MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

HISTORIA
Hasta mediados del siglo XX un gran número de microscopios de luz
habían salido al mercado, destacando los microscopios de la firma
Carl Zeiss, debido a la colaboración entre Ernst Abbe y Zeiss. Esta
firma logró la producción de microscopios de gran calidad, gracias a
la aplicación de la teoría de formación de imágenes de Abbe,
diseñando por primera vez un microscopio basado en cálculos
matemáticos y conocimientos de óptica geométrica. No obstante ello,
se presentaban problemas muy grandes al tratar de observar muestras
transparentes a la luz visible, como es el caso de algunos seres vivos.
En el año 1935, el físico holandés Fritz Zernike desarrolló el
Microscopio de Contraste de Fase, con lo cual se le otorgó el Premio
Nobel de Física en el año 1953. Su contribución consistió al afirmar
que la imagen vista bajo un microscopio convencional, es formada por
el objetivo del microscopio, y finalmente se observa en el ocular. Si la
muestra no absorbe la luz, no habrá esencialmente contraste en la
imagen visible (será toda blanca); por ejemplo, la mayoría de las
células vivas absorben poca luz (a excepción de las células rojas de la
sangre y los cloroplastos) y por lo tanto, son difíciles de visualizar a
través de un microscopio convencional. Por otro lado, aunque las
células absorben poca luz, tienen diversos espesores y diversos índices
de refracción en sus partes, lo que conduce a las diferencias de fase de
las ondas de luz que pasan a través de ellas. La fase de un haz de luz
es inobservable a la vista (apenas se ve la intensidad, no la fase).
Zernike calculó la manera de hacer que las diferencias de fase se
observaran en la imagen como en la intensidad, logrando así,
visualizar detalles que no eran posibles apreciar en un microscopio
convencional. Este tipo de microscopios se utiliza habitualmente para
estudiar células vivas.
APLICACION
se usa principalmente para aumentar el contraste
entre las partes claras y oscuras de las células
sin colorear. Es ideal para especímenes delgados, o
células aisladas. El microscopio de fase ilumina el
espécimen con un cono hueco de luz, como en el
microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el
microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y
entra en el campo de visión del objetivo, que
contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce
la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase
de un cuarto de la longitud de onda.
Este tipo de iluminación provoca variaciones
minúsculas en el índice de refracción de un espécimen
transparente, haciéndolo visible. Este tipo de
microscopio es muy útil a la hora de examinar
tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en
biología y medicina.

PRINCIPIO DE TECNICA

El microscopio de contraste de fase, debido a sus propiedades, se utiliza para exámenes

inmediatos (o invivo), este tipo de microscopio ha desplazado en uso al de campo claro.
Cabe destacar como desventaja, el que los objetos se vean delimitados por un halo o aura
brillante alrededor en el caso del contraste de fase positivo, o por una sombra en el caso
del contraste negativo, defecto producido por la manera de que se producen las
imágenes.