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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS


ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA

➢ ASIGNATURA: Biología Molecular


➢ DOCENTE: MORENO HINOJOSA, Miriam
➢ ESTUDIANTE: RAMOS VIZCARRA, Katherine Liseth
➢ CÓDIGO: 02192109
➢ GRUPO DE PRACTICA: Martes 10 a 1 p.m
➢ FECHA: 05/10/2021

AYACUCHO-PERÚ
2021
I. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál es el fundamento para el uso del CTAB?
Si queremos aislar el ADN de una muestra de origen vegetal, se utiliza el
CTAB, es bastante útil al eliminar compuestos fenólicos, carbohidratos y una
serie de trazas que son contaminantes e inhibidores para una buena PCR.
Las células vegetales pueden liarse con el detergente CTAB, que forma un
complejo insoluble con los ácidos nucleicos en medio hipo salino. De este
modo los polisacáridos, los compuestos fenólicos y los demás contaminantes
permanecen en el sobrenadante y pueden eliminarse por lavado.

2. ¿Qué función desempeña el β-mercaptoetanol el protocolo de obtención


de ADN de células vegetales?
El mercaptoetanol es un agente reductor, que se encarga de eliminar los
puentes disulfuro y reduce los radicales hidroxilos.

3. ¿Cuáles son las propiedades del nitrógeno líquido, por lo que se utiliza
en la obtención de ADN a partir de células vegetales?
La técnica del congelado y triturado con nitrógeno líquido se va optimizando
con la práctica y de acuerdo con cada tipo de muestra. El nitrógeno líquido
actúa rompiendo las paredes celulares de las células vegetales, liberando
así, el contenido celular que se encuentra en dicha célula.

4 ¿Cuál es la diferencia entre ADN plasmídico y cromosomal


bacteriano?

ADN Plasmidico ADN Cromosomal


Su replicación es independiente Forma el nucleoide.
del ADN genómico. Tiene un origen de replicación.
Varían de tamaño. Tiene entre 4000 a 5500 genes.
Es circular Es circular
Su origen de replicación es
múltiple.
5. ¿Qué cuidados se debe tener en cuenta en el proceso
de extracción de ADN de
bacterias?

1. Usar soluciones y material estéril.


2. Antes de empezar a trabajar, limpiamos todo el sitio y el equipo de
trabajo con una solución de lejía al 10% o 70% de etanol.
3. A la hora de abrir las muestras, abrimos y cerramos con cuidado.
4. Cuando hacemos uso del nitrógeno líquido, es recomendable evitar
con el contacto de la piel y los ojos.

6. Explicar el fundamento de cada uno de los reactivos utilizados en el proceso


de extracción de ADN.

Uso de la proteinasa K y el dodecilsulfato de sodio (SDS)


El procedimiento conocido como PK-SDS por sus siglas en inglés proteinase K -
sodium dodecyl sulfate, es uno de los más usados para la extracción de ADN ya
que la digestión de la muestra se puede realizar con proteinasa K que es activada
por el dodecil sulfato de sodio. La proteinasa K inactiva las DNAsas presentes en el
lisado celular usando detergente aniónico el SDS. La proteinasa K también es usada
en otros de los métodos para la digestión de las proteínas y otros contaminantes
del lisado celular.

Fundamento del lisado y purificación con un detergente iónico.


Método del CTAB
Este es un procedimiento básico para extraer ADN de vegetales, donde
un detergente aniónico puede romper la pared celular y así se produce la
lisis de las células. El uso de detergentes aniónicos no solo se restringe
a la extracción de ADN vegetal, puede ser usad o para ADN genómico de
bacterias y otros tipos de organismos. Un ejemplo de este método, quizás
el más conocido, es el uso de CTAB (bromuro de cetil trimetil amonio)
como detergente para lograr la lisis. El CTAB además, en presencia de
EDTA como agente que latante y TRIS-HCl como tampón, forma complejos
insolubles con el ADN. Luego se extraen los residuos orgánicos con
cloroformo, para separar posteriormente el ADN por precipitación con
etanol. Si se quiere evitar el uso de disolventes orgánicos se puede llevar
a cabo el método del CTAB separando directamente los complejos
insolubles formados con el ADN del sobrenadante donde han quedado
disueltos el resto de componente s celulares. Estos complejos se
resuspenden en disolución salina y se adiciona posteriormente alcohol y
RNAsa, logrando que precipite el ADN con un grado de pureza aceptable
para muchas aplicaciones.
II. CONCLUSIÓNES
Durante la practica aprendimos sobre el proceso de extracción de
células vegetales, fundamento, materiales y reactivos. Además,
aprendimos a diferenciar los procedimientos entre la extracción de
ADN de una célula de origen vegetal de células epitelial, bacterias; ya
que esta presenta pared celular rígida compuesta de celulosa.

También comprendimos sobre el rol que cumplen los reactivos,


detergentes en la extracción de ADN. El protocolo descrito es sencillo,
reproducible y nos permite obtener ADN genómico de alta pureza en
de las células de origen vegetal. Por tanto, tal como ha sido
demostrado experimentalmente, el ADN purificado es apropiado para
realizar estudios moleculares.

III. BIBLIOGRAFÍA

o Bermúdez-Guzmán, M. D. J., Guzmán-González, S., Orozco-Santos, M.,


Velázquez-Monreal, J. J., Buenrostro-Nava, M. T., & Michel-López, C. Y.
(2017). Optimización de un protocolo para aislamiento de DNA de hojas
de Saccharum officinarum. Revista mexicana de ciencias agricolas, 7(4),
897.
o CTAB (Bromuro de hexadeciltrimetilamonio). (s/f). Probiotek.com.
Recuperado el 5 de noviembre de 2021, de
https://www.probiotek.com/productos/reactivos/detergentes/ctab/
o Extracción de DNA de células vegetales. (s/f). Mhmedical.com.
Recuperado el 5 de noviembre de 2021, de
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1496&secti
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o Nelly. (2015, septiembre 6). ¿Cómo extraer el ADN de un
vegetal? Educaycrea.com. https://www.educaycrea.com/2015/09/como-
extraer-el-adn-de-un-vegetal/
o (S/f-a). Org.pe. Recuperado el 5 de noviembre de 2021, de
http://www.scielo.org.pe/pdf/rsqp/v79n3/a03v79n3.pdf
o (S/f-b). Sld.cu. Recuperado el 5 de noviembre de 2021, de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0375-
07602004000300010

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