MICROBIOLOGÌA DE LOS ALIMENTOS

DISEÑO EXPERIMENTAL
MÈTODO DE MILES Y MISRA
PRACTICA #3

EQUIPO 3

BAÑOS GOMEZ DIEGO ENRIQUE 19320321

M.C: MIGUEL ÁNGEL DÍAZ ALDAY

GRUPO: IB1

ACAPULCO, GRO. A 23 DE SEPTIEMBRE DEL 2022

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 INDICE

Introducción…………………………………………………………….........3

Objetivos……………………………………………………………………...3

Marco teórico…………………………………………………………………3

Materiales y Reactivos………………………………………………………6

Metodología………………………………………………………………….7

Bibliografía……………………………………………………………………8

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INTRODUCCION
El método de Miles y Misra o conteo de microorganismos viables en superficie es
una técnica utilizada para calcular el número de unidades formadoras de una
colonia en una suspensión bacteriana. Fue descubierto por Miles y Misra en 1938.
Consiste en colocar un número determinado de gotas de la muestra diluida sobre
las placas de Agar seco, después de que las gotas son totalmente absorbidas por
el Agar, se invierten las placas y se incuban. Después de la incubación se
seleccionan las placas que tengan colonias aisladas en el que se colocaron las
gotas, de preferencia aquellas que contengan menos de 40 colonias por gota (es
ideales de 10 a 20). Esta técnica es relativamente exacta, pero tiene la desventaja
de implicar el uso de una gran cantidad de materiales y tiempo.

OBJETIVOS
Objetivo general:
 Conocer y aprender la técnica de conteo de bacterias descubierta por Miles
y Misra.
Objetivo específico:
 Hacer el conteo de colonias para determinar si la muestra cumple con los
estándares puestos en la Norma Oficial Mexicana correspondiente.

MARCO TEORICO
La mayoría de los alimentos industrializados (excepto, por ejemplo, los productos
fermentados) deben ser considerados como inadecuados para el consumo cuando
contienen un gran número de microorganismos aun cuando estos microorganismos
no sean conocidos como patógenos y no hayan alterado de forma apreciable los
caracteres organolépticos del alimento. Pueden darse varias razones que justifican
esta conducta:
 Algunas cepas de bacterias mesófilas comunes, no generalmente
consideradas como agentes de enfermedades transmitidas por los alimentos
(Proteus, Enterococos y Pseudomonas) han sido señaladas como causa de

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 enfermedad cuando existía un elevado número de células viables en los
alimentos
 Hay que tener en cuenta que las bacterias aerobias mesófilas, como grupo,
pueden ser consideradas generalmente como organismos indicadores,
aunque representan una medida mucho menos precisa y fiable del peligro de
intoxicación alimentaria que otros indicadores de los que hablaremos más
adelante.
 Los recuentos elevados de bacterias mesófilas, por ejemplo, en productos
crudos o no tratados, a menudo están constituidos por la microflora normal o
quizás indican una alteración incipiente del alimento y no un peligro potencial
para la salud del consumidor.
 En determinados tipos de alimentos (embutidos fermentados, col ácida,
queso y otros derivados lácteos) es natural y deseable una gran
multiplicación bacteriana, con una fermentación o maduración paralela del
alimento. En estos productos, un recuento elevado carece prácticamente de
significado, ya que los microorganismos impropios no pueden diferenciarse
generalmente de la microflora propia o normal.

El parámetro de mesofílicos aerobios, más que englobar un grupo taxonómico de

bacterias, se designa arbitrariamente de acuerdo con el método de análisis; en este
caso, se denominan mesofílicos aerobios aquellas bacterias que se desarrollan en
un medio de cultivo nutritivo y sin inhibidores a una temperatura de 33-37 º C durante
24 a 48 horas de incubación. El parámetro de mesófilos aerobios es el más
incluyente de todos los microbiológicos, englobando gran cantidad de bacterias que
ni siquiera son patógenos comprobados o que incluso se encuentren de manera
natural en el alimento como en el caso de productos lácteos fermentados.
Los microorganismos mesófilos en alimentos son aquellos microorganismos que se
desarrollan en presencia de oxígeno libre y a una temperatura comprendida entre
20°C y 45ºC con una zona óptima entre 30°C y 40ºC.
Técnica Miles y Misra
El procedimiento de la técnica es el siguiente:
 Se preparan una serie progresiva de diluciones en serie de la suspensión
bacteriana original, tantas como sean necesarias.
 Los materiales necesarios son una micropipeta correctamente calibrada que
pueda surtir gotas de 0.02ml y 6 placas de agar nutritivo. Estas placas se
dividen en sectores numerados.
 La suspensión o dilución se coloca en forma de gotas (0.02ml) desde una
altura de 2,5 cm; ésta se dispersará aproximadamente en un área de 1.5 a
2.0 cm de diámetro.
 Cada una de las 6 placas tendrá una gota de cada dilución en el sector
correspondiente (numerado)
 Periodo de incubación: 18-24 horas. Posteriormente, se observa su
crecimiento.

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  Los sectores en los que hay más de 20 colonias no muestran confluencia y
son utilizados para realizar los conteos de viabilidad.
 El número de bacterias viable por 0.02ml de una dilución se obtiene
calculando la media de los contajes para cada dilución en las 6 placas.

Normas

Esta norma (NOM-201-SSA1-2015) establece las características y especificaciones

sanitarias que deben cumplir el agua y el hielo para consumo humano que se
comercialice pre envasado o a granel y los establecimientos que se dediquen al
proceso o importación de dichos productos.
Hielo para consumo humano: al producto obtenido por congelación del agua para
consumo humano.

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MATERIALES Y REACTIVOS
 PIPETAS PASTEUR.

 CAJAS PETRI CON 3 DIVISIONES.

 MECHERO

 GASAS

 ALGODON

 CINTA TESTIGO

 CINTA MASKIN

 MARCADOR

 HOT PLAY

 MATRAZ DE 250

 TUBOS DE ENSAYO 15X100

 SOLUCION SALINA

 AGAR PLAIN COUNT

 PORTAOBJETOS

 CRISTAL VIOLETA

 ALCOHOL

 LUGOL

 MUESTRA DE HIELO

 VASO DE PRECIPITADO

 PIPETAS DE 1 ML

 GRADILLA

 SAFRANINA

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METODOLOGIA

1. Se prepara el agar con los cálculos realizados.

2. Esterilizar el material a utilizar (pipetas de 1 mL y pipetas pasteur, matraz con

solución salina 90 mL).

3. Colocar la muestra (hielo) en un vaso de precipitados.

4. Vaciar el agar en las cajas Petri, y dejar la tapa medio abierta para que no se
genere humedad.

5. Se prepara la solución madre agregando 10 mL de la muestra (hielo) al

matraz con 90 mL de solución salina, posteriormente se preparan las
diluciones de 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6

6. Inoculamos cada dilución con ayuda de la pipeta pasteur previamente

esterilizada (se utiliza diferente pipeta para cada dilución) en las cajas Petri.

7. Esperar que absorba (15 min aprox) e incubamos a 35 ± 2°C y esperamos

de 24 a 48 horas

8. Hacer tinción de Gram

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BIBLIOGRAGIA

 (Microlab Industrial - Parámetros - Patógenos - Mesofílicos Aerobios,

s. f.)

 ¿Qué son los AEROBIOS MESOFILOS? (2022, 6 septiembre). Lacteos

Latam.

 (Wikiwand - Método de Miles y Misra, s. f.)

 Bacterias Aerobias mesófilas/6624241.htm Greenberg, A. E., L. S.

Clesceri, and A. D. Eaton (ed.). 1992. Standard methods for the
examination of water and wastewater, 18th ed. American Public Health
Association, Washington, D.C. Marshall, R. T. (ed.).1993. Standard
methods for the examination of dairy products, 16th ed. American
Public Health Association, Washington, D.C. Buchbinder, L., Y. Baris, E.
Alff, E. Reynolds, E. Dillon, V. Pessin, L. Pincus, and A. Strauss.1951.
Studies to formulate new media for the standard plate count of dairy
products. Pub Health Rep. 66:327-340

 Microorganismos mesófilos en alimentos. (2021, 25 marzo). Biosait

Europe - Laboratorio de análisis.