INFORME
ESTERILIZACIÓN, PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVO Y SIEMBRA DE MICROORGANISMO
ESTERILIZACIÓN, PREPARACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA DE
MICROORGANISMOS
REPORT STERILIZATION, PREPARATION OF
GROWING MEDIA AND PLANTING OF
MICROORGANISM
Hermilsun Valencia Campo1
Karen Sofia Mora Perdomo2
Nathalia Arias Duque3
1
Colombiano. Tecnólogo. Servicio Nacional
de Aprendizaje SENA. Centro Nacional de
Asistencia Técnica a la industria ASTIN.
2
Colombiana. Tecnóloga. Servicio Nacional
de Aprendizaje SENA. Centro Nacional de
Asistencia Técnica a la industria ASTIN.
3 estuvo esterilizado se llevó a la
Colombiana. Tecnóloga. Servicio Nacional
de Aprendizaje SENA. Centro Nacional de
Asistencia Técnica a la industria ASTIN.
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PRAC-PRESIMICRO-
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RESUMEN
El objetivo principal de esta práctica fue
aprender sobre las diferentes técnicas
de preparación de medios de cultivo, su
método de esterilización y métodos de
siembra de hongos y bacterias.
En esta práctica de laboratorio se
comenzó por lavar y esterilizar en la
autoclave el material de vidrio que sería
utilizado a continuación, una vez este
campana de flujo laminar para
comenzar con la preparación de los
mostos, lo que se hizo mezclando 150
ml de agua (H2O) en dos Erlenmeyer de
250ml y las respectivas cantidades de
medio ya fueran Agar Nutritivo o PDA,
se volvió a taponar con el algodón y
gasa y a tapar con el capuchón de
papel y se llevó a la plancha de
agitación y calentamiento a una
temperatura de 200°C, una vez este
entró en ebullición se llevó al autoclave
a 121°C durante 15 minutos, y luego se
procedió a dividir las cantidades de
medio en cada una de las cajas de Petri
y se marcaron con cinta de enmascarar
de acuerdo con lo que contenían.
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CULTIVO Y SIEMBRA DE MICROORGANISMO
A continuación, se esperó a que los
medios se solidifican y se procedió con
las siembras de los hongos y bacterias.
INTRODUCCIÓN
Los microorganismos se encuentran en
la naturaleza, como todos los seres
vivos, inmersos en un medio ambiente;
bajo la influencia de factores físicos y
químicos, los cuales ejercen en su
crecimiento y desarrollo un efecto
decisivo, favorable o desfavorable. en el
trabajo del laboratorio microbiológico y
en la higiene y saneamiento de locales,
personas, animales y alimentos se
destaca el rol de todo procedimiento,
técnica o producto que suprima o
disminuya la viabilidad de los
microorganismos patógenos. prácticas
como la esterilización, desinfección,
antisepsia y sanitización ayudan al
control del crecimiento bacteriano.
En cuanto a los medios de cultivo, la
técnica más usada en el laboratorio de
microbiología es probablemente la
transferencia de microorganismos de un
ambiente a otro con el propósito de
cultivarlos. Una vez que el medio de
cultivo está debidamente preparado se
procede a inocular la muestra deseada.
Si se desea aislar o separar los
diferentes tipos microbianos que se
encuentran en una muestra (agua,
materias primas, alimentos, etc.) se
pueden utilizar distintas técnicas de
siembra. Sembrar o inocular es
introducir artificialmente una porción de
la muestra (inóculo) en un medio de
cultivo adecuado con el fin de iniciar un
cultivo microbiano; y se realizan
diferentes metodologías de acuerdo con
el fin que se persiga. Luego de
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sembrado, el medio de cultivo se incuba
a una temperatura adecuada para el
crecimiento. (María M. Reynoso, Carina
E. Magnoli, Germán G. Barros y Mirta S.
Demo, 2015).
MATERIALES Y METODOS
Los materiales para utilizar fueron
Algodón, gasa, papel aluminio, un queso
azul, un trozo de pan de panadería
previamente humedecido y colocado en
una bolsa plástica, o una fresa
conservada a temperatura ambiente en
un frasco de vidrio, un pliego de papel
Kraft, un Encendedor (candela). Los
materiales y equipos que suministra el
laboratorio Cabina de Flujo Laminar,
Autoclave, Incubadora, Balanza
analítica, Planchas de agitación,
Mecheros de alcohol, Erlenmeyer de
250 ml, Probeta de 100 ml, dos
Espátulas, tres Vasos de precipitados
200 mL, ocho Cajas Petri, un asa
microbiológica de aro, un asa
microbiológica de punta y un agitador
magnético. Los reactivos que se usaron
fueron agar nutritivo, agar PDA, Jabón
neutro, Alcohol etílico (en solución para
desinfectar) y Agua destilada.
Esterilización de Material de Vidrio
Lavar el material de vidrio con jabón
neutro y enjuagar con agua potable.
Escurrir el exceso de agua. Purgar con
agua destilada y dejar secar al medio
ambiente. Envolver el material de vidrio
con papel Kraft (tener en cuenta las
recomendaciones de su instructor).
Nota: Al erlenmeyer colocar un tapón de
algodón en la boca (Consultar videos en
YouTube sobre como armar el tapón y
como colocarlo). Colocar en autoclave
por 15 minutos a 121°C.
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Medio de cultivo papa-dextrosa agar
pda (medio de cultivo solido hongos)
o agar nutritivo (medio de cultivo
sólido para bacterias)
Encender la campana de flujo laminar.
Limpiar la superficie de la campana con
alcohol al 70%. El material esterilizado
que se va a utilizar se debe disponer en
la campana de flujo laminar. Pesar la
cantidad de medio de cultivo calculado.
Medir el volumen de agua necesario con
una probeta según los cálculos. En un
erlenmeyer de 250ml mezclar el medio
deshidratado con el agua requerida.
Colocar el tapón de algodón y gasa al
Erlenmeyer y colocarlo en la plancha de
calentamiento y agitación. Calentar a
una temperatura de 200°C con agitación
hasta que inicie la ebullición. Cortar
cuadros de aproximadamente
12cmX12cm de papel aluminio. Sacar el
agitador magnético de la mezcla
(previamente destapar el erlenmeyer).
Tapar el erlenmeyer con papel aluminio,
no muy ajustado para no hacer sello
hermético (¡Ojo! Sin quitar el tapón de
algodón y gasa). Esterilizar en la
autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Una vez se abra la autoclave llevar la
preparación a la cabina de flujo laminar.
Dejar enfriar en la cabina a una
temperatura aproximada de 45°- 50°C
de tal manera que puedan ser
manipulados. Vaciar el medio en
volúmenes de aproximadamente 25 ml
(más o menos hasta la mitad de la caja
Petri) en cajas de Petri en condiciones
asépticas (es decir en la cabina de flujo
laminar con el mechero encendido).
Nota: Antes de hacer el vaciado flamear
la base de la caja de Petri con el
mechero. Y al terminar el vaciado
flamear la tapa de caja Petri y proceder
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a taparla. Marcar para cada medio de
cultivo las cajas Petri de acuerdo con el
medio que contenga, sellar con cinta de
enmascarar y dejarla donde le indique el
instructor para ser usada en la próxima
práctica.
Siembra/Aislamiento de Bacterias y
Hongos
Para el proceso de siembra se partirá de
cultivos realizados por los aprendices:
Cultivo frotis de nariz o de la zona bucal:
bacterias y Cultivos en trozo de pan de
panadería o en frutos: hongos.
Siembra en Cajas Petri por la Técnica
de Agotamiento
Alistar la cabina de bioseguridad
(prenderla, limpiarla y desinfectarla).
Encender el mechero ubicado dentro de
la cabina. Llevar a la cabina los cultivos
con los microorganismos que le fueron
asignados. Colocar frente al mechero la
muestra que contiene los
microorganismos y la caja Petri con el
agar nutritivo estéril. Del cultivo que
contiene el microorganismo (zona nasal
o bucal) seleccione la colonia con la
cual va a trabajar. Tomar la caja de Petri
con el medio de cultivo estéril y
mantenerla ligeramente inclinada. Al
tiempo tomar con el asa de argolla
(previamente esterilizada a la llama) una
pequeña muestra del cultivo, de la
colonia seleccionada. Llevar la muestra
tomada con el asa a un área pequeña
de la superficie de la caja Petri próxima
al borde. Extender la muestra formando
estrías muy juntas, cubriéndose
aproximadamente hasta 1/3 de la caja.
Flamear el asa de nuevo y enfriar en
una parte lateral de la caja. Realizar una
nueva estría partiendo de la primera y
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arrastrando los microorganismos

presentes en ella hacia el extremo
contrario del agar. Procurar que las
estrías queden trazadas con mayor RESULTADOS Y DISCUSION
separación. Repetir el procedimiento por
tres veces. Flamear el asa y tapar la MUESTRA 1
caja Petri. Incubar la muestra a 30°C en MUESTRA 2
(Agar
(Agar PDA)
posición invertida durante 24 horas o nutritivo)
Pan Húmedo
hasta 8 días. Observar la aparición de Nasal
colonias y reportar la información. Forma Puntiforme Filamentosa
Elevación Plana Plana
Siembra en Cajas Petri por la Técnica Borde Ondulado Ondulado
de Punción Puntiforme/
Tamaño Grande
pequeña
Alistar la cabina de bioseguridad Superficie Lisa Rugosa
(prenderla, limpiarla y desinfectarla). Consisten
Encender el mechero ubicado dentro de Dura Dura
cia
la cabina. Llevar a la cabina los cultivos Aspecto Brillante Mate
con los microorganismos que le fueron Pigmentac
Blanco Blanco
asignados (pan o fruta). Colocar frente ión
al mechero la muestra que contiene los
microorganismos y la caja Petri con el IMAGEN
agar PDA estéril. Del cultivo asignado,
seleccionar una colonia de la cual va a
tomar la muestra de micelio. Tomar la Tabla 1. Reporte de Resultados.
caja de Petri con el medio de cultivo
MUESTRA 3 MUESTRA
estéril y mantenerla ligeramente (Agar 4 (Agar
inclinada. Al tiempo tomar con el asa de nutritivo) PDA)
punta (previamente esterilizada a la Bucal Queso Azul
llama) una pequeña muestra del cultivo, Forma Puntiforme Filamentosa
de la colonia seleccionada. Inocular el Elevación Plana
Mamelonad
microorganismo por una punción suave a
en el centro de la caja con el agar PDA Borde Entero Ondulado
estéril. Realizar varios puntos de Pequeño/
Tamaño Mediano
puntiforme
siembra (múltiples picaduras en el agar
Superficie Lisa Rugosa
PDA) si es necesario. Incubar la
Consistencia Blanda Dura
muestra a 30°C en posición invertida
Aspecto Brillante Opaco
durante 24 horas o hasta 8 días.
Pigmentació
Observar la aparición de colonias y n
Blanco Verde
reportar la información.

IMAGEN

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Tabla 2. Reporte de Resultados. general. Universidad Autónoma

Metropolitana.
Al comparar las imágenes de las Rojas-Triviño, A. (2011). Conceptos y
muestras 1 y 3 (Agar Nutritivo) se puede prácticas de microbiología
evidenciar una gran diferencia, donde general. Universidad Nacional de
en el cultivo de la muestra 1 (nasal) Colombia - Sede Palmira.
hubo mayor crecimiento de María M. Reynoso, Carina E. Magnoli,
microorganismos con respecto a la Germán G. Barros y Mirta S.
muestra 2 (bucal). Una las principales Demo, (2015). Manual de
causas de esto pueden ser que no fuera Microbiología general.
sembrada una proporción adecuada de Universidad Nacional de Río
microorganismos (no se tomó suficiente Cuarto – Argentina.
muestra con el asa). En la muestra 2
(Agar PDA, Pan) hubo un crecimiento
exponencial del hongo aspergillus
donde 3 de los puntos donde fue
ubicada la siembra fueron conectados
con ramificaciones filamentosas, por
último, en la muestra 4 (Agar PDA,
Queso Azul) se presenta un crecimiento
a gran escala de una colonia del hongo
penicilium lo cual indica una siembra en
adecuadas condiciones y muy bien
efectuada.
CONCLUSIONES
Se logro aprender las técnicas de
preparación de medios de cultivo de
diferentes clases y su forma de
esterilización.
Durante el desarrollo de esta práctica se
aplicó los procedimientos que se deben
realizar para la elaboración de un medio
de cultivo.
Se estudió la importancia de los
diferentes medios de cultivo para la
identificación de los tipos de
microorganismos en la siembra.
BIBLIOGRAFÍA
Aquiahuatl, R. M., & Pérez, C. M.
(2004). Manuel de prácticas de
laboratorio de microbiología

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