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BIOSEGURIDAD, ESTERILIZACIÓN Y

MEDIOS DE CULTIVO
Dayana Pérez 1Juan David Montes 2 Xiomara Andrea Lugo3
FUNDACIÓN UNIVERSITARIA DE SAN GIL –UNISANGIL-YOPAL, CASANARE
Facultad de ciencias naturales e ingeniería
Microbiología Ambiental grupo C
Yopal -Casanare
e-mail: dayanaperez@unisangil.edu.co
e-mail: jmontes@unisangil.edu.co
e-mail: xiomaralugo@unisangil.edu.co

I. RESUMEN III. MATERIALES

Este trabajo se realizó con el fin de poner en


práctica los conocimientos ya adquiridos en  2 cajas de Petri esterilizadas
clase y aprender nueva información hecha en  2 tubos de ensayo esterilizados
práctica acerca de procedimientos para la  2 pipetas esterilizadas de 10 ml
preparación de cultivo, vertido de las cajas de  1 Erlenmeyer de 250ml
 2 probetas de 50 ml
Petri y solidificación, prueba de esterilidad y
 1 mechero bunsen
prueba de efectividad para así comprobar
 1 balanza de precisión
que los métodos llevados a cabo se  1 estufa de eléctrica
realizaron de la forma apropiado.  1 espátula
 1 autoclave
 1 medio de cultivo deshidratado
(simple, selectivo o diferencial)
II. OBJETIVO  150 ml de agua destilada
 Conocer el concepto de bioseguridad y  Alcohol 70%
las normas básicas de trabajo seguro en  Toallas desechables
el laboratorio de microbiología.  Cinta de enmascarar
 Conocer el concepto de esterilización,
tipos de esterilización, métodos de
esterilización en el laboratorio de IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE
RESULTADOS
microbiología.
 Reconocer la utilidad, tipos, composición,
En la práctica, se realizó la preparación de
método de preparación y manejo de medio de cultivo tal como: agar nutritivo
medios de cultivo en el laboratorio de
microbiología La auxiliar de laboratorio suministró el agar
nutritivo para realizar la práctica, se hicieron
los cálculos para hallar la cantidad necesaria
de elementos para la preparación del medio
de cultivo (plate count agar)
temperatura de 121°c o 15lb/in2 de presión
Calculo para agar nutritivo durante 15 minutos.
1.25gr--------50 ml
Previamente se esterilizo el mesón con
Xg---------100ml
alcohol.

Xg=0,62 g de agar nutritivo

Se preparó los 100ml de (plate count agar)


en un Erlenmeyer y se llevó a calentar por
método de inducción

Figura 3. Esterilización del mesón de


trabajo
Fuente: Autores.

Al terminar la esterilización del mesón se


retiró el Erlenmeyer del autoclave y se puso
el medio de cultivo sin gelificar en las caja
de Petri este proceso se realizó con el
mechero buseen encendido por precaución y
para esterilizar el ambiente.

Figura 1. Calentamiento por inducción


magnética
Fuente: Autores.

Se esperó durante un buen tiempo hasta que


el agar tuviera en su punto de ebullición y se
retiro

Figura 2. Se prepara para llevarlo al


autoclave
Fuente: Autores.
Se dejó en el auto clave a una

Figura 4. Medio cultivo, luego de su proceso


por la estufa eléctrica.
Figura 5. Vertimiento del agar en el tubo de Figura 6. Resultados de esterilización 24
ensayo y cajas de Petri horas después.
Fuente: Autores.
Fuente: Autores.
PRUEBA DE EFECTIVIDAD
Al terminar de agregar se taparon se
marcaron y se dejaron durante un tiempo El procedimiento para la prueba de
para que se solidificaran. efectividad fue el mismo que el de la prueba
de esterilidad; solo al momento de verter el
PRUEBA DE ESTERILIDAD medio de cultivo no gelificado en las cajas de
Petri hubo un cambio ya que este se expuso
Después de hacer todo el procedimiento de
al ambiente para adquirir un posible
preparación del medio de cultivo y haber
crecimiento de microrganismos.
tomado todas las precauciones para que
nuestra prueba de esterilidad tuviera los Después de exponer nuestro medio de
resultados deseados Se llevaron las cajas de cultivo ya gelatinizado al ambiente, se selló y
Petri a la incubadora durante 24 horas a una se puso a incubar en el horno durante 24
temperatura de 37°c temperatura óptima para horas a una temperatura de 37° c
el crecimiento microbiano temperatura óptima para el crecimiento de
organismos vivos en las condiciones del
Al pasar las 24 horas de espera requeridas
medio de cultivo preparado (plate count
para obtener los resultados y poder ver si
agar), y se procede a esperar el tiempo de
avía un posible crecimiento microbiano
incubación.
observamos que la prueba de esterilización
funciono a la perfección ya que no se vio Transcurridas 24 horas necesarias para el
crecimiento de ningún tipo de organismo crecimiento microbiano se hizo la respectiva
microbiano. revisión del medio de cultivo dispuesto para
nuestra prueba de efectividad y se pudo
observar que esta prueba fue exitosa ya que
se obtuvo crecimiento a diferencia de nuestro
ensayo de esterilidad, lo cual nos indica que
los procedimientos indicados en la guía
práctica se ejecutaron de manera correcta.
El agua destilada juega un papel muy
importante en la preparación del cultivo ya
pueden afectar el crecimiento de los
microorganismos sembrados en este tipo de
cultivo si la muestra de agua no es
correctamente manipulada.

Figura 5. Resultados de efectividad 24


horas después.
Fuente: Autores

V. CONCLUCIONES

La experiencia adquirida en la práctica de


laboratorio fue muy provechosa por que
como estudiantes de ingeniería ambiental
obtuvimos conocimientos claves para nuestro
posible desempeño laboral en un futuro. La
buena manipulación del autoclave y de los
materiales que fueron usados en la práctica
para preparar el medio de cultivo (plate count
agar)

Se pudo determinar que para una buena


preparación del medio de cultivo se deben
hacer los cálculos necesarios para tener un
resultado óptimo y beneficio para el
crecimiento de microorganismos en este
medio, se debe ser muy cuidadoso al
momento de medir las cantidades y realizar
los cálculos.

Es importante conocer el procedimiento


adecuado para que los resultados sean los
deseados, por esta razón nuestra guía
práctica juega un papel importante si no es
que indispensable en la ejecución de los
procedimientos.
VI. REFERENCIAS WIKIPEDIA, {22 de febrero de 2015} {En
línea} disponible en
I.CT., S.L, {22 de febrero de 2015} {En (http://es.wikipedia.org/wiki/Agar_Levine)
línea} disponible en
(http://www.ictsl.net/downloads/microbiologia. britanialab, {22 de febrero de 2015} {En
pdf) línea} disponible en
(http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/
RAFAEL VIGNOLI, {22 de febrero de b02/salmoshigagar.htm)
2015} {En línea} disponible en
(http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Ca Betón Dickinson GmbH BD Diagnostic
p%2027.pdf) Systems, {22 de febrero de 2015} {En línea}
disponible en
BUSCADOR GOOGLE, {22 de febrero de (http://www.bd.com/europe/regulatory/assets/
2015} {En línea} disponible en ifu/hb/ce/pa/es-pa-255084.pdf)
(https://www.google.com.co/?gws_rd=ssl#q=
definicion+de+liofilizado) MERCK, {22 de febrero de 2015} {En
línea} disponible en (http://www.amco-
BUSCADOR GOOGLE, {22 de febrero de instruments.com/index_files/pdf/chromocult-
2015} {En línea} disponible en coliform.pdf)
(https://www.google.com.co/?gws_rd=ssl#q=
definicion+de+sonicacion)
ANEXOS

Tabla 1 (resultados)

Nombre de Esterilid Aspecto de Efectivi Aspecto Registro fotográfico


medio de cultivo ad las colonias dad de las
(ufc) (ufc) colonias
Plate count agar positiva No se observan No aplica No se
colonias observan
colonias

El medio de cultivo (plate count agar) Sin


reproducción microbiana prueba efectiva
e esterilidad.
Plate count agar No aplica Positiva Al ver la caja
Petri se
observa que
hay tres
posibles
colonias de
microorganis
mos una
grande de
forma
irregular y
dos
pequeñas en
el centro de
forma
redonda
Solo se observa un crecimiento
microbiano en el costado derecho de la
caja Petri de color blancuzco y en su
centro dos unidades formadoras de
colonia de un tono amarillento, esto nos
indica un resultado positivo en la prueba
de efectividad.