UNIVERSIDAD UTE

SEDE SANTO DOMINGO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA INGENIERÍA E INDUSTRIAS

CARRERA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

ASIGNATURA:
MICROBIOLOGÍA

ALUMNA:

ANA ORTEGA SILVA

DOCENTE:
ING.DIANA BUITRÓN

TEMA:

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y DIFERENTES TIPOS DE SIEMBRA.

CURSO: SEXTO PARALELO: “A”

Asignatura: Industria del Cacao Grupo Nº: 2
Carrera: Agroindustria Estudiante
Nivel y paralelo: Sexto “A” Ana Ortega Silva
Fecha de práctica:26 /08/2022
Fecha presentación informe: 06/09/2022
Nº Práctica: 1 Informe Nº:1

TÍTULO DE LA PRÁCTICA: Preparación de medios de cultivo y diferentes tipos de siembras.

1. OBJETIVOS:
General:
Enseñar al estudiante la metodología para la preparación de medios de cultivos, para el aislamiento y
purificación de las mismas.
Específicos:
● Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos,
aplicando los conceptos básicos y preparación de los mismos.
● Desarrollar la destreza de las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido para la
obtención de cultivos puros.

2. INTRODUCCIÓN:

Las bacterias en la naturaleza, ocupan distintos nichos ecológicos que satisfacen sus necesidades
nutricionales. En el laboratorio, para conseguir que una determinada bacteria se desarrolle adecuadamente,
es necesario proporcionarle un ambiente artificial que las satisfaga igualmente. Esto se consigue mediante el
uso de los llamados "medios de cultivo"(Rodriguez, 2018).

Los medios de cultivos y siembra de bacterias son una mezcla de nutrientes y algunos otros componentes
que crearán las condiciones necesarias para que los microorganismos puedan desarrollarse. Estos
medios son de gran importancia en el laboratorio de microbiología, además la diversidad de estos es
tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, ya que las bacterias con las cuales
habitualmente se trabaja son organismos adaptables a diferentes sustratos, por lo que se debe tener un
control en su fabricación, preparación, conservación y uso (Mendieta, 2019).

Existen diferentes tipos de constituyentes habituales de los medios de cultivo como por ejemplo el agar
tiene como función la solidificación del cultivo, también está los extractos de carne, de levadura y de malta.
Se debe tener en cuenta algunos aspectos importantes como por ejemplo, controlar el tiempo y la
temperatura adecuada para su esterilización (Martinez et al., 2006). La presente práctica tiene como
objetivo conocer los diferentes medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos y aplicar técnicas
de aislamiento en medios sólidos.

3. METODOLOGÍA:

Para dar inicio a la elaboración de la presente práctica se procedió a desinfectar al área de trabajo, luego se
preparó los medios de cultivo de acuerdo a las indicaciones del envase , después se preparó y pesó agar
nutritivo y PDA , para diluirlo en agua. Posteriormente se esterilizó el material a usar , se colocó el agar
nutritivo y PDA en las respectivas placas Petri para la siembra de los microorganismos y se dejó enfriar
hasta su solidificación. A continuación se realizó la siembra por estrías de la bacteria Bacillus thuringiensis
en las placas con agar nutritivo. Para este proceso primero se esterilizó el asa microbiológica con el
mechero que estuvo encendido durante todo el proceso, se esperó unos segundos para que el asa se enfríe.
Después , se tomó una colonia del cultivo proliferado y se traspasó a la placa Petri donde se realizó un
estriado simple sin romper el medio de cultivo, se selló y etiquetó la placa con cinta parafilm y se colocó en
incubadora a 37°C. Se repitió el procedimiento anterior de esterilizar el asa para la siembra del hongo
Trichoderma con la diferencia que no se realizó un estriado simple si no que, se recogió una colonia del
hongo y se colocó en medio de la superficie del agar , se selló y se incubo a la temperatura de 27°C durante
4 a 5 días. Finalmente para la siembra de Salmonella se usó la técnica de Petrifilm, se pesó 10 g de carne de
pollo, 90 ml de agua y se licuó hasta que se triture bien, luego se filtró en gasa para obtener la primera
dilución del cual se tomó 1 ml del mismo y se colocó en un tubo de ensayo donde se agregó 9 ml de agua
para obtener la segunda dilución. Después se tomó 1 ml de la segunda dilución y se colocó en el centro de
la placa Petri film, se hizo uso del dispersor colocándolo encima de la placa tapada para que se esparza en
todo el círculo, se rotuló y por último se colocó dentro de la incubadora a 37 °C.

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
Tabla 1. Siembra por estrías de la bacteria Bacillus thuringiensis en las placas con agar nutritivo.

Imagen Descripción

Se utilizó agar nutritivo y se pesó 4,6 g y se

diluyó en agua y una plancha de calentamiento.

Se esterilizó el asa microbiológica con el

mechero que estuvo encendido durante todo el
proceso, se esperó unos segundos para que el
asa se enfríe.

Se tomó una colonia del cultivo proliferado y se

traspasó a la placa Petri donde se realizó un
estriado simple

Se selló y etiquetó la placa con cinta Parafilm y

se colocó en incubadora a 37°C.
Cálculos
Agar nutriente

23 1𝐿 𝐻2𝑂

𝑋 0, 2 𝐿 → 𝑋 = 4, 6 𝑔

Se debe pesar 4,6 g de agar nutriente para bacterias.

Tabla 2. Siembra del hongo Trichoderma en las placas con PDA.

Descripción Imagen

Se utilizó agar nutritivo y luego se pesó 7,8 g .

Posteriormente se diluyó en agua y una plancha de
calentamiento.

Se esterilizó el asa microbiológica con el mechero

que estuvo encendido durante todo el proceso, se
esperó unos segundos para que el asa se enfríe.

Se recogió una colonia del hongo y se colocó en

medio de la superficie del agar.
 Se selló y se incubó a la temperatura de 27°C
durante 4 a 5 días.

Agar patata y nutriente

39 1𝐿 𝐻2𝑂

𝑋 0, 2 𝐿 → 𝑋 = 7, 8 𝑔

Se debe pesar 7,8 g de agar patata y nutriente para hongos.

Tabla 3. Siembra de Salmonella con la técnica de Petrifilm

Imagen Descripción

Se pesó 10 g de carne cruda de pollo,

también se midió 90 ml de agua, licuar hasta
que se trituró bien y luego se filtró en gasa
para obtener la primera dilución.

Se tomó 1 ml del mismo y se colocó en un

tubo de ensayo donde se agregó 9 ml de
agua para obtener la segunda dilución..

Después se tomó 1 ml de la segunda

dilución y se colocó en el centro de la placa
Petri film y se cubre cuidadosamente.
 Se usó del dispersor colocándolo encima de
la placa tapada para que cubriera todo el
círculo

Por último se colocó dentro de la

incubadora a 37 °C.

Tabla 4. Siembra de microorganismos.

Imagen Descripción

Pasado 24 horas se observa

Resultado: Al cabo de 24 horas, se observó que no se visualiza, colonias violetas s que darían positivo a
la presencia de Salmonella, por lo tanto dió un resultado negativo.
 Según (Vásquez & Tasayco , 2020), la placa petrifilm es una prueba cualitativa para la detección de
patógenos que se usa para la detección rápida y confirmación bioquímica de Salmonella en muestras
enriquecidas de alimentos y ambientes en plantas de alimentos. Si hay presencia de salmonella presenta
una colonia violeta o azul oscuro/negra con precipitado azul.

Colonia de hongo Trichoderma

Día 1: Se observa el crecimiento del
hongo.
Día 2: El hongo se expande.

Día 3 y 4: Se observa la expansión del

hongo, presenta tonalidades verdosas en
sus alrededores.

Colonia de bacterias Bacillus

thuringiensis

Día 1 y 2: Se observa claramente la

colonia de bacterias.
Característica de la colonia:
Pigmentación :crema
Elevación : plana

Según García (2018), nos dice que para un sembrado por estrías correctamente se debe sembrar en zig-zag
sobre la superficie del agar de extremo a extremo, sin romper el medio de cultivo, es aconsejable realizarlo
lentamente.
El resultado obtenido de la práctica, se puede observar un mal sembrado por estrías.
 5. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN:

● ¿Para que se usa formaldehído y por qué razón?

El formaldehído se puede utilizar en la producción de fertilizantes, papel, maderas laminadas y

resinas de ureaformaldehído. Se utiliza también como agente conservante en algunos alimentos y en
numerosos productos para uso doméstico, por ejemplo, antisépticos, medicamentos y
cosméticos(Hidalgo, 2018).

• Señala algunas razones para la variación de la población en las diferentes fases del
crecimiento

La humedad del medio y la temperatura son unas de los principales razones que producen
variaciones en el crecimiento de microorganismos (Ramírez & Lozano, 2018)

• ¿Cuál es la temperatura y el tiempo que demora en esterilizar un medio de cultivo?

Esterilizar este material en autoclave a temperatura de 121°C, y 15 libras de presión durante 20

minutos. Por otro lado, los medios de cultivo que incluyen glucosa deben esterilizarse a 115o C y no
a 121°C, ya que a temperaturas superiores a 115°C la glucosa "carameliza"; por lo tanto, en estas
ocasiones, el tiempo también es mayor: 30 min y no 15 min. Por lo tanto, siempre que se esterilice
un determinado material o solución en un autoclave, es necesario tener en cuenta qué material se
está sometiendo al tratamiento y así decidir la temperatura y tiempo de esterilización (César, 2021)

• ¿Por qué no debe colocarse el medio de cultivo muy caliente en las cajas Petri?

Porque si el medio de cultivo está demasiado caliente, las bacterias en la muestra pueden ser
asesinados. Si el agar es demasiado frío, el medio puede ser grumosa una vez solidificado (Sanders,
2012).

• Describa y dibuje una colonia del cultivo puro

Superficie :lisa
Pigmentación :crema
Forma: circular
Elevación : plana
 (Velazco, 2019)

• Señale dos cuidados que deben tenerse cuando se hace un cultivo en estrías

1. Se debe tomar una muestra pequeña de la colina y dispersar por toda la superficie del agar con
la ayuda del asa previamente esterilizada.
2. Al momento de sembrar por estrías con el asa, se debe realizar lentamente. Evitando dañarlo
o romperlo y para que no se creen grietas sobre la superficie del mismo.

(Zamora, 2005)

6. CONCLUSIONES:

● Mediante la práctica realizada se puede concluir que el método de siembra por estrías en un
cultivo sólido es una técnica muy eficaz y fácil de realizar para obtener cultivos puros.

● Se aprendió y reconoció la metodología de preparación de los medios de cultivo de

acuerdo a las indicaciones del envase y lo indicado por el docente y la cantidad a usar.

● La siembra con la técnica de Petrifilm, resultó negativa a la presencia de salmonella ya que

no presentó colonias de color violeta.

● La siembra por estrías de la bacteria Bacillus thuringiensis en las placas con agar nutritivo
se observó una mala aplicación de la técnica ya que no se visualiza completamente un zig
zag en toda la placa.

● Se pudo observar expansión del hongo Trichoderma al cabo de 4 días en casi toda la caja
petri, concluyendo que se sembró correctamente.

7. RECOMENDACIONES:
● Se recomienda llevar impresa la guía de prácticas y leer previamente los procesos, materiales
y equipos que se utilizarán en la práctica para realizar con mayor agilidad la práctica.
● Todos los alumnos deberán asistir con bata blanca larga y el cabello recogido usando cofia.
● Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante debe lavarse las manos con agua y jabón.
● El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar cada práctica
es conveniente desinfectar la superficie de trabajo.
 ● Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben evitar los
desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean corrientes que originan
contaminaciones o pueden producir accidentes.

8. BIBLIOGRAFÍAS

César, A. (Julio de 2021). Procedimiento de microbiología general. Obtenido de saludneuquen.gob.ar:

https://www.saludneuquen.gob.ar/wp-content/uploads/2021/08/ANAL-005-Microbiologia-general.pdf

Hidalgo, E. (Febrero de 2018). Formaldehído. Obtenido de afirm-group.com:

https://www.afirm-group.com/wp-content/uploads/2018/02/Formaldehyde_spanish.pdf

Martínez, J. , & Gómez, Gretel , & Nápoles, María C. , & Costales, Daimy , & Somers, Ellen (2006).
EFECTO DE DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO EN LA MULTIPLICACIÓN CELULAR DE
Bradyrhizobium elkanii. Cultivos Tropicales, 27(1),35-38.[fecha de Consulta 5 de Septiembre de 2022].
ISSN: . Disponible en: https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=193215885006

Mendieta, L. (26 de Febrero de 2019). ¿Por qué son importantes los medios de cultivo para microbiología?
Obtenido de mdmcientifica.com: https://mdmcientifica.com/medios-cultivo-para-microbiologia/

Ramírez, L., & Lozano, L. (2018). Principios físicoquímicos de los colorantes utilizados en microbiología.
Obtenido de scielo.org.co: http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v18n33/1794-2470-nova-18-33-73.pdf

Rodriguez, C. (2018). Manual de medios de cultivo . Obtenido de biocen.cu:

https://www.biocen.cu/wp-content/uploads/2021/05/Manual-MC-2018.pdf

Sanders, E. (Mayo de 2012). Técnicas de laboratorio asépticas: Métodos de Revestimiento Published. Plating
Methods, 2(63), 25-25. doi:10.3791/3064

Vásquez, J. & Tasayco, R. (2020). Presencia de patógenos en carne cruda de pollo en centros de expendio,
Huánuco-Perú: una problemática en salud. Journal of the Selva Andina Research Society, 11(2), 130-141.
Recuperado en 05 de septiembre de 2022, de
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2072-92942020000200008&lng=es&tlng=es.

Velazco, J. (2019). Tecnicas basicas de microbiología y nutrición bacteriana. . Obtenido de fbioyf.unr.edu.ar:

https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/182034/mod_resource/content/1/2019%20TP1%20FAR
MACIA.pdf

Zamora, M. (2005). AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CONSERVACIÓN DE CULTIVOS DE

BACTERIAS . Obtenido de tdx.cat: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/7925/Tlzr.pdf?sequence=4

9. RÚBRICA DE EVALUACIÓN:

Ítem Valor 100 % 75 % 50 % 25 % 0%

 Utiliza el Utiliza el
Utiliza el El
formato, pero formato, pero
formato El formato de estudiante
Presentación usa diferentes existe
1 establecido para informe está no utiliza el
y Formato tipos de letra desorden en
la presentación el informe. incompleto formato de
del informe en el
informe
documento.
El informe El informe
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tiene de 5 a 9 tiene más de tiene más de
El informe 10 faltas 15 faltas
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El informe no tiene de 2 a 5 ortográficas, ortográficas,
ortográficas,
tiene faltas faltas se se
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considerará el
considerará el considerará el el tiempo y el tiempo y
tiempo y
Ortografía tiempo y modo tiempo y modo modo modo
modo
0.5 gramatical en la gramatical en gramatical en gramatical
y Redacción gramatical en
redacción de la la redacción de la redacción en la
la redacción
sección la sección de la sección redacción
de la sección
pertinente pertinente pertinente de la
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tercera persona) tercera tercera pertinente
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El contenido
tiene relación
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La extensión es introducción introducción introducción textual de la
de 2 -3 párrafos guía de
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Tiene al menos tres de los dos de los uno de los práctico o
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redactados y no tres de los dos de los uno de los textual de la
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 Incluye el
material,
utilizado

La metodología
está redactada
en pasado y
tercera persona

La metodología
contiene las
citas de los
procedimientos
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utilizados
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tablas.

Los resultados
corresponden
con los datos
reportados en la
hoja de Los Los
resultados Los resultados resultados No se
resultados
Resultados Los cálculos se cumplen con cumplen con presentan
1.5 cumplen con
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dos de los uno de los
completos y con cuatro ítems resultados
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correspondientes

Los cálculos se
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hoja de
resultados
La discusión es
clara y está bien
No se
redactada
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La discusión La discusión La discusión
La discusión se discusión o
cumple con cumple con cumple con
Discusión 2 basa en los no tiene
tres de los dos de los uno de los
resultados relación con
obtenidos. cuatro ítems cuatro ítems cuatro ítems
los
resultados
La discusión
compara los
 resultados con
fuentes
bibliográficas
científicas.

La discusión de
los resultados
contiene las
citas de las
fuentes
bibliográficas
Se responden Se responden Se responde
Se responden casi todas las la mitad de solo una
todas las preguntas las preguntas pregunta de
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conclusiones conclusiones conclusiones conclusiones conclusione
están basadas en están basadas están basadas están basadas s no están
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