LABORATORIO 9

EXTRACCIÓN DE ADN HUMANO A PARTIR DE SANGRE TOTAL

NOMBRE: Danna Carolina Cabrera Díaz
CÓDIGO: 18182013
GRUPO: A2
FECHA: 01-03-2019

INTRODUCCIÓN
El ADN es un ácido nucleico que contiene las instrucciones genéticas usadas en el
desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos y algunos virus;
también es responsable de la transmisión hereditaria. La función principal de la
molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de información para
construir otros componentes de las células, como las proteínas y las moléculas de
ARN.
El estudio del ADN es importante para analizar el contenido y función génica
mediante la aplicación de técnicas de biología molecular; esto comienza en la
extracción del ADN cuyo objetivo principal es romper las membranas celular y
nuclear, y eliminar las proteínas para obtener un ADN puro.
Por lo tanto este laboratorio resulta de gran importancia para comprender de
manera práctica la importancia que tiene el ADN y la importancia de analizarlo,
como se hizo en el laboratorio al realizar el método de salting out para la
extracción del ADN genómico, así como también nos enseñaron otros métodos
como: reactivos orgánicos fenol-cloroformo, resina CHELEX y métodos
comerciales.

OBJETIVOS
 Mejorar la comprensión de conceptos sobre el ADN y sus técnicas de
extracción.
 Aplicar las normas de bioseguridad en la extracción de ADN.
 Evidenciar la metodología para la extracción del ADN.
 Aplicar el método salting out para extraer el ADN del plasma sanguíneo.
 Obtener una muestra de ADN visible.

PALABRAS CLAVES
ADN, buffer, extracción, genes, reactivos, salting out.
METODOLOGÍA
 Se verificó que todos los estudiantes cumplieran con las normas de
bioseguridad para así dar inicio a la práctica de laboratorio.
 Se dividió el salón en 4 grupos de 3, máximo 4 estudiantes.
 Se eligió un voluntario por grupo para realizar la extracción de sangre.
 Se tomó 1mL de sangre en un tubo con EDTA y se homogenizó de manera
rápida para evitar la coagulación de la misma.
 La muestra de sangre se pasó a un tubo de polipropileno, agregamos buffer
de lisis l hasta 5mL, tapamos y mezclamos suavemente por inversión unas
10 veces.
 Centrifugamos durante 5 minutos a 3000 rpm
 Retiramos el tubo sin desprender el botón celular que se encontraba en el
fondo del tubo. Adicionamos 450 μL de buffer de lisis II, 13 μL de SDS 10%
y 100 ul de perclorato de sodio 5M.
 Mezclamos en vortex por 10 segundos.
 Agregamos 200 μL de NaCl 6M, mezclamos en vortex y centrifugamos
durante 5 minutos a 3000 rpm.
 Pasamos el sobrante a un recipiente.
 Agregamos 700 μL de isopranol, se tapó el tubo y se mezcló hasta
visualizar las fibras de ADN
 Tomamos el tubo de eppendor de 1,5 mL con 100 μL de agua destilada.
Marcamos con nombres.
 Tomamos el ADN y lo introducimos en la bala que contenía el etanol al 70%
y lavamos el ADN con la solución.
 Depositamos el ADN en agua.
 Organizamos los materiales y realizamos conclusiones.

RESULTADOS
Debido a la preparación que nos exigen nuestras docentes, para antes de entrar a
un laboratorio, todos logramos adquirir conocimientos previos sobre la práctica a
realizar y esto nos permite tener resultados satisfactorios en los procedimientos,
en el caso del laboratorio 9, se logró obtener de manera exitosa el ADN en cada
grupo y así identificar como poder extraerlo de manera acertada del plasma
sanguíneo aplicando la técnica explicada en nuestro manual: salting out, la cual
permite una extracción de ADN puro y de coloración blanca con forma de malla,
permitiéndonos así saber cómo los laboratorios logran hacer las pruebas de ADN
y también como asociaciones dedicadas a la investigación realizan procesos como
estos, los cuales le ayudan a obtener los avances en la medicina.
DISCUSIÓN
El método de salting out es el que permite extraer ADN genómico y tiene varios
pasos, como el homogenizar el material que debe ser utilizado de manera
mecánica en presencia de detergentes. Mediante esta combinación de acción
mecánica y detergentes se rompen las distintas membranas de la celula y se
libera el ADN al medio de lisis. Por otra parte, los detergentes, además, tienen una
actividad inhibitoria sobre algunas proteínas de tal manera que impiden la acción
de las enzimas que degradan el ADN liberadas al romperse los lisosomas de la
celula. A continuación se eliminan los grandes fragmentos de restos de tejido y
células por medio de una centrifugación, recuperándose el ADN y las proteínas en
la solución acuosa. Finalmente se recupera el ADN por medio de una precipitación
alcohólica con etanol o isopropanol.
En esta parte de mi informe resalto el método de salting out, ya que no solo fue el
que utilizamos, si no también luego de investigar a fondo sobre los demás
métodos, se puede observar como es uno de los más eficientes y rápidos en
obtener los resultados requeridos, también se evidencia que es un método
sencillo, adecuado para una práctica estudiantil.

CONCLUSIONES
En este laboratorio pudimos aprender y observar cómo se aplica una de las
prácticas para extraer ADN, para el cual hay muchos métodos, pero el salting out
es uno de los más sencillos y muy acertado para la práctica con estudiantes,
también podemos observar como es de los mejores y los más utilizados ya que
conserva la muestra por más tiempo.
Otra conclusión de este laboratorio es que existen muchos métodos de extracción,
como lo dije previamente, pero de acuerdo a lo que se necesite, podemos analizar
cada uno y ver cuál es el más eficiente para cumplir las necesidades de quien lo
requiere.

INVITACIÓN AL ESTUDIANTE
1. ¿Cuál es el fundamento de la técnica salting out para la extracción del
ADN?
La técnica de salting out es de tipo inorgánica y sirve para la extracción
ADN, esta requiere de varios pasos
 Homogenización del material empleando de manera mecánica en
presencia de detergentes. Estos detergentes, tienen actividad
inhibidora sobre algunas proteínas de tal manera que impiden la
acción de las enzimas que degradan el ADN.
 2. ¿Qué aplicación tiene el ADN en medicina?
Toda la información génica está en el ADN, por ejemplo de él depende que
se forme cáncer, ya que esta enfermedad se da a causa de un mal
funcionamiento de la misma, y el estudio de la misma nos puede llevar a la
cura de esta enfermedad.

El ADN es quien rige cómo se comporta la o las células del organismo, y

cuando esta molécula está mal, hay que corregirla para que la célula y el
organismo corrijan y mejore su salud general.

3. ¿Qué muestras son utilizadas para extraer ADN?

 Sangre: glóbulos blancos
 Semen: únicamente espermatozoides
 Saliva: sobre el frotis del carrillo
 Cabello: folículo piloso
 Hueso
 Diente: molar, sin endodoncia
 Tejido

BIBLIOGRAFIA
 http://cien-temas.blogspot.com/2012/05/aplicaciones-del-adn-en-la-
medicina.html
 http://www.scielo.org.ar/pdf/recyt/n14a01.pdf
 http://iio.ens.uabc.mx/hojas-seguridad/edta_fds.pdf
 Manual de laboratorio Biociencias II Medicina
FICHA DE SEGURIDAD
EDTA o Acido Tetracetico Etilen Diamina
Fórmula química: C10H14N2Na2O8.2H2O
Frases H y P: N/A
Propiedades químicas: sólido blanco e inoloro.
Propiedades físicas: maneja un pH de 4-5, su punto de fusión es 248°C, su
solubilidad es de 100 g/l en agua a 20°C
Riesgos: evitar contacto con ojos, nariz, piel o boca pues puede provocar
irritabilidad o alergia, se debe manipular con la protección necesaria, es decir, con
guantes, gafas y bata.
Pictograma: N/A

Cloruro de Sodio
Fórmula química: NaCl
Frases H y P: persistente, bioacumulable y tóxico.
Propiedades químicas: sólido, incoloro, inoloro de textura dura.
Propiedades físicas: tiene un punto de fusión ente 800 y 802°C, su punto de
eburrlición está por encima de 1450°C, maneja una densidad de 2,17g/cm3 a
20°c, hidrosoluble y mantiene un pH ente 5 y 7.
Riesgos: No presenta riesgos aparentes.
Pictograma: N/A
Isopropanol
Fórmula química: (CH3)2 CHOH
Frases H y P: Líquido y vapores muy inflamables, provoca irritación ocular grave,
puede provocar somnolencia o vértigo, mantener alejado de fuentes de calor,
chispas, llama abierta o superficies calientes. Mantener el recipiente
herméticamente cerrado, almacenar en un lugar bien ventilado, mantener en lugar
fresco.
Propiedades químicas: líquido incoloro, claro, de olor característico a alcohol para
fricciones.
Propiedades físicas: miscible en agua, alcohol, éter y cloroformo, con un peso
específico de 0.79, su punto de ebullición es 82°C y su punto de fusión es -89°C,
su densidad es de 0,786 g/cm3 y su presión a vapor es 32,4 mmHg.
Riesgos: líquido y vapor inflamables, puede provocar daños sise inhalase o
tragase, evitar contacto con ojos, nariz, piel o boca pues puede provocar irritación
o ceguera. Afecta el sistema nervioso central, puede ser nocivo si se absorbe a
través de la piel. Manipular con medidas de protección como guantes, bata, gafas
etc…
Pictograma:
EVIDENCIAS FOTOGRAFICAS