Universidad Mayor de San Andrés

Laboratorio de Microbiología – Medios de Cultivo

Un medio de cultivo es una mezcla de diversos nutrientes que en concentraciones

adecuadas permite el crecimiento de microorganismos, bajo determinadas condiciones
físico-químicas. La composición química de los medios de cultivo es variada pero, de
manera general, todos ellos contienen una fuente de energía (compuesto orgánico o
inorgánico), una fuente carbonada (algunas veces un mismo compuesto puede servir de
fuente de energía y fuente carbonada), sales minerales, vitaminas y agua.

Tipos de medios de cultivo:

Medio de cultivo definido: en estos medios de cultivo se conoce totalmente la

composición química de los elementos que la componen.

Medio de cultivo complejo: es un medio de cultivo que contiene nutrientes de

composición química de naturaleza compleja.

Medio de cultivo; por su composición:

Medio empírico: es un medio que contienen sustancias orgánicas en su

composición.

Medio sintético: es un medio que contienen una composición química definida

cualitativamente y cuantitativamente

Medio semi-sintético: es un medio que en sus componentes aparecen

moléculas de compuestos hidrolizados.
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Medio de cultivo; por su aplicación

Medio mínimo: es un medio de cultivo que contiene una cantidad mínima de

nutrientes capaz de permitir el desarrollo de microorganismos no tan altamente
exigentes, desde el punto de vista nutricional

Medio enriquecido: es un medio que contiene, además, de los nutrientes

básicos de un medio de cultivo sustancias altamente nutritivas, como son, suero,
sangre, etc. (Agar sangre, etc.)

Medio selectivo: es un medio que sólo permite el crecimiento de un grupo de

microorganismos e inhibe el crecimiento de otros tipos de microorganismos (Agar
eosina azul de metileno o EMB), etc.)

Medio diferencial: es un medio que permite revelar características fisiológicas

de los microorganismos (Agar Mac Conkey, etc.)

La mayoría de las bacterias se desarrolla en un medio de cultivo básico que contiene

agua, extracto de carne y peptona (producto soluble que resulta de la autólisis o de una
hidrólisis enzimática de proteínas de origen animal o vegetal). Este medio se denomina
medio nutritivo, y puede ser líquido (caldo nutritivo) o sólido (agar nutritivo).
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I.- OBJETIVOS

• Familiarizar al participante con los términos de medios de cultivo.

• Conocer cómo preparar y diferenciar los medios de cultivo.
• Conocer las técnicas de esterilización de los materiales utilizados y de los
medios de cultivo.

II.- GENERALIDADES:

LOS MEDIOS DE CULTIVO EN MICROBIOLOGIA

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de

Microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es
el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, oxígenos adecuados, así
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado

por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.

Disponibilidad de nutrientes adecuados: P, S, N

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,

como mínimo, nitrógeno atmosférico (nitritos, nitratos, aminas, proteínas), azufre
orgánico e inorgánico, fósforo en fosfatos.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de

carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de
estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de
los factores nutritivos lábiles.
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Presencia de oxígeno

Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxígeno y el dióxido
de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxígeno libre
clasificándose en cuatro grupos:

i.-Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxígeno libre.

ii.-Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxígeno libre.
iii.-Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en presencia
como en ausencia de oxígeno libre.
iv.-Microaerófilas: bacterias que crecen en presencia de pequeñas cantidades
de oxígeno libre.

Energía

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en

presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

Pueden ser: fototroficas y quimiotrofas.

PH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar
que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos
normales.

7- Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y

43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los
saprofítos tienen rangos más amplios.

8- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios.
El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presión como agente esterilizante)
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Medio de cultivo preparado en laboratorio

Caldo Lactosado (500ml)

Es un medio de cultivo sintético, de uso general para el cultivo de las bacterias.

Los ingredientes son:
Lauril triptosa 17.85 gr.
Agua destilada: 500 ml
Medición
Se pesan los ingredientes en una balanza digital, a la cantidad indicada.
También se debe medir el agua: 500 ml.

Disolución
Primero se vierte 250ml en un frasco Erlenmeyer, luego el polvo y con el restante agua
se lava el recipiente donde estuvo el polvo.
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Ebullición
La solución se lleva a ebullición, durante 15 minutos, moviéndolo cada un minuto.

Fraccionamiento
La solución se debe repartir en tubos, cada tubo 10ml, con la ayuda de una pipeta, una
vez repartida la solución, se pone a cada tubo una campana de Durham,
posteriormente se tapan herméticamente los tubos.

Almacenamiento y esterilización
La esterilización se lo realiza mediante el Autoclave.
El almacenamiento es de 48 horas.
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MATERIAL PARA LA PRÁCTICA

• 50 Tubos de ensayo esterilizados.

• 1 frasco Erlenmeyer de vidrio de 1000 ml.
• Agua destilada 500 ml
• 1 pipeta
• Espátula
• Balanza digital
• 1 Probeta graduada
• 1 pipeta volumétrica
• Estufa eléctrica