UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

CENTRO DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA 6:

CÁMARA DE NEUBAUER

INTEGRANTES

Dayana Borja

Ingrid Carrera

Jazmín Guadamud

Nicole Plaza

Tatiana Pila

Fernanda Ramos

PARALELO 1

DOCENTE: Dr. Pablo Araujo PhD.

AYUDANTE DE CATEDRA: Francisco Gonzales Valerio

QUITO-ECUADOR

2019 – 2019
 RESUMEN

Determinación de la concentración de microorganismos por el método Cámara de Neubauer.

Para ello se procedió a la activación de la levadura utilizando un monosacárido, se tomó un
volumen con ayuda de un instrumento volumétrico, posteriormente esta solución fue colocada
en un cubreobjetos de la cámara Neubauer, se aplicó presión para evitar formación de
burbujas y por capilaridad el líquido llenó las dos cavidades de la cámara para ser analizada
en el microscopio para el conteo de todos los microorganismos observados, obteniendo de
esta manera una ecuación de concentración de cámara de Neubauer la cual nos permitió el
cálculo de la concentración bacteriana. Se concluyó que el método Cámara de Neubauer es un
permite definir directamente la concentración bacteriana mediante un conteo continuo del
crecimiento microbiano en función del tiempo.

PALABRAS CLAVE: CÁMARA_NEUBAUER/ CONCENTRACIÓN_CELULAR/

CONTEO_CELULAR/ CUADRANTE_DE_NEUBAUER
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FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL

PRACTICA 6

CÁMARA DE NEUBAUER

1. OBJETIVOS
 Determinar la concentración de microorganismos por el método cámara de
Neubauer
2. TEORÍA
2.1.Cámara de Neubauer
La cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar
el recuento de esporas y células en un medio líquido como: cultivo celular, sangre, etc.
Esta cámara de recuento está adaptado al microscopio de campo claro o al de contraste de
fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas cuyo fondo
es marcado con ayuda de un diamante.
A partir del número de cédulas contadas, conociendo el volumen de líquido con las cédulas
a contar, se calcula la concentración de cédulas en la muestra líquida aplicada.
El cálculo de la concentración de células se puede expresar así:
𝑃𝑎𝑟𝑡í𝑐𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑝𝑎𝑟𝑡í𝑐𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠
= ∗ 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑢𝑙 𝑠𝑢𝑝𝑒𝑟𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎 [𝑚𝑚2 ] ∗ 𝑝𝑟𝑜𝑓𝑢𝑛𝑑𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐á𝑚𝑎𝑟𝑎 [𝑚𝑚]
2.2.Para que sirve cada cuadrante de la cámara de Neubauer
En la retícula central, la cámara de Neubauer tiene un cuadrado primario que contiene
nueve cuadrados secundarios, cada uno de ellos divido a si vez en 16 cuadrados terciarios.
El cuadrado secundario central contiene 25 cuadrantes, cada uno de ellos dividido a su vez
en 16 cuadrados cuaternarios.

 Cuadrado 1
á𝑟𝑒𝑎 = 1𝑚𝑚 ∗ 1𝑚𝑚 = 1𝑚𝑚2
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 = 1𝑚𝑚2 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 0,1𝑚𝑚3 = 1 ∗ 10−4 𝑚𝐿
# 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑑𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 ∗ 10000
[𝐶] =
# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠

 Cuadrado 2
á𝑟𝑒𝑎 = 0,25𝑚𝑚 ∗ 0,25𝑚𝑚 = 0,0625𝑚𝑚2
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 = 0,0625𝑚𝑚2 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 6,25 ∗ 10−6 𝑚𝐿
# 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑑𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 ∗ 160000
[𝐶] =
# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠

 Cuadrado 3
á𝑟𝑒𝑎 = 0,2𝑚𝑚 ∗ 0,2𝑚𝑚 = 0,04𝑚𝑚2
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 = 0,04𝑚𝑚2 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 4 ∗ 10−6 𝑚𝐿
# 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑑𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 ∗ 250000
[𝐶] =
# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠
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 Cuadrado 4
á𝑟𝑒𝑎 = 0,05𝑚𝑚 ∗ 0,05𝑚𝑚 = 0,0025𝑚𝑚2
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 = 0,0025𝑚𝑚2 ∗ 0,1 𝑚𝑚 = 0,00025 𝑚𝑚3
# 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑐é𝑑𝑢𝑙𝑎𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑎𝑠 ∗ 4 ∗ 106
[𝐶] =
# 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠

3. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Material y Equipos

 Microscopio
 Cámara de Neubauer
 Vaso de precipitación
 Jeringuilla de insulina

3.2. Sustancias y reactivos

 Alcohol.
 Levadura
 Azúcar

3.3. Procedimiento

Preparación de la muestra:
1- Lavar la cámara y el cubre con agua destilada y alcohol 96%.
2- Secar bien con papel suave.
3- Poner el cubreobjetos encima de la cámara.
4- Homogeneizar removiendo bien el cultivo en donde residen las levaduras.
5- Tomar 10 micro litros de la levadura activada en la jeringuilla de insulina
6- Poner la punta de la jeringuilla en una de las dos ranuras de la cámara y, por
capilaridad, las levaduras se distribuirán en la cámara.
7- Si se crea una cámara de aire repetir la operación desde el principio.
8- Fijar la cámara de recuento en la platina del microscopio para realizar la observación
microscópica.
9- Esperar unos minutos antes de contar para que las levaduras se depositen en la cámara.

Preparativos del microscopio:

El enfoque del microscopio se empieza con el objetivo de menor aumento que
posteriormente pasaremos a uno de más. Se centra el objetivo del microscopio a ojo en el
centro teórico de la cruz de la cámara, luego se coloca el objetivo lo más cerca posible
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del cubreobjetos, pero sin tocarlo y posteriormente se irá alejándolo hasta que la imagen
sea lo más clara y nítida posible. Se aconseja trabajar a 400 aumentos.

4. Parte Experimental

4.1 Datos Experimentales.

Tabla 4.1-1
Datos de conteo de microorganismos

Numero de Numero de
Cuadrante microorganismos sección microorganismos sección
1 2
1 31 27
2 26 56
3 24 37
4 33 42
5 28 53
Total 142 215
Fuente: Laboratorio de Biotecnología industrial, UCE
4.2. Cálculos.

𝑿 𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔 # 𝒄𝒖𝒂𝒅𝒓𝒐𝒔 𝒄𝒂𝒎𝒂𝒓𝒂 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒎𝟑

× × = 𝒙 𝒎𝒊𝒍𝒍𝒐𝒏𝒆𝒔 𝒅𝒆 𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔/𝒎𝒍 (1)
𝒀 𝒄𝒖𝒂𝒅𝒓𝒐𝒔 𝒗𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝒄𝒂𝒎𝒂𝒓𝒂 𝟏𝒎𝒍

𝟐𝟖. 𝟒 𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔 𝟒𝟎𝟎 𝒄𝒖𝒂𝒅𝒓𝒐𝒔 𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝒎𝟑 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔

× × = 𝟕𝟏𝟎𝟎𝟎𝟎𝟎
𝟏𝟔 𝒄𝒖𝒂𝒅𝒓𝒐𝒔 𝟎. 𝟏 𝒎𝒎𝟑 𝟏𝒎𝒍 𝒎𝒍

5. RESULTADOS.
Tabla 5.1-1
Concentración.

Concentración
Sección
[células/ml]
1 7100000
2 10750000
Fuente: Laboratorio de Biotecnología industrial, UCE

6. DISCUSIÓN
El método cualitativo utilizado en la práctica fue válido ya que se logró analizar los
componentes y el funcionamiento de la cámara de Neubauer reconociendo así los cuadrantes
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y secciones presentes en ella, las mismas que permitieron observar con gran claridad las
células, por otro lado el método cuantitativo que se empleó fue apto para la experimentación
esto ya que se logró cuantificar la cantidad de células presentes en la muestra y mediante los
cálculos matemáticos obtener la concentración de microorganismos en la misma, además con
los datos obtenidos se pudo graficar , se cometieron algunos errores aleatorios puesto que
inicialmente no se tomó el tiempo para cada contaje, por lo que se tuvo que repetir el mismo,
por otro lado el método empleado fue sin tinción lo que no permitió diferenciar una de otra
debido a la gran cantidad de células presentes afectando de igual forma a lo antes mencionado.
Se recomienda realizar más diluciones para disminuir así la concentración de la muestra y
obtener una mejor diferenciación de las células al momento de ser observadas en el
microscopio, así como también utilizar un contador eléctrico o una cuenta bultos para realizar
el recuento ya que manualmente toma mucho tiempo y confusión provocando datos inexactos.

7. CONCLUSIONES
 Se determinó que la cámara de Neubauer es un método directo que nos permite determinar la
concentración del crecimiento microbiano a través del tiempo y que esta concentración obtenida
depende directamente del nivel de activación de la levadura para apreciar el incremento celular,
además de factores como la concentración de la solución, la turbidez de la levadura influye
directamente en la visibilidad de las células producidas, por tanto influye directamente en el factor
de conteo de las mismas. –Fernanda Ramos
 Se determinó la concentración de microorganismos por el método de la cámara de Neubauer la
misma que resultó un valor de entre 7 y 10 millones de células por cada mililitro como se muestra
en los resultados; es un valor aceptable para el reconteo rápido de microorganismo pero esto no
significó que sea exacto ya que en el procedimiento no se distingue células vivas de muertas debido
a que se utiliza otras técnicas para esta diferenciación, sin embargo al ser uno de los métodos más
rápidos es bastante utilizado e incluso el objetivo fue adquirir más habilidad para el reconteo de
microorganismos en muestras líquidas como se experimentó. Ingrid Carrera
 La cámara de Neubauer tiene muchas limitaciones, ya que no se puede distinguir entre células
vivas y muertas en la observación, lo que afectaría notablemente a los cálculos de crecimiento
microbiano. De acuerdo con la Tabla 4.1-1 se pudo determinar una cantidad considerable de
microorganismos en la cámara de Neubauer, esto como resultado de una dilución de orden 10 -3
utilizada para realizar la cuantificación de células presentes, se observó un mayor cantidad de
microrganismos en la sección dos ya que esta sección se contabilizó después de una lapso de
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tiempo aproximado de 7 minutos con lo cual se concluye que las células de levaduras se
reprodujeron en este lapso de tiempo; en la curva de crecimiento microbiano (Ver anexo 2) se
observa el crecimiento de las células con lo que se concluye que los microorganismos tienen una
reproducción exponencial hasta que llegan a la fase de muerte. Jazmin Guadamud
 En base a las observaciones realizadas en el microscopio sobre la cámara de Neubauer y a los
datos registrados en la tabla 4.1-1, se concluye que la distribución de células en cada cuadrante no
siguió un determinado patrón, contrario a esto se observó que ciertos cuadrantes contenían más
células entre líneas de frontera que otros, además se pudo verificar que el método de conteo en la
cámara de Neubauer fue efectivo para determinar la concentración de los microorganismos en la
muestra líquida calculándose valores aproximados de 7,1x105 y 1,07x107 células/ml como se
observa en la tabla 5.1-1. Dayana Borja.
 Se concluye mediante las observaciones realizadas en la cámara de Neubauer que es un método
rápido y simple para el conteo de celular, pero no permite el reconocimiento de células viable y
no viable a menos que se someta a las células a algún tipo de tinción, además se pudo determinar
el crecimiento celular de la levadura en un determinado tiempo como se observa en la tabla 4.1-1
que el total de células en la sección 2 es mayor que en la sección 1 debido que tuvo un mayor
tiempo para la duplicación y mediante la utilización de expresiones matemáticas y características
de diseño de la cámara se pudo determinar la concentración de células en mililitro llegando a la
conclusión que había una mayor concentración de células en la sección número 2 que en la sección
1 y que la concentración inicial debido al mayor tiempo de duplicación como se dijo anteriormente.
Tatiana Pila Fonseca

8. CUESTIONARIO.

8.1. De donde sale el término 10000, en la ecuación de concentración para la cámara

Neubauner, Explicar con ecuaciones.
 En caso de haber empleado los cuadrantes de 0.04 mm, se calcula en número de células
en 0.1 mm3 con la siguiente ecuación:

𝐍ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐥 𝐝𝐞 𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐜𝐨𝐧𝐭𝐚𝐝𝐚𝐬

𝐍ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐝𝐞 𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐞𝐧 𝟎. 𝟏 𝐦𝐦𝟑 = (𝟐)
𝐍ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐝𝐞 𝐜𝐮𝐚𝐝𝐫𝐨𝐬 𝐝𝐞 𝟏 𝐦𝐦𝟐 𝐞𝐧 𝐞𝐥 𝐜𝐨𝐧𝐭𝐞𝐨

 Esto dará el número total de células por 0.1 mm3 (volumen obtenido de multiplicar el área
de 1mm2 x 0.1mm profundidad de la cámara).
 El número de células por mL se obtendrá de multiplicar el valor obtenido anteriormente
por 10,000, como lo muestra la siguiente ecuación:
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Número de células por mL = Número de células en 0.1 mm3 x 10, 000 (3)

 En caso de haber empleado los cuadrantes de 1 mm, se calcula el número de células en

0.1 mm3 con a la siguiente ecuación:

𝐍ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐥 𝐝𝐞 𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐜𝐨𝐧𝐭𝐚𝐝𝐚𝐬

𝐍ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐝𝐞 𝐜é𝐥𝐮𝐥𝐚𝐬 𝐞𝐧 𝟎. 𝟏 𝐦𝐦𝟑 = (𝟒)
𝐍ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐝𝐞 𝐜𝐮𝐚𝐝𝐫𝐨𝐬 𝐝𝐞 𝟏 𝐦𝐦𝟐 𝐞𝐧 𝐞𝐥 𝐜𝐨𝐧𝐭𝐞𝐨

 Este valor corresponderá al número total de células en 0.1 mm3. Para obtener el número
por mL, se multiplica por 10,000. (UNAM, 1986)

8.2.Aplicaciones para todos los cuadros de la cámara de Neubauer.

Entre sus aplicaciones tenemos las siguientes:

 Recuento de glóbulos.
 El conteo de espermatozoides.
 Cultivo celular.
 Elaboración de la cerveza.
 Procesamiento celular para el procesamiento posterior.
 Medición de tamaño de celda. (Naga, 2012)
8.3.Ventajas y desventajas del método de recuento por cámara de Neubauer.
 Ventajas
 Conteo rápido de microorganismos.

 Desventajas
 No se distinguen las celulas muertas de las vivas.
 Células pequeñas son difíciles de distinguir.
 Se requiere tiempo y habilidad.
 Se requiere un microscopio de contaste de fases si las celulas no están teñidas.
 No es buen método para suspensiones muy diluidas (>106 células/mL).
(Rojas,2016)

9. BIBLIOGRAFIA
 Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). 1986. Biología Celular. Manual
de Prácticas. Departamento de Biología, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional
Autónoma de México. pp. 20-28.
 Naga M. (2012). La cuantificación de las células bacterianas o esporas de hongos
mediante el uso de cámara de Neubauer. Investigador Prometeo – SENESCYT.
Universidad Estatal Amazónica Puyo - Ecuador
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 Rojas, L. (2016). Microbióloga General. Agencia de Protección Ambiental de los

Estados Unidos (USEPA).
 Laboratory Galssware. (2002). Folleto explicativo de la técnica de recuento en cámara
de Neubauer.pdf
 A.A. (2000). Fórmula cámara de Neubauer. Recuperado de:
https://www.celeromics.com. [Acceso el 24 de Mayo de 2019]

10. ANEXOS
10.1. Diagrama del equipo. (VER ANEXO 1)
10.2. Curva de crecimiento microbiano (VER ANEXO 2)
 ANEXO 1

9.2. Diagrama de equipo

Figura 9.1-2

Fuente: Centro de Biología, UCE

1. Microscopio
2. Gradilla
3. Jeringuilla de insulina
4. Cámara de Neubauer
5. Contador
6. Tubo de ensayo

Nombre: Fecha:
Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Grupo 3 2019/17/05
Facultad de Ingeniería Química
Francisco Escuela de Ingeniería Química
Revisa: 2019/25/05
Gonzales

Escala: Diagrama de equipo Lámina: 1

ANEXO 2

9.2. Curva de crecimiento microbiano

Figura 9.1-2 Curva de crecimiento microbiano

Curva de crecimiento microbiano

16.5
16.19041631

16 15.77560534
Ln (celulas)

15.5

15

14.5

14.25376549
14
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
Tiempo (min)

Fuente: Centro de Biología, UCE

Tabla 9.1-1: Crecimiento celular en función del tiempo

Concentración Concentración LN
Sección tiempo
[células/ml] [células/ml]
0 1550000 14.25376549
1 20 7100000 15.77560534
2 40 10750000 16.19041631
Fuente: Centro de Biología, UCE

Nombre: Fecha:
Universidad Central del Ecuador
Dibuja: Grupo 3 2019/17/05
Facultad de Ingeniería Química
Francisco Escuela de Ingeniería Química
Revisa: 2019/25/05
Gonzales

Escala: Crecimiento celular en función del tiempo Lámina: 2