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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE GUERRERO

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS


PROGRAMA EDUCATIVO DE QUÍMICO BIÓLOGO PARASITÓLOGO

MICROBIOLOGÍA
Practica No. 9

ACREDITADA

PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO Y TINCIÓN DE GRAM

Dra. María Cristina Santiago Dionisio

Alumno: Salvador Maldonado Mosso

Grupo: 303 Turno: Vespertino

Chilpancingo, Gro. 22 de Mayo de 2013.


PRACTICA NO. 9

PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO Y TINCIÓN DE GRAM

Objetivo:

 El alumno, aplicará la técnica d preparación de un frotis bacteriano y aprende a teñir-


los con la técnica de Gram.
 El estudiante aplicara una técnica de coloración para la diferenciación de bacterias.

Resultados:

Morfología microscópica
BACTERIA O
GRAM GRAM
LEVADURA AGRUPACIÓN MICROORGANISMO
POSITIVA NEGATIVA
(FORMA)
Cocos Diplococos X Klebsiella pneumoniae
Bacilos Cortos y largos X Bacillus subtilis
(diplobacilos)
vibrio Curva (aislados X Vibrio parahaemolyticus Commented [c1]: REVISAR
individual)
Discusión:

La preparación de un frotis o extensión sobre un portaobjetos es imprescindible para poder


aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las
bacterias. Se realizó tomando una pequeña cantidad de cultivo bacteriano, distribuyéndolo
sobre un portaobjetos previamente esterilizado con alcohol para poder fijarla, ya que de esa
forma las bacterias quedan inactivas y adheridas al vidrio y no se pierden en los pasos de
tinción, teniendo en cuenta que en este proceso de fijación altérelo menos posible la
morfología bacteriana ya que se llevó a cabo calentando el portaobjetos a una temperatura
de tal manera que las bacterias no se deformaron. Puesto que la mayoría de las bacterias
carecen de coloración semitransparente y es difícil su observación, es necesario teñirlas
para poder observarlas al microscopio y determinar su morfología y disposición relativa. La
coloración de Gram permite separar a las bacterias en dos grandes grupos, las Gram
positivas y las Gram negativas; en esta técnica se utilizó el cristal violeta como colorante
primario y el lugol como mordiente, una mezcla de etanol-acetona como agente decolorante
y safranina como colorante de contrasta. Las bacterias que retuvieron el cristal violeta
después de la coloración se observaron de color morado y son Gram positivas en la muestra
que lleve a cabo se mostraron principalmente bacilos (Bacillus subtilis), de agrupación
curveada con aislamiento individual (Vibrio parahaemolyticus) mientras que las Gram
negativas se mostraron los diplococos (Klebsiella pneumoniae). Tal como se muestra en la
tabla de resultados complementando con las imágenes tomadas desde el microscopio
durante su observación.

Conclusión:

Aprendí a aplicar la técnica de preparación de un frotis bacteriano y a teñirlos con la técnica


de Gram.

Apliqué una técnica de coloración para la diferenciación de cada una de las bacterias
preparadas en el frotis.

Literatura citada:

 Manual de Prácticas de Microbiología. (2004). ENCB del IPN, México.


 Díaz; R. G. Y Goñi, L.I. Manual Práctico de Microbiología (2009) Ed. Masson, Barcelona.
 Koneman, W. E. Aller, S.D. Janda, W.M. Schreckermberger. P.C. (2008). Diagnostico
Microbiologico; 5°. Ed; Panamericana; España.
 Prescott, L.M., J.P. Harley y D.A. Klein. (2000) Microbiología. McGraw-Hill Interamericana.
Madrid
 Pelczar, M.J.Jr., R.D. Reid y E. C.S. Chan., Microbiología, (2004) 4a. de. MacGraw-Hill-Book,
Company, Nueva York.
 Ramírez G. RM., Luna M.B. Velázquez M.O., Vierna G.L, et al. (2000). Laboratorio de
Microbiología Experimental. Fac. de Química, UNAM. México, D.F.