esterilizar. Se adicionan después de autoclavar el medio de cultivo y este baje a
 una temperatura de 37°C. Estos suministran factores de crecimiento y aportan
sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas bacterias.
 Sistemas amortiguadores: mantienen el pH dentro del rango óptimo de
crecimiento bacteriano. Entre los más comunes son los fosfatos bisodicos o
bipotasicos.
 Indicadores de pH: Detectan las variaciones de pH producidas por procesos
fermentativos.
 Agentes reductores: Los más comunes son las cisteína y el tioglicolato. Se utilizan
para crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de
microorganismos microarerofilicos o anaerobios.
 Agentes selectivos: Al adicionar determinadas sustancias pueden hacer un medio
selectivo frente a cierto tipo de microorganismos. Entre los más comunes tenemos
el cristal violeta, sales biliares, antibióticos.

MATERIALES

 Agar nutritivo
 Agar base Columbia
 Agar saboraud dextrosa
 Agar Eosina y azul de metileno (EMB)
 Caldo nutritivo
 Cajas Petri
 Tubos ensayo tapa rosca
 Balanza analítica
 Autoclave
 Vidrios de reloj
 Espátulas
 Servilletas
 Guantes y tapabocas

PROCEDIMIENTO

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializados;

normalmente bajo la forma de liofilizados a los que es preciso rehidratar. En estos
casos la preparación del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar la cantidad
deseada del mismo y disolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones del
fabricante. Las sustancias termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al
resto de los componentes después de que estos hayan sido previamente esterilizados
en el autoclave y enfriados a temperatura ambiente o a 40-50ºC si se trata de medios
con agar.

Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados

(tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y se ha de distribuir en tubos o en
matraces será necesario fundir el agar en baño María u horno microondas, una vez
fundido y homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos o matraces (no en placas
Petri) se tapa y se esteriliza en el autoclave.

Una vez finalizada la esterilización los medios se dejaran enfriar a temperatura

ambiente y en el caso de medios sólidos contenidos en tubos deberán, en su caso,
inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de agar inclinado o pico de
flauta(slant) si tal es su finalidad.
Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y
en un ambiente aséptico (por ejemplo en la proximidad de la llama de un mechero
Bunsen) es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para
evitar que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en
todas las placas. También es posible conservar el medio destinado a preparar placas
Petri solidificado y estéril en tubos que se fundirán al baño María en el momento de la
preparación de las mismas. Los caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez
esterilizados, a temperatura ambiente pero para reducir su deshidratación y el
consiguiente cambio en las concentraciones de sus componentes es preferible
conservarlos a 4ºC.

Descripción de la practica:

Cada grupo de trabajo compuesto por 5 estudiantes, deberá preparar un medio de

cultivo diferente teniendo en cuenta las especificaciones del fabricante. Ejemplo: El
Agar EMB requiere: 37.5 g para 1000 ml de agua destilada. Si desea preparar 120
ml, cuantos gramos debe pesar:

37.5 g ---------------1000 ml

X ---------------120 ml

X= 37.5 g * 120 ml

1000 ml

X= 4,5 g

Se pesa 4.5 g de EMB y se diluyen en 120 ml de agua destilada. Se calienta en una

mufla hasta lograr la disolución completa del medio y posteriormente esteriliza en
autoclave a 121°C por 15 minutos. Se deja enfriar a 60°C y se sirve en las cajas Petri
(Se preparara 6 cajas Petri por cada medio de cultivo sólido. Cada caja debe contener
20 ml de medio, por tanto cada equipo debe prepara 120 ml).
TALLER

1. Realice una descripción de la historia de los medios de cultivo como elemento

fundamental para el diagnóstico microbiológico.
2. Como se clasifican los diferentes medios de cultivo dependiendo de su estado
físico, según su utilización, su composición y su origen. Descríbalos.
3. Cuál es la utilidad y el fundamento de: Agar Nutritivo, Agar sangre, Agar CLED,
Agar SS, Agar Mueller-Hinton, Agar Levine, Lowenstein – Jensen.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Madigan, M., Martinko, J., Parker, J. (2003). Brock biología de los microorganismos.
Décima edición. Editorial Pearson Prentice-Hall. México.

Casado, M., Torrico, G., Medina, M. (2012). Medios de cultivo en un laboratorio de

microbiología. Revisado el 6 de Julio de 2015. Recuperado de
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-
laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf