EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE MATERIAL VEGETAL (PIMENTÓN)

Cortés D.F, Parra D.F.

Biotecnología Animal 2018-1. Departamento de Producción Animal. Facultad de Medicina

Veterinaria y de Zootecnia. Universidad Nacional de Colombia.

Isolation and Visualization of Nucleic Acid with Homemade Apparatus

RESUMEN
Se tomaron muestras de tejido vegetal en este caso de Pimentón para extraer ADN y
posteriormente realizar una electroforesis para visualizar los diferentes fragmentos de ADN
presentes en la muestra y cuan grandes son respecto a otros, además, determinar el tamaño
absoluto de los fragmentos de ADN examinados en el laboratorio. Cada grupo de estudiantes
de la materia de Biotecnología Animal, realizó los correspondientes procedimientos para
luego comparar con las demás muestras obtenidas. Cabe aclarar que estas pruebas se
realizaron netamente con fines académicos. Se realizó en el laboratorio de morfofisiologia
animal de la facultad de medicina Veterinaria y de Zootecnia de la Universidad Nacional.

ABSTRACT
Samples of plant tissue were taken in this case of Pimentón to extract DNA and then perform
an electrophoresis to visualize the different DNA fragments present in the sample and how
large they are with respect to others, in addition, determine the absolute size of the DNA
fragments examined at the laboratory. Each group of students in the field of Animal
Biotechnology, made the corresponding procedures to then compare with the other samples
obtained. It should be noted that these tests were conducted clearly for academic purposes. It
was carried out in the animal morphophysiology laboratory of the Faculty of Veterinary
Medicine and Zootechnics of the National University.

INTRODUCCIÓN
El presente informe contempla una serie de pasos que describiremos detalladamente a
continuación y la publicación conceptual de cada uno de los avances que se realicen en el
proceso de extracción. tras la sustracción de tejido proveniente de un Pimentón, se obtiene la
extracción del ADN, ésta requiere un orden de etapas elementales de separación en donde se
retira material que se encuentra alrededor del ADN para lograr su liberación en forma de
mota para su posterior separación. En el siguiente laboratorio, seguiremos minuciosamente
pasos adecuados para su extracción y visualización.

La extracción de ADN (ácido desoxirribonucleico) es un proceso vital con muchas

aplicaciones científicas. En la investigación y la medicina, sus usos incluyen secuenciación
del ADN, la detección de los virus y las bacterias, y la investigación de enfermedades y
trastornos con base genética. En el campo de la ciencia forense, es utilizado para la
identificación de los muertos y los vivos, así como el análisis de la escena de crimen. A pesar
de sus resultados sofisticados, la extracción de ADN es en realidad muy simple, y las técnicas
de extracción básicas funcionan igual de bien en un laboratorio de investigación o en casa. La
extracción de ADN comienza con la obtención de una muestra de ADN. Dado que todos los
organismos vivos contienen ADN, las opciones disponibles para la muestra son
prácticamente infinitas, y la elección por lo general se relaciona directamente con el tema del
objeto de estudio. El ADN humano es fácil de obtener por pequeños toques en el interior de
la mejilla con un hisopo de algodón. Las muestras de plantas pueden ser adquiridas cortando
una sección del material de origen.
El ácido desoxirribonucleico es una molécula que permite la continuidad y evolución de las
especies, el ADN almacena la información genética codificada, está presente en todas las
células de los seres vivos, por lo que siempre tiene la misma composición (acidos fosforicos,
bases nitrogenadas y pentosas). Para la extracción de las células donde se halla confinado, se
debe llevar a cabo una serie de pasos previos analiticos y diagnosticos los cuales llevaremos a
cabo, junto con ciertas precauciones de contacto que evitaran la contaminación por material
biológico, microbiológico y químico.

METODOLOGÍA
Materiales
● Pimentón
● Detergente y Sal común, se usaron en conjunto para crear una solución de lisis
● Macerador, se usó para homogeneizar la muestra
● Etanol refrigerado, se usa para precipitar y recuperar la mayor cantidad de ADN de la
muestra
● Centrifuga, la fuerza centrífuga deja el ADN difundido en una capa de la solución por
encima del exceso de material más pesado.
● Micropipetas
● Tubos de eppendorf
● Camara de electroforesis,La cámara de electroforesis usa una técnica para la
separación de moléculas según la movilidad de éstas en un campo eléctrico. La
separación se realizó sobre un gel de agarosa.
● Agarosa, el gel de agarosa se comporta como un tamiz molecular y permiten separar
moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de DNA de
diferente tamaño van a emigrar de forma distinta en una electroforesis en gel de
agarosa
● Fluorocromo SYBR Green, se usa como colorante para la cuantificación y
visualización de ADN en la electroforesis
● TBE 1X, de uso frecuente en electroforesis, en especial en gel de agarosa para separar
ácidos nucleicos.
● TE, el propósito del tampón TE es solubilizar el ADN o el ARN, al mismo tiempo que
lo protege de la degradación.
Figuras 1 y 2. Muestra de pimentón macerado y con la solución de lisis en el tubo de eppendorf, para posteriormente
centrifugar la muestra.

Figuras 3, 4 y 5. Centrifugadora; después de centrifugar la muestra se retiró la solución de lisis, después de que la muestra
estaba seca se agregó Etanol, en el cual se puede observar una pequeña “mota” que en nuestro caso es una hebra de ADN.
Figuras 6 y 7. Fluorocromo SYBR Green que se usa como colorante para la cuantificación y visualización de ADN en la
electroforesis; Tampón TBE 1X, de uso frecuente en electroforesis, en especial en gel de agarosa para separar ácidos
nucleicos.

Figuras 8 y 9. La cámara de electroforesis usa una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de éstas en un
campo eléctrico. La separación se realizó sobre un gel de agarosa.

Procedimiento Experimental
Primero se extrajo una muestra del material vegetal (Capscium annuum), su introdujo la
muestra en un tubo eppendorf junto con 500 ųl de solución lisis, la cual consistió en una
solución de 10 ml de detergente de cocina y una cucharada sopera de NaCl en 100 ml de
agua. Se homogeneizó la muestra con la ayuda de un tubo macerador, se incubaron los tubos
a 60ºC por 15 min en un baño maria. Se centrifugó la muestra en la microcentrifugadora
durante 5 min, se filtró y se transfirió el sobrenadante a un nuevo tubo, agregando etanol en
una proporción de 2:1, revolviendo la solución y descartando el sobrenadante para
posteriormente secar la muestra. Se agregaron 200 ųl de solución XTE, se agregó TBE 1x a la
cámara de electroforesis y posteriormente se agregaron 2 ųl de fluorocromo SYBR Green
mezclado con 10 ųl de muestra, por último se aplicó el marcador de peso molecular conocido
lambda DNA Hind III.

La extracción de ADN de una muestra se basa en el hecho de que los iones salinos son
atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción
de la célula. Se empieza por lisar (romper) la célula mediante un detergente, este hace que la
célula vacié su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN
en ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares:
carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción, todas estas se habrán
fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas del ADN por acción del detergente. solo
queda, por tanto, extraer el ADN de esa muestra de tampón y detergente, para lo cual se
utiliza etanol

RESULTADOS
Referencias
Buitrago, J. M. (2010). Electroforesis. Técnicas Y Métodos De Laboratorio Clínico, 211-217.

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Sepel, L. M., & Loreto, E. L. (2002, 09). Isolation and visualization of nucleic acid with

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Biology Education, 30(5), 306-308. doi:10.1002/bmb.2002.494030050122