CÁMARA DE NEUBAUER

Biología Molecular y Citogenética 1

CÁMARA
DE
NEUBAUER

LUCÍA NÚÑEZ GONZÁLEZ

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Biología Molecular y Citogenética 2

ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN…………………………….….3

2. OBJETIVOS…………………………………….…3

3. MATERIALES……………………………………..3

4. PROCEDIMIENTO………………………………4

5. RESULTADOS………………………………….…4

6. CÁLCULOS………………………………………...5

7. ANEXO…………………………………………..…6
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1. INTRODUCCIÓN

La cámara de Neubauer se trata de un instrumento de laboratorio cuyo objetivo es

permitir un conteo fácil de células como los eritrocitos o de espermatozoides, además
de esporas, parásitos, etc. Consta de una placa de vidrio rectangular, 2 canales
transversales, 2 canales longitudinales y 5 secciones diferenciadas (cuadrados) que
facilitarán el conteo de sustancias.

2. OBJETIVOS

• Aprender a utilizar la cámara de Neubauer.

• Acostumbrarnos al conteo celular a través de microscopio.
• Conocer y trabajar con los conceptos de densidad celular y viabilidad celular
(relación de células vivas y muertas).

3. MATERIALES

• Gradilla.
• Lanceta estéril.
• Tinción. En nuestro caso hemos utilizado azul de metileno y hematoxilina.
• Sangre.
• Microscopio óptico.
• Tubo Eppendorf.
• Papel de filtro que colocaremos sobre la poyata.
• Cubreobjetos.
• Portaobjetos.
• Micropipeta.
• Cámara de Neubauer.
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4. PROCEDIMIENTO

1. Con ayuda de la lanceta extraemos aproximadamente unos 100l de sangre

por tubo. Al mismo tiempo las introducimos en el tubo Eppendorf. Este material
se sujeta gracias a la gradilla, que permite una mejor manipulación del mismo.
Cabe destacar que hemos empleado 2 tubos en la práctica.
2. Teñimos la muestra con ayuda de la tinción de hematoxilina y de azul de
metileno y esperamos el tiempo necesario. Cada una
se vierte sobre un tubo distinto.
3. Agitamos, con precaución, la sustancia con el objetivo
de mezclar sus componentes.
4. Con ayuda de la micropipeta extraemos unos 20 l del
producto y lo vertemos sobre cada uno de los 2 canales
transversales del hematocitómetro hasta llenarlo. El
líquido es capaz de entrar en la cámara por capilaridad. Debemos evitar echar
demasiada cantidad de líquido.
5. Colocamos, sobre la cámara, el cubreobjetos. Ya está lista para visualizar bajo
microscopio.

*Dado que la tinción de azul de metileno que tenemos en nuestro laboratorio posee
una concentración demasiado alta, tuvimos que repetir la práctica, ya que durante
el primer intento la muestra quedó estropeada por la tinción excesiva.

5. RESULTADOS

En la siguiente imagen, obtenida de internet,

podemos apreciar numerosas células, que se
corresponden con los puntos de la fotografía. El
siguiente paso es calcular el número de células/ml
y la densidad con la que contamos.
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6. CÁLCULOS

*Cabe destacar que, dado que no realizamos un conteo celular durante la práctica,
obtuvimos una serie de datos de un vídeo.

CUADRADOS Células viables Células muertas

1 80 células. 10 células.

2 76 células. 8 células.

3 82 células. 13 células.

4 84 células. 13 células.

5 80 células. 8 células.
Leyenda de los cuadrantes.

• Volumen de tinte=100l.
• Volumen final=200l.
• Volumen de células= 100 l.
𝑉𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 200𝑙
• Factor de dilución=
𝑉𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠
= 100𝑙 = 𝟐𝒍

• Total células viables=80 + 76 + 82 + 84 + 80 = 𝟒𝟎𝟐 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔

• Total células inviables=10 + 8 + 13 + 13 + 8 = 𝟓𝟐 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔

𝑐é𝑙 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 402
• %𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 = 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
∗ 100 = 454 ∗ 100 = 𝟖𝟖, 𝟓𝟓% 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔 𝒗𝒊𝒂𝒃𝒍𝒆𝒔
𝑐é𝑙 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 402 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
• 𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 = 𝑛º 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 = 5
= 𝟖𝟎, 𝟒 𝒄𝒖𝒂𝒅𝒓𝒂𝒅𝒐
𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
• [ ] = 𝑃𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠 ∗ 𝐹𝐷 ∗ 104 = 80,4 ∗ 2 ∗ 104 = 𝟏, 𝟔𝟎𝟖 ∗ 𝟏𝟎𝟔
𝑚𝑙 𝒎𝒍
𝑛º 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠 454 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
• 𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟(𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠) = 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛(𝑚𝑙−𝑙) ∗ 𝐹𝐷 = 200 𝑙
∗ 2 = 𝟒, 𝟓𝟒 𝑙
402 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
• 𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 (𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠) = 200 𝑙 ∗ 2 = 𝟒, 𝟎𝟐 𝒍
52 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
• 𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 (𝑖𝑛𝑣𝑖𝑎𝑏𝑙𝑒𝑠) = 200 𝑙 ∗ 2 = 𝟎, 𝟓𝟐 𝑙
80,4 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔
• 𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑟 (𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜) = 200 𝑙 ∗ 2 = 𝟎, 𝟖𝟎𝟒 𝑙
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7. ANEXO

Partes de una cámara de Neubauer. En la

segunda foto se aprecian las 5 secciones en
forma de cuadrado.