Microscopio electrónico

Un  microscopio electrónico  es un  microscopio que utiliza

un haz de  electrones  acelerados  como fuente de
iluminación.  Como la longitud de onda de un electrón puede
ser hasta 100.000 veces más corta que la de los fotones de luz
visible , los microscopios electrónicos tienen un  poder de
resolución mayor que los microscopios ópticos y pueden revelar
la estructura de objetos más pequeños.  Un  microscopio
electrónico de transmisión de barrido  ha logrado una
resolución superior a 50  pm en el modo de imagen de campo
oscuro anular [1] y aumentos de hasta aproximadamente 10 000
000×, mientras que la mayoría  de los microscopios
ópticosestán limitados por  difracción  a una resolución de
aproximadamente 200    nm  y aumentos útiles por debajo de
2000 ×.

Los microscopios electrónicos utilizan campos magnéticos

moldeados para formar sistemas  de lentes ópticas de Un microscopio electrónico de
electrones  que son análogos a las lentes de vidrio de un transmisión moderno
microscopio de luz óptica.

Los microscopios electrónicos se utilizan para investigar

la ultraestructura de una amplia gama de muestras biológicas e
inorgánicas, incluidos  microorganismos  ,  células
,  moléculas  grandes  ,  muestras de  biopsia
,  metales  y  cristales  .  Industrialmente, los microscopios
electrónicos se utilizan a menudo para el control de calidad y
el  análisis de fallas  .  Los microscopios electrónicos modernos
producen micrografías electrónicas utilizando cámaras digitales
especializadas y capturadores de  fotogramas  para capturar las
imágenes.

Una imagen de una hormiga en un

Historia microscopio electrónico de barrido

Fundamentos teóricos

En 1924, el físico  Louis de Broglie  (  Premio Nobel  , 1929)

afirmó que los electrones moderadamente acelerados deben
mostrar una onda asociada , y calculó su longitud de onda , que
sería del orden de los  rayos X  en el  espectro
electromagnético  .  [2]  Esto fue confirmado posteriormente por
el  experimento de Davisson-Germer  en
[3]
1927,    proporcionando los principios teóricos que hacen
posible el microscopio electrónico.

Si bien los rayos X no se pueden desviar por medios ópticos, los

electrones en movimiento sí se pueden, mediante el uso de
campos electromagnéticos como una especie de  lentes  , que Diagrama de un microscopio
pueden disponerse como en un  microscopio óptico  estándar electrónico de transmisión
. Un dispositivo electrónico debidamente construido podría, entonces, ser capaz de enfocar el haz
de electrones en una muestra para estudiarla.

Desarrollos prácticos

En 1926, Hans Busch desarrolló la lente electromagnética.

Según  Dennis Gabor  , el físico  Leó Szilárd  intentó en 1928

convencerlo de que construyera un microscopio electrónico,
para el que había presentado una patente.  [4]  El primer
prototipo de microscopio electrónico, capaz de un aumento de
400 aumentos, fue desarrollado en 1931 por el físico  Ernst
Ruska  y el ingeniero eléctrico  Max Knoll  en la Berlin
Technische Hochschule o la Universidad Técnica de
Berlín.  [5]  El aparato fue la primera demostración práctica de
los principios de la microscopía electrónica.  [6]  En mayo del
mismo año,  Reinhold Rudenberg  , director científico
de  Siemens-Schuckertwerke, obtuvo una patente para un
microscopio electrónico.  En 1932, Ernst Lubcke de  Siemens &
Halske  construyó y obtuvo imágenes de un microscopio
electrónico prototipo, aplicando los conceptos descritos en la
patente de Rudenberg. [7]

Al año siguiente, 1933, Ruska construyó el primer microscopio

electrónico que excedía la resolución alcanzable con un
Microscopio electrónico construido
microscopio óptico (de luz). [6] Cuatro años más tarde, en 1937,
por Ernst Ruska en 1933
Siemens financió el trabajo de Ernst Ruska y Bodo von Borries ,
y empleó a  Helmut Ruska  , el hermano de Ernst, para
desarrollar aplicaciones para el microscopio, especialmente con especímenes
biológicos.  [6] [8]  También en 1937, Manfred von Ardenne fue pionero en el microscopio electrónico
de barrido  .    Siemens produjo el primer microscopio electrónico comercial en 1938.  [10]  Los
[9]

primeros microscopios electrónicos norteamericanos se construyeron en 1930, en lala Universidad

Estatal de Washington  por Anderson y Fitzsimmons  [11]  y la  Universidad de Toronto  , por  Eli
Franklin Burton  y los estudiantes Cecil Hall,  James Hillier  y Albert Prebus.  Siemens produjo un
microscopio electrónico de transmisión (TEM) en 1939.  [12] Aunque los microscopios electrónicos
de transmisión actuales son capaces de aumentar dos millones de potencias, como instrumentos
científicos, se basan en el prototipo de Ruska .

Principio físico
En un cañón de electrones  típico  , los electrones individuales, que tienen una  carga elemental 
(acerca de  culombios ) y una masa  (acerca de  kg ), bajo una diferencia
de potencial de  voltios , una cantidad de energía de  Joules se transfiere a cada uno de ellos,
que absorben por completo como  energía cinética  , ½ (suponiendo una mecánica
no relativista ) y comienza a moverse a una velocidad . Así, siendo

entonces .

Para un voltaje de , esto da una velocidad de aproximadamente  m/ s [13]

Según De Broglie, la longitud de onda asociada
(no relativista) por un impulso  es

ser la  constante de Planck  (sobre

 J·s), por lo tanto

entonces para dicho voltaje da una longitud de

onda de aproximadamente
  metros  , o 0,1228    nm  , muy por debajo de la
longitud de onda del violeta  visible  (380 nm), en
el dominio de los rayos X suaves. Diagrama que ilustra los fenómenos resultantes de
la interacción de electrones altamente energéticos
Tenga en cuenta que los voltajes más altos con la materia.
aceleran los electrones hasta  efectos
relativistas  notables .  Entonces, se debe usar la
siguiente expresión en su lugar: [14]

dónde es la velocidad de la luz en el vacío (aproximadamente  EM). Consulte la teoría

de la difracción de electrones (relativista) para obtener una explicación completa.

Tipos

Microscopio electrónico de transmisión (TEM)

Principio de funcionamiento de un microscopio La forma original del microscopio electrónico,
electrónico de transmisión el  microscopio electrónico de
transmisión  (TEM), utiliza un  haz de
electrones  de alto voltaje  para iluminar la
muestra y crear una imagen.  El haz de electrones es producido por un  cañón de electrones  ,
comúnmente equipado con un cátodo de filamento de tungsteno como fuente de electrones. El haz
de electrones es acelerado por un ánodo típicamente a +100 k eV (40 a 400 keV) con respecto al
cátodo, enfocado por lentes  electrostáticas  y  electromagnéticas  , y transmitido a través de la
muestra que es en parte transparente a los electrones y en parte  dispersa.ellos fuera de la
viga.  Cuando emerge del espécimen, el haz de electrones transporta información sobre la
estructura del espécimen que es ampliada por el sistema de lentes del objetivo del microscopio. La
variación espacial de esta información (la "imagen") se puede ver proyectando la imagen de
electrones ampliada en una pantalla de visualización fluorescente recubierta con  fósforo  o
material  centelleador  como el  sulfuro de zinc  .  Alternativamente, la imagen se puede grabar
fotográficamente exponiendo una película o placa fotográfica directamente al haz de electrones, o
se puede acoplar un fósforo de alta resolución por medio de un sistema óptico de lentes o una fibra
óptica.guía de luz para el sensor de una cámara digital . La imagen detectada por la cámara digital
puede mostrarse en un monitor o computadora.
La resolución de los TEM está limitada principalmente por la aberración esférica , pero una nueva
generación de correctores de hardware puede reducir la aberración esférica para aumentar la
resolución en  microscopía electrónica de transmisión de alta resolución  (HRTEM) por debajo de
0,5  angstrom  (50  picómetros  ),  [1]  permitiendo aumentos por encima de 50 millones de
veces.  [15]  La capacidad de HRTEM para determinar las posiciones de los átomos dentro de los
materiales es útil para la investigación y el desarrollo de nanotecnologías. [dieciséis]

Los microscopios electrónicos de transmisión se utilizan a menudo en el modo  de difracción de

electrones . Las ventajas de la difracción de electrones sobre la cristalografía de rayos X son que la
muestra no necesita ser un solo cristal o incluso un polvo policristalino, y también que la
reconstrucción por transformada de Fourier de la estructura ampliada del objeto se produce
físicamente y, por lo tanto, evita la necesidad de resolver el problema de la fase. que enfrentan los
cristalógrafos de rayos X después de obtener sus patrones de difracción de rayos X.

Una desventaja importante del microscopio electrónico de transmisión es la necesidad de secciones

extremadamente delgadas de las muestras, normalmente de unos 100 nanómetros. La creación de
estas secciones delgadas para especímenes biológicos y de materiales es técnicamente muy
desafiante.  Las secciones delgadas de semiconductores se pueden hacer usando un  haz de iones
enfocado . Las muestras de tejido biológico se fijan químicamente, se deshidratan y se incrustan en
una resina polimérica para estabilizarlas lo suficiente como para permitir un corte ultrafino.  Las
secciones de muestras biológicas, polímeros orgánicos y materiales similares pueden requerir
tinción con etiquetas de átomos pesados ​para lograr el contraste de imagen requerido.

Microscopio electrónico de sección en serie (ssEM)

Una aplicación de TEM es la microscopía electrónica de sección en serie (ssEM), por ejemplo, en el
análisis de la conectividad en muestras volumétricas de tejido cerebral al obtener imágenes de
muchas secciones delgadas en secuencia.  [17] Esto se puede lograr mediante la introducción de un
método de fresado en la canalización de imágenes, mediante el cual se exponen cortes sucesivos de
un volumen 3D al haz y se obtienen imágenes. Estos métodos incluyen Serial Block Face SEM (SB-
SEM)  [18] y  Focused Ion Beam -SEM (  FIB-SEM ).  [19] [20] El preprocesamiento de volúmenes para
crear muchos cortes de los que se obtienen imágenes de forma automatizada ha logrado
3
recientemente imágenes de alto rendimiento de volúmenes de hasta 1 mm   .  [21] Con este método,
se pueden resolver microcircuitos neuronales locales completos, aunque los requisitos de equipo y
tiempo para esto siguen siendo significativos: obtener imágenes de un bloque de tejido cerebral de
3 requirió 6 meses de imágenes casi continuas mediante seis TEM funcionando en paralelo.
1 mm 

Microscopio electrónico de transmisión de barrido (STEM)

El STEM rastrea una sonda incidente enfocada a través de una muestra que (al igual que con el
TEM) se ha adelgazado para facilitar la detección de electrones dispersos a través de la muestra. La
alta resolución del TEM es así posible en STEM. La acción de enfoque (y las aberraciones) ocurren
antes de que los electrones golpeen la muestra en el STEM, pero luego en el TEM. El uso de STEM
de rasterización de haz similar a SEM simplifica  la obtención de imágenes anulares de campo
oscuro y otras técnicas analíticas, pero también significa que los datos de imagen se adquieren en
serie en lugar de en paralelo. A menudo, TEM puede equiparse con la opción de escaneo y luego
puede funcionar como TEM y STEM.

Microscopio electrónico de barrido (SEM)

El SEM produce imágenes al sondear la Principio de funcionamiento de un microscopio

muestra con un haz de electrones enfocado que electrónico de barrido
se escanea a través de un área rectangular de la
muestra ( escaneo de trama ). Cuando el haz de
electrones interactúa con la muestra, pierde energía por una
variedad de mecanismos.  La energía perdida se convierte en
formas alternativas como calor, emisión de  electrones
secundarios de baja energía  y electrones retrodispersados ​de
alta energía, emisión de luz (  catodoluminiscencia  ) o  rayos
X.emisión, todos los cuales proporcionan señales que
transmiten información sobre las propiedades de la superficie
de la muestra, como su topografía y composición.  La imagen
mostrada por un SEM mapea la intensidad variable de
cualquiera de estas señales en la imagen en una posición
correspondiente a la posición del haz en la muestra cuando se
generó la señal.  En la imagen SEM de una hormiga que se
muestra abajo ya la derecha, la imagen se construyó a partir de
señales producidas por un detector de electrones secundario, el
modo de imagen normal o convencional en la mayoría de los
SEM. Imagen de Bacillus subtilis tomada
con un microscopio electrónico de
Generalmente, la resolución de imagen de un SEM es más baja 1960
que la de un TEM.  Sin embargo, debido a que el SEM toma
imágenes de la superficie de una muestra en lugar de su
interior, los electrones no tienen que viajar a través de la muestra. Esto reduce la necesidad de una
preparación extensa de la muestra para adelgazar la muestra hasta la transparencia de los
electrones. El SEM es capaz de obtener imágenes de muestras a granel que caben en su platina y
aun así se pueden maniobrar, incluida una altura inferior a la distancia de trabajo que se utiliza, a
menudo de 4 milímetros para imágenes de alta resolución.  El SEM también tiene una gran
profundidad de campo, por lo que puede producir imágenes que son buenas representaciones de la
forma tridimensional de la superficie de la muestra. Otra ventaja de SEM viene con microscopios
electrónicos de barrido ambiental.(ESEM) que puede producir imágenes de buena calidad y
resolución con muestras hidratadas o en vacío bajo, en lugar de alto, o bajo gases de cámara. Esto
facilita la obtención de imágenes de muestras biológicas no fijadas que son inestables en el alto
vacío de los microscopios electrónicos convencionales.

Microscopio electrónico de reflexión (REM)

En el  microscopio electrónico de reflexión  (REM) al igual que en el TEM, un haz de

electrones incide sobre una superficie pero en lugar de utilizar los electrones de transmisión (TEM)
o secundarios (SEM),  se detecta el haz reflejado de  electrones dispersados ​elásticamente .  Esta
técnica generalmente se combina con  la difracción de electrones de alta energía de
reflexión  (RHEED) y  la espectroscopia de pérdida de alta energía de reflexión (RHELS)  .  Otra
variación es la microscopía electrónica de baja energía polarizada por espín (  SPLEEM  ), que se
utiliza para observar la microestructura de los dominios magnéticos . [22]

Color
En sus configuraciones más comunes, los microscopios electrónicos producen imágenes con un
solo valor de brillo por píxel, y los resultados generalmente se muestran en escala de grises . [23] Sin
embargo, a menudo estas imágenes se colorean mediante el uso de software de detección de
características, o simplemente editándolas a mano con un editor de gráficos. Esto se puede hacer
para aclarar la estructura o por un efecto estético y, por lo general, no agrega nueva información
sobre el espécimen. [24]

Imagen SEM del polen de Cobaea Lo mismo después de la

scandens . coloración semiautomática.  Los
colores arbitrarios ayudan a
identificar los diversos elementos
de la estructura.

En algunas configuraciones, la información sobre varias propiedades de la muestra se recopila por

píxel, generalmente mediante el uso de múltiples detectores.  [25]  En SEM, los atributos de
topografía y contraste de material se pueden obtener mediante un par de detectores de electrones
retrodispersados ​y dichos atributos se pueden superponer en una imagen de un solo color
asignando un color primario diferente a cada atributo. [26] De manera similar, una combinación de
señales de electrones retrodispersados ​y secundarios puede asignarse a diferentes colores y
superponerse en una micrografía de un solo color que muestra simultáneamente las propiedades
de la muestra. [27]

Algunos tipos de detectores utilizados en SEM tienen capacidades analíticas y pueden proporcionar
varios elementos de datos en cada píxel. Algunos ejemplos son los detectores de espectroscopia de
rayos X de dispersión de energía  (EDS) utilizados en el análisis elemental y los sistemas
de  microscopio de catodoluminiscencia (CL) que analizan la intensidad y el espectro de
la luminiscencia inducida por electrones.en (por ejemplo) especímenes geológicos. En los sistemas
SEM que utilizan estos detectores, es común codificar por colores las señales y superponerlas en
una sola imagen de color, de modo que las diferencias en la distribución de los diversos
componentes de la muestra puedan verse claramente y compararse.  Opcionalmente, la imagen
estándar de electrones secundarios se puede fusionar con uno o más canales de composición, de
modo que se puedan comparar la estructura y la composición de la muestra.  Tales imágenes se
pueden hacer manteniendo la integridad total de la señal original, que no se modifica de ninguna
manera.

Preparación de muestras
Los materiales que se van a ver en un microscopio electrónico
pueden requerir procesamiento para producir una muestra
adecuada.  La técnica requerida varía según la muestra y el
análisis requerido:

Fijación química : para muestras biológicas tiene como

objetivo estabilizar la estructura macromolecular móvil de la
muestra mediante la reticulación química
de proteínas con aldehídos ,
como formaldehído y glutaraldehído , y lípidos con tetróxido
de osmio .
Tinción negativa : las suspensiones que contienen
nanopartículas o material biológico fino (como virus y Un insecto recubierto de oro para
bacterias) se mezclan brevemente con una solución diluida verlo con un microscopio electrónico
de una solución opaca a los electrones, como molibdato de de barrido.
amonio, acetato de uranilo (o formiato) o ácido
fosfotúngstico. Esta mezcla se aplica a una rejilla EM
adecuadamente recubierta, se seca y luego se deja secar. La visualización de esta
preparación en el TEM debe realizarse sin demora para obtener los mejores resultados. El
método es importante en microbiología para una identificación morfológica rápida pero cruda,
pero también se puede utilizar como base para la reconstrucción 3D de alta resolución
utilizando la metodología de tomografía EM cuando se utilizan películas de carbono como
soporte. La tinción negativa también se utiliza para la observación de nanopartículas.
Criofijación : congelación de una muestra tan rápidamente en etano líquido que el agua
forma hielo vítreo (no cristalino) . Esto conserva la muestra en una instantánea de su estado
de solución. Todo un campo llamado microscopía crioelectrónica se ha ramificado a partir de
esta técnica. Con el desarrollo de la microscopía crioelectrónica de secciones vítreas
(CEMOVIS), ahora es posible observar muestras de prácticamente cualquier espécimen
biológico cerca de su estado nativo.
Deshidratación : o reemplazo del agua con solventes orgánicos como etanol o acetona ,
seguido de secado en el punto crítico o infiltración con resinas de inclusión
. También liofilización .
Incrustación de especímenes biológicos : después de la deshidratación, el tejido para
observación en el microscopio electrónico de transmisión se incrusta para que pueda ser
seccionado y listo para su visualización. Para hacer esto, el tejido se pasa a través de un
'solvente de transición' como óxido de propileno (epoxipropano) o acetona y luego se infiltra
con una resina epoxi como Araldite , Epon o Durcupan ; [28] Los tejidos también se pueden
incrustar directamente en resina acrílica miscible en agua . Una vez que la resina se ha
polimerizado (endurecido), la muestra se corta en secciones delgadas (secciones ultrafinas) y
se tiñe , luego está lista para su visualización.
Incrustación, materiales : después de la incrustación en resina, la muestra generalmente se
muele y pule hasta obtener un acabado similar a un espejo con abrasivos ultrafinos. El
proceso de pulido debe realizarse con cuidado para minimizar los rayones y otros artefactos
de pulido que reducen la calidad de la imagen.
Sombreado de metal: el metal (p. ej ., platino ) se evapora de un electrodo superior y se aplica
a la superficie de una muestra biológica en ángulo. [29] La topografía de la superficie da como
resultado variaciones en el grosor del metal que se ven como variaciones en el brillo y el
contraste en la imagen del microscopio electrónico.
Replicación : una superficie sombreada con metal (p. ej., platino o una mezcla de carbono y
platino) en ángulo se recubre con carbono puro evaporado de electrodos de carbono en
ángulo recto con la superficie. A esto le sigue la eliminación del material de la muestra (por
ejemplo, en un baño ácido, usando enzimas o por separación mecánica [30] ) para producir una
réplica de la superficie que registra la ultraestructura de la superficie y puede examinarse
mediante microscopía electrónica de transmisión.
Seccionamiento : produce cortes finos de la muestra, semitransparentes a los
electrones. Estos se pueden cortar en un ultramicrótomo con un cuchillo de vidrio o
de diamante para producir secciones ultrafinas de aproximadamente 60 a 90 nm de
espesor. También se utilizan cuchillos de vidrio desechables porque se pueden fabricar en el
laboratorio y son mucho más baratos.
Tinción : utiliza metales pesados ​como plomo , uranio o tungsteno para dispersar los
electrones de la imagen y, por lo tanto, contrastar entre diferentes estructuras, ya que muchos
materiales (especialmente los biológicos) son casi "transparentes" a los electrones (objetos de
fase débil). En biología, las muestras se pueden teñir "en bloque" antes de incluirlas y también
después de seccionarlas. Normalmente, las secciones finas se tiñen durante varios minutos
con una solución acuosa o alcohólica de acetato de uranilo seguida de citrato de plomo
acuoso. [31]
Fractura por congelación o grabado por congelación : un método de
preparación [32] [33] [34] particularmente útil para examinar las membranas lipídicas y sus
proteínas incorporadas en una vista "frontal". [35] [36] [37] El
tejido fresco o la suspensión de células se congela
rápidamente (criofijación), luego se fractura [38] (o mediante
el uso de un micrótomo) [37] mientras se mantiene a la
temperatura del nitrógeno líquido. La superficie fracturada
en frío (a veces "grabada" al aumentar la temperatura a
aproximadamente -100 ° C durante varios minutos para
dejar que algo de hielo se sublime) [37]luego se sombrea
con platino u oro evaporado en un ángulo promedio de 45°
en un evaporador de alto vacío. La segunda capa de La fracturación por congelación
carbono, evaporada perpendicularmente al plano de la ayuda a despegar las membranas
superficie promedio, a menudo se realiza para mejorar la abiertas para permitir la
estabilidad de la réplica del revestimiento. El espécimen se visualización de lo que hay dentro
devuelve a temperatura y presión ambiente, luego la
extremadamente frágil réplica metálica "pre-sombreada" de
la superficie de la fractura se libera del material biológico
subyacente mediante una cuidadosa digestión química con
ácidos, solución de hipoclorito o detergente SDS . La
réplica que aún flota se lava a fondo para eliminar los
productos químicos residuales, se pesca cuidadosamente
en rejillas finas, se seca y luego se observa en el TEM.
Réplica de inmunomarcaje de fractura por congelación
(FRIL) : el método de fractura por congelación se ha
modificado para permitir la identificación de los
componentes de la cara de la fractura mediante marcaje
con inmunooro. En lugar de eliminar todo el tejido
subyacente de la réplica descongelada como paso final
antes de observar en el microscopio, el grosor del tejido se
minimiza durante o después del proceso de fractura. La Cara externa de la membrana de la
capa delgada de tejido permanece unida a la réplica de levadura de panadería que muestra
metal para que pueda ser inmunomarcada con anticuerpos los pequeños agujeros donde se
contra las estructuras elegidas. La fina capa del espécimen fracturan las proteínas, a veces
original sobre la réplica con oro adjunto permite la como pequeños patrones de anillos.
identificación de estructuras en el plano de
fractura. [39] También existen métodos relacionados que
 etiquetan la superficie de las células grabadas [40] y otras variaciones de etiquetado de
réplicas.[41]
Molienda de haz de iones : diluye las muestras hasta que sean transparentes a los electrones
disparando iones (normalmente argón ) en la superficie desde un ángulo y pulverizando
material desde la superficie. Una subclase de esto es la molienda de haz de iones enfocados ,
donde los iones de galio se utilizan para producir una membrana transparente a los electrones
en una región específica de la muestra, por ejemplo, a través de un dispositivo dentro de un
microprocesador. El fresado con haz de iones también se puede utilizar para el pulido de
secciones transversales antes del análisis SEM de materiales que son difíciles de preparar
mediante pulido mecánico.
Revestimiento conductivo : un revestimiento ultrafino de material conductor de la electricidad,
depositado por evaporación a alto vacío o por pulverización catódica a bajo vacío de la
muestra. Esto se hace para evitar la acumulación de campos eléctricos estáticos en la muestra
debido a la irradiación de electrones requerida durante la formación de imágenes. Los
materiales de recubrimiento incluyen oro, oro/paladio, platino, tungsteno, grafito, etc.
Conexión a tierra : para evitar la acumulación de carga eléctrica en una muestra recubierta de
forma conductora, generalmente se conecta eléctricamente al portamuestras de metal. A
menudo se utiliza un adhesivo eléctricamente conductor para este propósito.

Desventajas
Los microscopios electrónicos son costosos de construir y
mantener, pero los costos de capital y funcionamiento de los
sistemas de  microscopios ópticos confocales  ahora se
superponen con los de los microscopios electrónicos
básicos.  Los microscopios diseñados para lograr altas
resoluciones deben alojarse en edificios estables (a veces
subterráneos) con servicios especiales como sistemas de
cancelación de campos magnéticos.

En gran parte, las muestras deben verse en el vacío , ya que las
moléculas que forman el aire dispersarían los electrones.  Una
excepción es  la microscopía electrónica de fase líquida  [42] que
usa una celda líquida cerrada o una cámara ambiental, por
ejemplo, en el  microscopio electrónico de barrido ambiental  ,
que permite ver muestras hidratadas a baja presión (hasta
20    Torr  o 2,7 kPa) ambiente húmedo.  También se han
desarrollado  varias técnicas para  la microscopía electrónica in
situ de muestras gaseosas. [43] Microscopio electrónico de
transmisión y barrido JEOL
Los microscopios electrónicos de barrido que funcionan en el fabricado a mediados de la década
modo convencional de alto vacío suelen obtener imágenes de de 1970
muestras conductoras;  por lo tanto, los materiales no
conductores requieren un revestimiento conductor (aleación de
oro/paladio, carbono, osmio, etc.).  El modo de bajo voltaje de los microscopios modernos hace
posible la observación de muestras no conductoras sin recubrimiento.  Los materiales no
conductores también se pueden visualizar mediante un microscopio electrónico de barrido de
presión variable (o ambiental).

Las muestras pequeñas y estables, como los nanotubos de carbono , las frustulas de diatomeas y los
pequeños cristales minerales (fibras de asbesto, por ejemplo), no requieren ningún tratamiento
especial antes de ser examinadas en el microscopio electrónico.  Las muestras de materiales
hidratados, incluidos casi todos los especímenes biológicos, deben prepararse de varias maneras
para estabilizarlos, reducir su grosor (secciones ultrafinas) y aumentar su contraste óptico de
electrones (tinción). Estos procesos pueden dar lugar a artefactos , pero normalmente se pueden
identificar comparando los resultados obtenidos mediante el uso de métodos de preparación de
muestras radicalmente diferentes.  Desde la década de 1980, el análisis de  criofijados, los
especímenes vitrificados también se han vuelto cada vez más utilizados por los científicos, lo que
confirma aún más la validez de esta técnica. [44] [45] [46]

Aplicaciones
Almacenamiento de datos y Investigación de materiales
semiconductores
Pruebas y caracterización de dispositivos [61]
Editar circuito [47] Experimentos con materiales dinámicos [62]
Análisis de defectos [48] Deposición inducida por haz de
Análisis de fallas [49] electrones [63]
Caracterización in situ [64]
Biología y ciencias de la vida
Cualificación de materiales [65]
Criobiología [50] Investigación médica [53]
Microscopía crioelectrónica [51] Nanometrología [66]
Microscopía electrónica de diagnóstico [52] Nanoprototipos [67]
Investigación de fármacos (p. ej.,
Industria
antibióticos) [53]
Tomografía electrónica [54] Química / Petroquímica [68]
Análisis de partículas [55] Fabricación de escritura de haz directo [69]
Detección de partículas [56] ciencia de los alimentos [70]
Localización de proteínas [57] Medicina forense [71]
Biología estructural [51] Fractografía [72]
Imágenes de tejidos [58] Microcaracterización [73]
Toxicología [59] Minería (análisis de liberación de
Virología (p. ej ., monitorización de la carga minerales) [74]
viral ) [60] Control de calidad farmacéutico [75]

Véase también
Acrónimos en microscopía Procesamiento de imágenes de microscopio
difracción de electrones Microscopía
Espectroscopia de pérdida de energía de Nanociencia
electrones (EELS) Nanotecnología
Imágenes de microscopio electrónico microscopio de neutrones
Microscopía electrónica de transmisión Microscopía cuántica
filtrada por energía (EFTEM) Microscopía electrónica confocal de barrido
Microscopio electrónico de barrido
Microscopio electrónico de barrido (SEM)
ambiental (ESEM)
Microscopio de efecto túnel
Microscopio de emisión de campo
ciencia de la superficie
HiRISE
Microscopio con corrección de aberración
Microscopía electrónica inmune electrónica de transmisión
Microscopía electrónica in situ difracción de rayos X
fijador de Karnovsky
 microscopio de rayos x Analizador de energía de electrones
Microscopía electrónica de baja energía hemisféricos

Referencias
1. Erni, Rolf; Rossell, MD; Kisielowski, C; Dahmen, U (2009). "Imágenes de resolución atómica
con una sonda de electrones Sub-50-pm". Cartas de revisión física. 102(9): 096101.Código
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