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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA


CENTRO DE BIOLOGÍA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA 2

TEMA: ACONDICIONAMIENTO, ESTERILIZACIÓN, PASTEURIZACIÓN,


MEDIOS Y TÉCNICAS DE CULTIVO.
NOMBRE: GRUPO N° 1
Dayana Damaris Aldaz Salinas
Joselin Carolina Barrionuevo Lincango
Emily Nagelly Briones Serrano
Marjorie Carolina Chiliquinga Jumbo
Marcos Josué Ramírez Altamirano

DOCENTE: Dr. Pablo Jarrín


TÉCNICO DEL CENTRO DE BIOLOGÍA: Isabel Carrillo, Mag

AYUDANTE: Paula Reina

Quito, 21 de junio de 2021.


ECUADOR
RESUMEN

Identificación de los procesos y métodos de esterilización, pasteurización, medios y

técnicas de cultivo; mediante actividades virtuales y experimentos caseros. Se

presentaron diapositivas para tener conocimiento acerca de los diferentes procesos de

esterilización, acondicionamiento, pasteurización y técnicas de cultivo, además se

realizó la práctica tanto de manera virtual mediante simuladores, así como

experimentación con materiales caseros. Con la correcta ejecución de la práctica se

logró complementar el conocimiento adquirido anteriormente, ya que los diferentes

experimentos nos mostraron la importancia de llevar a cabo rigurosamente cada

proceso para al final obtener los resultados esperados. Se concluye que mediante el

acondicionamiento y esterilización podemos desinfectar los materiales que

necesitamos para la práctica, así mismo, el proceso de pasteurización nos permitió

determinar una forma de conservación de alimentos; además, las técnicas de cultivo y

siembra de bacterias nos permitió determinar a qué tipo de colonia pertenece.

Palabras clave:

ESTERILIZACIÓN / PASTEURIZACIÓN / TÉCNICAS_DE_CULTIVO /

SIEMBRA_DE_BACTERIAS /
TEMA: Acondicionamiento, Esterilización, Pasteurización, Medios y técnicas de cultivo

1. OBJETIVOS:

1.1. Conocer los procesos de acondicionamiento, esterilización, pasteurización, medios y

técnicas de cultivo.

1.2. Identificar el proceso de acondicionamiento del material de laboratorio

1.3. Identificar el proceso y los métodos de esterilización

1.4. Reconocer lo tipos de pasteurización y los factores que afectan su proceso

1.5. Identificar los diferentes métodos de cultivo de bacterias, instrumentos y técnicas de cultivo

1.6. Desarrollar actividades tanto virtuales como en casa sobre acondicionamiento,

esterilización, pasteurización, medios y técnicas de cultivo

3. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Materiales y Equipos

3.1.1. Frascos de mermelada

3.1.2. Lápiz

3.1.3. Hojas de papel bond

3.1.4. Olla de presión

3.1.5. Clip

3.1.6. Alicate

3.1.7. Velas

3.1.8. Recipientes transparentes con tapa

3.1.9. Film plástico

3.1.10. Gasa o colador

3.1.11. Asas de Cultivo


3.1.12. Asas Digralsky

3.1.13. Cuchillo

3.1.14. Jarra Plástica

3.2. Sustancias y Reactivos

3.2.1. Líquido de gobierno

3.2.2. Vinagre 𝐶𝐻3 𝐶𝑂𝑂𝐻(𝑙)

3.2.3. Agua 𝐻2 𝑂(𝑙)

3.2.4. Alcohol 𝐶2 𝐻5 𝑂𝐻(𝑙)

3.2.5. Azúcar 𝐶12 𝐻22 𝑂11(𝑠)

3.2.6. Una papa

3.2.7. Gelatina sin sabor

3.2.8. Verduras

3.3. Procedimiento

Realizar las actividades explicadas en el taller in situ que le ofrece la herramienta

3.3.1. Siembra Virtual

− Ingresar al simulador

https://courses.ecampus.oregonstate.edu/mb230/interactives/MB230-Lab4Streak.html

− Iniciar el simulador y tomar el asa de cultivo

− Colocar el asa de cultivo en la llama del mechero antes de conseguir bacterias

− Seleccionar el tubo de ensayo

− Retirar la tapa del tubo de ensayo y colocarla en el escritorio

− Flamear la abertura del tubo antes de obtener las bacterias

− Colocar el asa de cultivo en la abertura del tubo de ensayo para obtener las bacterias
− Flamear la abertura del tubo después de obtener las bacterias y tapar el tubo

− Ir a la sección de la caja de Petri y abrir la tapa de la caja a un ángulo de 34°, no se debe

abrir demasiado

− Dibujar en la sección superior de la caja con el asa de cultivo

− Flamear el asa después de la primera extracción, después, tocar el agar en la zona clara

para que se enfríe, antes de la segunda extracción

− Arrastrar las bacterias con el asa a través de la primera extracción hacia la segunda sección

de arriba hacia abajo

− Flamear el asa después de la segunda extracción, después, tocar el agar en la zona clara

para que se enfríe, antes de la tercera extracción

− Arrastrar las bacterias con el asa a través de la segunda extracción hacia la tercera sección

de derecha a izquierda

− Flamear el asa después de la tercera extracción

− Cerrar la tapa de la caja

− Etiquetar el lado del agar (parte inferior)

− Seleccionar enviar mi trabajo

− Colocar el lado del agar hacia arriba en la incubadora

− Iniciar la incubación

3.3.2. Cultivo virtual

− Empleando un navegador de Internet ingrese al sitio web:

https://conteni2.educarex.es/mats/14380/contenido/

− Entrar al laboratorio

− Desarrolle un cultivo virtual de bacterias con los siguientes parámetros:


Grupo 1: la concentración inicial: 1, concentración de nutrientes: muy bajo, el tipo de
o o
nutriente: Azúcar, la temperatura: 10 C y 50 C, la humedad: baja y los efectos:

Aerobiosis

− Realizar la evaluación

4. PROCESAMIENTO DE DATOS
4.1. Datos
Tabla 1. Datos Cultivo virtual
Parámetros del cultivo Datos
Concentración inicial 1
Concentración de nutrientes Muy bajo
Tipo de nutriente Azúcar
Temperatura 10 y 50 °C
Humedad Baja
Efectos Aerobiosis
Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE

4.2. OBSERVACIONES Y RESULTADOS:


- Fotografías de sus procesos de esterilización, elaboración de asas y preparación de
medios de cultivo y pasteurización

Tabla 2. Actividades del taller in Situ


ACTIVIDADES DEL TALLER IN SITU
Acondicionamiento de material y Esterilización

Paso 1

Desinfectar las manos con alcohol al 70% y


el área de trabajo (procurar trabajar con
velas)
Paso 2

Materiales: 2 frascos de mermelada y un


lápiz

Verificar que los materiales estén lavados


y secos

Paso 3

Envolver completamente el material con


papel empaque (hojas de bond)

Envolver el lápiz como simulando envolver


una pipeta, cubrir las puntas y rotular
Paso 4
Esterilizar

Colocar los materiales acondicionados en


una olla de presión

Llevar a hervir, bajar la llama y esperar 15


min

Transcurrido el tiempo esperar que se enfrié


y abrir la olla

Asas de Cultivo
Asa de Digralsky Asa de siembra
Se utiliza para siembra por diseminación en Se emplea para transportar, arrastrar, trasvasar
superficie. inóculos, desde la solución de trabajo también
llamada “solución madre” al medio de
cultivo.

PASTEURIZACIÓN
Paso 1

Llenar los botes de verduras hasta que


queden completamente llenos, aprovechando
todos los espacios.
Observación
Es necesario llenar el recipiente toda la
superficie hasta el límite.

Resultado
Al llenar todo el recipiente de verduras y
vinagre se preservan las mismas y evitan la
entrada de oxígeno.

Paso 2

Llevar al proceso de pasterización. Para este


caso se aplicó una pasterización alta,
entonces se deja de 15 a 20 minutos.

Observación
Es necesario llevar el recipiente a
calentamiento o a baño maría por el tiempo
establecido en este paso.

Resultado
Al calentar el recipiente lleno de verduras, el
calor hace que las bacterias se eliminen y así
tener unas verduras con una mayor pureza y
duración.
Paso 3

Se baja la temperatura al instante que acabo


el tiempo establecido del paso 2.

Observación
Es necesario dejar enfriar al instante en que
se acaba el procedimiento de pasa 2.

Resultado
Al dejar enfriar el recipiente, disminuimos la
temperatura con el objetivo de que los
microbios sobrevivientes se reproduzcan por
acción del calor.

Paso 4

Finalmente, se guarda el recipiente en ligar


fresco y que no tenga entrada de luz.

Observación
Es necesario dejar el recipiente en un lugar
fresco y sin acceso de emisión de luz.

Resultado

Después de haber realizado todos los pasos


del experimento de la pasterización, el
mismo ayuda a que las verduras vertidas en
el recipiente se conserven por mucho más
tiempo de lo normal.

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE

- Complementar la tabla 3 con las características de las colonias de microorganismos


observados

Tabla 3. Observación de características en las colonias

Imagen Observación Tiempo Forma Color Aspecto Borde


Agotamiento por Se formaron 48 hrs Irregular Blanco Plano Entero
estría - Eces de pequeñas Liso
pollo manchas
blancas sobre
la placa.

Extensión en placa - Se formaron 48 hrs Irregular Blanco Plano Entero


suelo pequeñas
manchas Puntiforme Café Liso
blancas y cafés Rugoso
sobre la placa.

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE

− Resultados de los simuladores: tipo de siembra y el del cultivo virtual (método del
cultivo general y efectos)

Tabla 4. Resultados del cultivo virtual

Cultivo Virtual condiciones Grupo 1


Observaciones Fotografías

Como se puede observar al

desarrollar el cultivo de bacterias

con concentración inicial: 1,

concentración de nutrientes: muy

bajo, el tipo de nutriente: Azúcar,


o
la temperatura: 10 C, la

humedad: baja y los efectos:

Aerobiosis, la población de

bacterias no creció, se mantuvo

en la concentración inicial de 1

Como se puede observar al

desarrollar el cultivo de bacterias


con concentración inicial: 1,

concentración de nutrientes: muy

bajo, el tipo de nutriente: Azúcar,


o
la temperatura: 50 C, la

humedad: baja y los efectos:

Aerobiosis, la población de

bacterias creció muy poco hasta

una concentración de 3

Fuente: CB. (2021)-Laboratorio Virtual sobre Cultivo Virtual de Bacterias.


Tabla 5. Resultados de la siembra virtual

Siembra Virtual

Observaciones

El tipo de siembra utilizado fue el de estriado en placa, mediante el cual la muestra inicial

se dividió en tres partes utilizando el asa de cultiuvo esterilizada y de esta manera se

obtuvo microorganismos aislados.

Fuente: Oregon State University. (2021). Laboratorio Virtual-Siembra Virtual.

− Desarrollo de las actividades de las herramientas interactivas


Tabla 6. Siembra virtual

Desarrollo de la Siembra Virtual


Actividad Fotografía

Ingresar al simulador
https://courses.ecampus.oregonstate.edu/m
b230/interactives/MB230-Lab4Streak.html

Iniciar el simulador, tomar el asa de cultivo

Colocar el asa de cultivo en la llama del


mechero antes de conseguir bacterias

Seleccionar el tubo de ensayo

Retirar la tapa del tubo de ensayo y


colocarla en el escritorio

Flamear la abertura del tubo antes de


obtener las bacterias

Colocar el asa de cultivo en la abertura del


tubo de ensayo para obtener las bacterias

Flamear la abertura del tubo después de


obtener las bacterias y tapar el tubo
Ir a la sección de la caja de Petri y abrir la
tapa de la caja a un ángulo de 34°, no se
debe abrir demasiado

Dibujar en la sección superior de la caja con


el asa de cultivo

Flamear el asa después de la primera


extracción, después tocar el agar en la zona
clara para que se enfríe, antes de la segunda
extracción

Arrastrar las bacterias con el asa a través de


la primera extracción hacia la segunda
sección de arriba hacia abajo

Flamear el asa después de la segunda


extracción, después tocar el agar en la zona
clara para que se enfríe, antes de la tercera
extracción

Arrastrar las bacterias con el asa a través de


la segunda extracción hacia la tercera
sección de derecha a izquierda

Flamear el asa después de la tercera


extracción
Cerrar la tapa de la caja

Etiquetar el lado del agar (parte inferior)

Seleccionar enviar mi trabajo

Colocar el lado del agar hacia arriba en la


incubadora

Iniciar la incubación

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE

Tabla7. Cultivo virtual

Desarrollo del Cultivo Virtual


Actividad Fotografía
Empleando un navegador de Internet ingrese
al sitio web:
https://conteni2.educarex.es/mats/14380/conte
nido/

Entrar al laboratorio

Desarrollar un cultivo virtual de bacterias con

los siguientes parámetros:

concentración inicial: 1, concentración de

nutrientes: muy bajo, el tipo de nutriente:


o
Azúcar, la temperatura: 10 C, la humedad:

baja y los efectos: Aerobiosis


Desarrollar un cultivo virtual de bacterias con

los siguientes parámetros:

concentración inicial: 1, concentración de

nutrientes: muy bajo, el tipo de nutriente:


o
Azúcar, la temperatura: 50 C, la humedad:

baja y los efectos: Aerobiosis

Realizar la evaluación

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE


5. DISCUSIÓN

El método cualitativo empleado en la práctica para el conocimiento de los procesos de

acondicionamiento, esterilización, pasteurización, medios y técnicas de cultivo fue el

adecuado, dado que, mediante material audiovisual se puedo conocer los pasos necesarios

para realizar cada procedimiento como el acondicionamiento y la esterilización de las pipetas

o las cajas de Petri , también , se identificó los tres tipos de pasteurización y los factores que

afectan este proceso como la acidez o las propiedades térmicas del alimento; se pudo conocer

la clasificación de los medios de cultivo por su consistencia y composición, además, se logró

conocer los instrumentos y las técnicas de siembra como el estirado en placa o siembra en

superficie; por otra parte, se pudo complementar los fundamentos teóricos mediante la práctica

ya que se realizó los procesos de acondicionamiento, esterilización, pasteurización, medios y

técnicas de cultivo de manera casera. En la práctica realizada hubo ausencia de errores tanto

aleatorios como sistemáticos, dado que se la realizó de manera virtual a través de material

audiovisual y los experimentos realizados en casa fueron desarrollados correctamente

siguiendo todas las indicaciones por lo cual se obtuvo los resultados esperados. Para futuras

practicas se recomienda, realizar las técnicas de cultivo con caldo de un cubo maggi dado que

esto permitirá que las bacterias tengan más nutrientes para alimentarse y de esta manera

crecerá la colonia.

6. CONCLUSIONES

6.1 En la presente práctica se logró conocer el proceso de pasteurización, así como comprobar a

través de la experimentación realizada en casa que el proceso de pasteurización ayuda a la

conservación de alimentos. El mismo procedimiento se puede hacer a pequeña y grande escala


para la producción y comercialización de este tipo de alimentos y también de otros dentro de

cualquier industria dedicada a la producción de alimentos. (Ramírez, 2021)

6.2 Se concluye que los instrumentos de siembra son utilizados por los microbiólogos para la

siembra de cultivos que nos ayudan para al traslado o el arrastro de inóculos desde la solución

de trabajo también llamada “solución madre” al medio de cultivo. (Briones, 2021)

6.3 Se concluye que los cultivos de bacterias dependen de las condiciones en que se desarrollen,

dentro de esto existen varios factores fundamentales como la concentración y el tipo de

nutrientes, la temperatura, la humedad, entre otros, estos factores determinan el tamaño de la

población de bacterias que se va a obtener, como se puede observar en la figura 9.7 al realizar

un cultivo de concentración inicial 1, utilizando azúcar como nutriente con concentración muy

baja, temperatura de 10°C y con efecto de aerobiosis se obtiene que la población de bacterias

no creció se mantuvo con una concentración igual a la inicial de 1 mientras que al realizar el

cultivo con las mismas condiciones pero con una temperatura de 50°C la población creció muy

poco a una concentración de 3 como se puede observar en la figura 9.8 (Barrionuevo,2021)

6.4 En conclusión, el cultivo de bacterias nos permite observar el tipo de microorganismo que

estamos tratando, además es de suma importancia dentro de los laboratorios clínicos ya que se

puede identificar la bacteria que afecta a nuestro organismo y así poder contrarrestar o eliminar

cualquier tipo de infección que pueda estar generando. (Aldaz, 2021)

7. CUESTIONARIO

1. ¿De qué manera se controla el proceso de esterilización para verificar la efectividad

del mismo?
Existen controles químicos que se realizan mediante productos comerciales, mismas que tienen

sustancias químicas que cambian de color cuando se cumple un elemento clave como: la

temperatura, húmeda, presión o la concentración del agente esterilizante. (Genova, 2009)

2. ¿Qué son las soluciones termolábiles y cómo se las esteriliza?

Las soluciones termolábiles son aquellas sustancias sujetas a descomposición, destrucción o

cambio por causa del calor. Este tipo de soluciones se solubilizan en un pequeño volumen de agua

y se esterilizan por filtración. (Montes, 2017)

3. ¿Cuándo es importante el uso de un medio de cultivo sintético y de un medio de cultivo

complejo?

Es importante utilizar un medio de cultivo sintético cuando se quiere realizar estudios metabólicos

utilizando productos químicos, en cambio, es importante utilizar un medio de cultivo complejo

para cultivar bacterias, brindándoles un ambiente lo más parecido a cómo se desarrollan en

el ecosistema normalmente (Gil, 2019).

4. ¿Cuál de las técnicas de siembra manual y virtual es la mejor para el proceso de

aislamiento de un microorganismo?

− La mejor siembra manual para el proceso de aislamiento de un microorganismo fue el de las

Técnicas de Siembra ya que se utilizó la placa Petri para poder observar dicho proceso. Además,

es uno de los métodos más utilizados en la bioquímica y microbiología. Con lo cual se garantiza

un óptimo resultado dentro de esta experimentación.


− La mejor siembra virtual para el proceso de aislamiento de un microorganismo fue el de

estriado en placa debido a que al emplear el asa de cultivo se esparce la muestra de manera que

se divide en 3 o 4 partes, en las cuales se encuentran aislados los microrganismos.

5. ¿Qué es un medio de cultivo?

Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se multiplican los

microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes especies bacterianas para

poder identificarlas y realizar estudios complementarios.

6. Defina con sus propias palabras los siguientes términos: desinfección, esterilización

y asepsia.

Desinfección: Proceso mediante el cual se eliminan bacterias atreves de materiales de desinfección

como: jabones, geles antibacteriales, alcohol antiséptico entre otros. Cuando se desinfectan lugares

los materiales pueden ser: detergentes, aromatizantes, cloro, agentes de limpieza con el fin de

mantener estéril un determinado lugar y así eliminar los agentes patógenos presentes. (Ramírez,

2021)

Esterilización: Proceso de eliminación de todos los microorganismos que se encuentran dentro de

un objeto o alguna superficie. (Ramírez, 2021)

Asepsia: Procedimiento que tiene como principal objetivo evitar que los gérmenes infecten un

determinado lugar. (Ramírez, 2021)

7. ¿Cuáles son las desventajas de emplear agentes físicos y químicos para la

esterilización?

Métodos físicos:

• Calor húmedo:
− No se puede aplicar en materiales que no soporten las condiciones de este proceso,

como elementos metálicos cromados o niquelados, sustancias pulverulentas,

sustancias grasas y plásticos sensibles. (Silva, 2013)

• Calor seco:

− Requiere de largos periodos de exposición, debido a la baja entrada de calor. (Silva,

2013)

− Acelera el proceso de destrucción del instrumental. (Silva, 2013)

Métodos químicos

− No se puede esterilizar objetos que contengas glucosa, algodón, líquidos, humedad,

madera o instrumental con lúmenes largos y estrechos. (Silva, 2013)

− Son métodos de esterilización costosos. (Silva, 2013)

8. Durante la técnica de placa de rayas (estriado en placa), el asa se calienta entre el

sector de los cuadrantes. Esto garantiza

a. Para obtener colonias densas

b. Para obtener colonias aisladas individuales

c. Para diferenciar las bacterias Gram positivas y Gram negativas

d. Para matar el microorganismo infeccioso.

9. La placa de rayas o agotamiento por estría es un:

a. Método de aislamiento cualitativo

b. Método de aislamiento cuantitativo

c. Método de aislamiento sin dilución

d. Ninguna de las anteriores


10. Una cultura pura se define mejor como

a. grupo de microorganismos que son genéticamente similares

b. grupo de microorganismos que son genéticamente diferentes

c. grupo de microorganismos que son genéticamente similares, pero morfológicamente

diferentes

d. Ninguna de las anteriores

8. BIBLIOGRAFÍA:

8.1. Genova, L. (2009). Control de Procesos de Esterilizacion . Retrieved from Colegio de

Odontologos de Acuruna :

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9

todos_de_esterilizaci%C3%B3n.pdf

8.2.Gil, M. (2019, noviembre 22). Medios de cultivo: historia, función, tipos, preparación.

Lifeder. https://www.lifeder.com/medios-de-cultivo/

8.3.Montes, Y. (2017, 12 marzo). Esterilización de soluciones para productos parenterales.

Análisis de la problemática. Scielo.

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2224-61852017000300001

8.4. Silva, E. (2013, 17 noviembre). Actualización en esterilización del instrumental. PDF.

https://www.sau-net.org/capitulos/infecciones/primera-2018_esterilizacion.pdf
9. ANEXOS

ANEXO 1
Figura 9.1
Acondicionamiento y Esterilización de materiales

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE

ANEXO 2
Figura 9.2
Pasteurización

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE


ANEXO 3
Figura 9.3
Asas de Cultivo

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE

ANEXO 4
Fig. 9.4
Cultivo: Agotamiento por estrías

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE


ANEXO 5
Fig. 9.5
Cultivo: Extensión en placa

Fuente: Grupo 1(2021). Centro de Biología. FIQ-UCE


ANEXO 6
Figura 9.6
Siembra Virtual

Fuente: Oregon State University. (2021). Laboratorio Virtual-Siembra Virtual.


ANEXO 7
Figura 9.7
Cultivo Virtual condiciones Grupo 1, temperatura 10°C

Fuente: CB. (2021)-Laboratorio Virtual sobre Cultivo Virtual de Bacterias.

ANEXO 8
Figura 9.8
Cultivo Virtual condiciones Grupo 1, temperatura 50°C

Fuente: CB. (2021)-Laboratorio Virtual sobre Cultivo Virtual de Bacterias.

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