Universidad

Autónoma de

Baja California

Sur
M I C R O B I O L O G Í A

Rojas Contreras Maurilia

Reporte de práctica II

Grupo A

Departamento de

Agronomía

Turno Vespertino

Yahir Sanchéz Sologuren

 Introducción
En microbiología se usan diferentes tipos de medios, éstos,

varían ampliamente de acuerdo con las necesidades

particulares de los organismos estudiados.

En general se pueden distinguir dos grandes grupos de

medios de cultivo, los químicamente definidos y los

indefinidos o complejos. Los medios químicamente definidos

se preparan añadiendo al agua destilada cantidades precisas

de compuestos orgánicos e inorgánicos altamente

purificados, por ende, se dice que se conoce de ellos la

composición química exacta.

Por otra parte, los medios indefinidos o complejos, contienen

lo necesario para el crecimiento de microorganismos en

forma general, es decir, que no se conocen todos los

componentes de los medios ni se saben las cantidades

exactas en que están presentes. Ejemplos específicos de los

componentes de tales medios son las peptonas o triptonas

que son hidrolizados enzimáticos de proteína animal y el

extracto de levadura que es auto lisado de levadura rico en

vitaminas del complejo

B. También se usan en microbiología medios selectivos y no

selectivos. Los primeros contienen componentes

indispensables para el crecimiento de un tipo de

microorganismos y componentes que inhiben el crecimiento

de otros tipos de microorganismos. Los segundos son los

medios de cultivo con todos los nutrientes

que requieren la mayoría de los microorganismos para

crecer y reproducirse
METODOLOGÍA PARA LA

METODOLOGÍA PARA LA

ESTERILIZACION DE LOS

ESTERILIZACION
MATERIALES DE LOS

MATERIALES:

1. Preparar los materiales de acuerdo a las

indicaciones de la maestra
2. Llevarlos a la Autoclave en una charola.

3. Preparación de la autoclave:
a. Limpiar la charola interior y las paredes.
b. En caso necesario drenar el agua sucia y

adicionarle agua purificada hasta el nivel adecuado.

c. Revisar que el proceso sea el indicado para

materiales.

4. Introducir cuidadosamente los materiales y

cerrar herméticamente la autoclave.

5. Esterilizar a 121° C por 20 minutos
6. Esperar que la presión baje a cero y la

temperatura menor de 50° C para abrir la autoclave

y sacar el material.

7. Guardarlo en un lugar libre de polvo dentro del

área de microbiología para evitar recontaminación.

MATERIALES A PREPARAR

PARA SU ESTERILIZACIÓN

- A) Puntas para micropipetas de 1000 y

100 μl
- B) Pipetas de vidrio de 5 y 10 ml (3 por

equipo)
- C) Tubos de ensaye con tapón metálico

solos para la preparación de diluciones

y medios de cultivo.
- D) Frascos de dilución (100 ml) para

preparar la primera dilución

- E) Microtubos eppendorf (Un vaso de 250

ml. por equipo) para la conservación

de microorganismos.
- F) Cajas de petri de vidrio
- G) Varillas de vidrio para dispersar las

muestras líquidas sobre el agar

- H) Bolsas de plástico de ½ Kg para

transportar muestras
- I) Espátulas para tomar las muestras
- J) Pinzas
- K) Homogeneizador de tejidos
Preparación de Medios de cultivo

y soluciones
Materiales, Reactivos y Equipo:

Materiales estériles
- Matraces Erlenmeyer de 500 y 1000 ml
- 5 Tubos de ensayo
- 2 Pipetas de 5 ml
- 3 Cajas petri
- 1 Frasco de dilución
-
- Medios de cultivo:
- Agar para métodos estándar
- Agar papa dextrosa
- Agar Rojo Violeta Bilis
- Solución amortiguadora de fosfatos (PBS)

pH= 7.2
- Materiales diversos
- Papel de estraza
- Algodón, gasa y piola para hacer tapones
- Masking tape
- Plumón para vidrio permanente
 Metodología de la solución

amortiguadora de fosfatos

(PBS):

1. Pesar por separado 8.5 gr de cloruro de

sodio (NaCl), 1.21 gr de fosfato dibásico

de potasio (K2 HPO4 ) y 0.39 gr de fosfato

monobásico de potasio (KH2 PO4 ).

2. Disolver uno a uno los compuestos pesados

anteriormente, en aproximadamente 600 ml de

agua destilada.
3. Medir el pH de la solución y de ser necesario

ajustarlo a 7.2 con ácido clorhídrico (HCl) o

hidróxido de sodio (NaOH) según sea el caso.

4. Ajustar el volumen a 1 litro y distribuir 90 ml

en un frasco de dilución estéril y 4.5 ml en

tubos de ensaye chicos (5).

5. Esterilizar por 18 minutos en la autoclave a

una presión de 16 lb/pulg2 y 121°C. confirme

que la autoclave este limpia y con el método

requerido
 Metodología de Medios de

Cultivo sólidos

i. Agar marino
ii. Agar para métodos estándar
iii. Agar TCBS para el genero Vibrio
iv. Agar Rojo Violeta Bilis
v. Agar Papa Dextrosa más ácido tartárico
vi. Tubos con agar inclinado Dextrosa Saboraund para

hongos y levaduras
vii. Tubos con agar para siembra por picadura
2. Lea cuidadosamente las instrucciones de cada frasco

de medio de cultivo a preparar.

3. Pese por separado la cantidad de medio indicado en el

frasco para 500 ml de medio.

4. Mida en una probeta 500 ml de agua destilada y

pongala en un matraz erlenmeyer de 500 ml.

5. Disuelva la cantidad pesada y si es necesario ajuste el

pH.
6. hierva o esterilice según se indique en el frasco.
7. Enfrié alrededor de 50° C
8. Vaciar en cajas de petri alrededor de 20 ml por caja o

en tubos para sembrar por picadura o agar inclinado.

9. Permita que se solidifique el medio y se seque la

superficie (toda la noche).

10. Etiquete y guarde en bolsas debidamente cerradas en

el Refrigerador.
 Preparación de medio de cultivo

líquido
Caldo de soya y tripticaseina (TSB)

1. Proceda igual que el punto anterior (Del 1 al 5)

para 25 ml de medio líquido.

2. Distribuya alícuotas de 5 ml de medio en tubos de

ensaye usando una micropipeta.

3. Esterilice de acuerdo a las instrucciones del

frasco.

4. Deje enfriar y guarde en un lugar libre de polvo

dentro del área de microbiología

Preparación de un crioprotector

para almacenar microorganismos

(Glicerol al 40%)

1. Prepare 10 ml de solución diluida al 40% de Glicerol

en un tubo de ensaye de 20 ml y póngalo en la

autoclave para esterilizar por 121° C por 18 min.

OBJETIVO

Adquirir la habilidad para el manejo de equipos, la

preparación de materiales, reactivos, y medios de

cultivo para la observación, el cultivo y la cuantificación

de diferentes tipos de microorganismos.

 Resultados

2. Elabora una lista de los materiales que se

prepararon para esteriliza en la

autoclave.R=*Puntas para micropipeta de 100

microlitros a 10 microlitros. *Pipetas.

*Matraces de vidrio. *Tubos de ensay. *Frascos

de dilución. *Microtubos.*Caja de petri,

*Varillas de vidri. *Bolsa para muestra.

*Espátula. *Homogenizador de tejidos.

3. Cuales son los materiales clave que usas para

proteger de lacontaminación microbiana las

puntas para micropipeta y los materiales de vidrio

como pipetas matraces, tubos de ensaye, etc.

antes de llevarlos a la autoclave.R= *Rollo de

papel estraza. *Gasas. *Cinta indicadora de

esterilización.
4. Como preparas la autoclave para esterilizar el

material. R=Cuando la cinta marca en la

autoclave unas líneas, está indicando la

esterilización.

5. A que temperatura y por cuanto tiempo

esterilizas el material para garantizar que

queda libre de microorganismos.R=121°C

durante 15-16 minutos.

6. Para que se utiliza la solución

amortiguadora de fosfatos (PBS).R=

Mantener el pH y la presión osmótica

lo más parecido al ambiente biológico

natural. Gil, Marielsa. (17 de abril de

2019)
7. Menciona tres medios de cultivo

sólidos que se prepararon en esta

práctica.R=v. Agar Papa Dextrosa más

ácido tartárico, Caldo de soya y

tripticaseina (TSB) y Agar Rosa de

Bengala-Streptomicina
8.Para que se utiliza el agar para métodos

estándar; .R=Para permitir que se

solidifique cuando ya está vaciado en

las cajas de petri.

 9. Investigar la descripción de los

diferentes métodos de esterilización

que se usan en microbiología.R=Están en

la metodología
11. Para que se utiliza el agar Rojo

Violeta Bilis y Agar Bilis Verde

Brillante.R=Son indicadores de

contaminadores de cal.
12. Para que se usan los medios Agar Rosa

de Bengala-Streptomicina y
Agar Papa Dextrosa.R=Es un medio ideal para

la máxima recuperación de hongos (levaduras

y mohos). Las bacterias acompañantes son

inhibidas por el cloranfenicol, antibacteriano

de amplio espectro. Gracias al pH neutro, las

células y esporas dañadas crecen sin

problemas, de ahí su magnífica recuperación

(BRAGULAT et al, MICROB.SEM.8, 1992). Y

el agar papa dextrosa es un medio de cultivo

nutritivo sólido, no selectivo. En él pueden

crecer especies bacterianas y fúngicas, pero

su uso está indicado especialmente para el

aislamiento de hongos filamentosos y

levaduras.
 Conclusiones

Vemos que la metodología de

esterilización, de como preparar una

solución o medios de cultivos es de suma

importancia para poder elaborar esta

práctica. Tener que identificar las

herramientas con las que vamos a

trabajar es escencial para lograr una

buena siembra, al igual que conocer los

medios de cultivos y sus funciones, como

que es lo que nos permite ver al hacer

reacción.Por ejemplo el agar Rojo Violeta

Bilis y Agar Bilis Verde Brillante son

indicadores de contaminadores de cal. Y

otros como Agar Rosa de Bengala-

Streptomicina sabemos que nos ayuda a

la recuperación de los hongos y el Agar

Papa Dextrosa como medio de cultivo

nutritivo.

Fuente biblografica:

2. Practica micro 2 parte 1, 2 y 3 - HD 720p.mov