Instituto Politécnico Nacional

Unidad Profesional Interdisciplinaria de

Biotecnología

Laboratorio de Biotecnología Molecular

Profesoras:
Flor Selene Villalobos Escobedo
Aida Margarita Zamora Contreras

Bitácora: Práctica 3 “Extracción de ADN”

Alumno: Cano Pérez Jeimy Melanie

Equipo: 5

Fecha de entrega: 12/10/2022

Objetivo: Extraer ADN de diferentes muestras por métodos físico-químicos.

Metodología

Diagrama 1. Metodología de extracción de ADN genómico

Tabla de reactivos
Reactivo Función
Acetato de Sodio (3M) Funciona como buffer. Nos permite realizar la lisis para
liberar al ADN del interior de la célula.
Etanol absoluto Al tener una muestra de volumen pequeño para precipitar el
ADN se recomienda hacer la extracción en frío para poder
recuperar la mayor cantidad de ADN posible. Se usa etanol
como solvente para evitar la co-precipitación de las sales.
El alcohol disminuye la constante dieléctrica
Etanol 70% del solvente acuoso, provocando una disminución en la
solubilidad del ADN, que en
presencia de altas concentraciones de sales, precipita. Esto
permite concentrar el ADN.
Fenol (equilibrado con Su función es formar las fases orgánica y acuosa,
Tris 1M pH 8.0). desnaturalizar proteínas e inactivar nucleasas.
Cloroformo
Agua desionizada Su función es hidratar el ADN para mantenerlo en solución.
TE (pH 8.0) El buffer TE aumenta la estabilidad del ADN en muestras
 almacenadas a largo plazo o de uso frecuente, pues inhibe
DNasas presentes en la muestra.
Medio LB líquido Contiene peptona de caseína y extracto de levadura que
proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el
desarrollo óptimo de la mayoría de los microorganismos.
Tabla 1. Función de reactivos

Cuestionario
1. ¿Cuál es la función de cada uno de los reactivos y pasos que se llevan a cabo
durante la práctica?
La función de cada uno de los reactivos usados en la práctica se encuentra en la
Tabla 1 y la metodología en el Diagrama 1.
2. ¿Por qué precipitan los ácidos nucleicos al adicionar etanol? ¿Qué otro alcohol
puede emplearse?
Los grupos fosfato debido a su carga negativa tienden a repelerse, esto permite
disolver el ADN en soluciones acuosas y formar una capa hidratante alrededor de la
molécula, sin embargo, al agregar etanol esta capa hidratante se rompe, quedando
expuestos los grupos fosfato, favoreciendo la unión con cationes como Na+ (sales),
estas reducen las fuerzas repulsivas entre las cadenas de nucleótidos y permiten que
el ADN se precipite. También puede emplearse isopropanol para precipitar ácidos
nucleicos
3. ¿Cuándo es mejor resuspender el ADN con agua y cuándo con TE?
Cuando se busca almacenar las muestras de ADN por un periodo largo de tiempo es
preferible utilizar el TE ya que aumenta la estabilidad del ADN.
Por el contrario, cuando se busca almacenar la muestra por un periodo corto de
tiempo es mejor resuspender el ADN en agua desionizada.
4. ¿Qué utilidad tiene obtener todo el material genético de una célula?
Al obtener el material genético podemos realizar distintos análisis genéticos
mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) como:
 Determinar la presencia de genes marcadores en organismos genéticamente
modificados.
 Determinar la presencia de mutaciones asociadas a enfermedades genéticas.
 Determinar la presencia de ADN o ARN perteneciente a microorganismos o
virus.
5. ¿En qué organelos de las células eucariontes es posible encontrar ADN?
En células eucariotas el ADN se encuentra principalmente en el núcleo de la célula,
sin embargo, también puede encontrarse en las mitocondrias.
6. ¿En qué difieren los métodos de obtención de ADN? si la muestra es: una
escena del crimen, un hueso de dinosaurio, un cultivo bacteriano, tejido vegetal
y tejido animal
 Escena del crimen: Los biólogos forenses extraen el ADN de las muestras
en laboratorios especializados. Cada país decide la metodología a utilizar en
 sus laboratorios para analizar los marcadores genéticos, conocidos como
repeticiones cortas en tándem.
 Hueso de dinosaurio: En la obtención de ADN de una muestra de hueso es
necesario realizar ciertos pasos previos como el lavado de la muestra, la
pulverización y una desmineralización. Posterior a esto se puede realizar el
método de extracción de ADN.
 Cultivo bacteriano: Para la extracción de ADN bacteriano se pueden
utilizar diferentes metodologías como: salting, que utiliza altas
concentraciones de sales para la lisis celular, el uso Chelex 100 que es una
resina quelante que captura iones metálicos polivalentes en soluciones o
también la metodología fenol-cloroformo o extracción con solventes
orgánicos.
 Tejido vegetal: En este caso primero debe romperse la pared celular y
posteriormente la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
célula. Después debe romperse la membrana nuclear para dejar libre al
ADN.
 Tejido animal: Existen distintos métodos de extracción de diferentes tipos
de tejidos, como: la hidrólisis con proteinasas, exposición a ultrasonidos o
usando detergentes o álcalis.

Referencias
Pregunta 1: Falcón, L. I. (s/f). Las herramientas moleculares.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/530/cap16.pdf
Pregunta 2: Abyntek. (2017). Precipitación de DNA con etanol vs isopropanol. Abyntek.
https://www.abyntek.com/precipitacion-de-dna-con-etanol-vs-isopropanol/

Pregunta 3: Matzumura, P. D., Núñez, L. G., Yáñez, A. L., & Rivera, N. Y. E. (2013). Técnicas
Básicas de Biología Molecular. http://publicacionescbs.izt.uam.mx/DOCS/biomolec.pdf

Pregunta 4: Cribb, P. (2019). Métodos de extracción y purificación de ácidos nucleicos.

https://docs.google.com/presentation/d/1K7bP245wLeNoo5quy8b0ABH5JOEg_XnD/edit?
usp=sharing&ouid=109600488075474591264&rtpof=true&sd=true

Pregunta 5: Genetic Alliance. (2009). Información Genética Básica. National Library of

Medicine. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK132204/

Pregunta 6:
 ADN. (s/f). INTERPOL. https://www.interpol.int/es/Como-trabajamos/Policia-
cientifica/ADN
 ICMP. (2022). Manual sobre Métodos de Extracción de ADN de Restos Óseos
Humanos No Identificados.
https://www.icmp.int/wp-content/uploads/2022/08/Handbook-Mexico.pdf
 Cuan, A. G., & Cárdenas, A. M. (2018). Evaluación de métodos de extracción de
ADN bacteriano en muestras fecales de pacientes diagnosticados con infección por
Helicobacter pylori. Revista Biociencias, 13, 7–16.
 Giménez, R., & Gogorcena, Y. (2013). DESCUBRE EL ADN DE LAS FRUTAS QUE
COMEMOS.
https://digital.csic.es/bitstream/10261/94991/1/GogorcenaY_NochInv_2013.pdf
 González, N., Rodríguez, N., Torres, W., O’Callaghan, J., & De Jesús, R. (2011).
PROTOCOLO SENCILLO PARA LA EXTRACCiÓN DE ADN GENÓMICO DE
TEJIDO DE OREJA DEL RATÓN Y LA RATA, USANDO LA ENZIMA
BROMELINA. Revista Científica, 21.
https://www.redalyc.org/pdf/959/95918239007.pdf