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Espectroscopía.
Espectroscopía de
absorción molecular
y de emisión y
absorción atómica
3
/ 1. Introducción y contextualización práctica 4
/ 11. Bibliografía 15
© MEDAC
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Conocer los fundamentos básicos de espectroscopía.
No fue hasta 1666 cuando Isaac Newton definió la palabra ‘spectro’ para describir la dispersión de la luz del sol
en diferentes colores, cuando atravesaba un prisma. Posteriormente, en 1760, el matemático y científico alemán
Heinrich Lambert publicó la ‘Ley de la absorción’. En 1895, se descubrieron los rayos X. Y, en 1905, el efecto
fotoeléctrico fue explicado por Albert Einstein.
A lo largo del presente tema, nos vamos a centrar en la espectroscopía, técnica analítica experimental que nos
permite estudiar la absorción y la emisión de radiación electromagnética por la materia. Además, se analizarán las
leyes de absorción, así como también los componentes de un espectroscopio, aparato especializado en el análisis
de la luz.
El color es la característica de la materia que puede apreciarse de forma más fácil respecto a la absorción: el color
que presenta un componente corresponde a la longitud de onda del espectro visible que no absorbe. Por ejemplo, la
sangre la vemos roja porque absorbe todas las radiaciones del visible excepto la que corresponde al rojo.
Por tanto, la espectroscopía es un conjunto de métodos basados en cómo interactúa la radiación electromagnética
con la materia, traduciéndose en absorción y emisión de energía.
La Radiación Electromagnética (REM) se compone de campos eléctricos y magnéticos que se propagan a velocidad
constante y de forma lineal en el espacio. Las radiaciones electromagnéticas son un conjunto de cantidades de
energía, fotones, que llevan asociada una onda.
La longitud de onda es la distancia que hay entre los picos de una onda y se expresa en nanómetros (nm), donde
1 nm = 10 -9 m. Lo que diferencia a unas de otras es el valor de su frecuencia, entendiendo esta como el número
de veces que oscila una onda en un segundo: cuanto mayor es la frecuencia de una radiación, mayor es su energía.
La relación entre la energía de la radiación y su frecuencia viene dada por esta ecuación:
E=h
Donde:
• E: Es la energía.
• h: Es la constante de Planck.
• : Es la frecuencia.
El espectro electromagnético es el conjunto de las radiaciones electromagnéticas que se dividen en regiones, según
la longitud de onda.
Enlaces de interés...
Si tienes curiosidad sobre el espectro electromagnético, en el siguiente
enlace encontrarás información detallada:
https://www.youtube.com/watch?v=svI4WJYbMpg
TEMA 3. ESPECTROSCOPÍA. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR Y DE EMISIÓN Y ABSORCIÓN ATÓMICA
Análisis bioquímico /6
• La ley de Lambert establece que “la cantidad de luz absorbida por un medio es independiente de la intensidad
de la radiación y dependiente del espesor de la muestra y las características de la misma”.
• Por otro lado, la ley de Beer establece que “la cantidad de radiación absorbida es proporcional al número total
de moléculas que se encuentran en el recorrido de la luz”.
Utilizando ambas leyes, surge la ley de Lambert-Beer, mediante la que se establece una relación directa entre la
absorbancia de una solución y la concentración de dicha solución. Se representa a través de la siguiente ecuación:
A = acl
Donde:
• A: Es la absorbancia.
• a: Es la constante de proporcionalidad denominada absortividad.
• c: Es la concentración del compuesto que absorbe.
• l: Es el paso de la luz.
• La absortividad (a) se indicará mediante el símbolo , cuyas unidades serán l/mol cm, y se denominará
coeficiente de absorción molar.
A = cl
Hay que tener en cuenta que la proporcionalidad entre absorbancia y concentración en una disolución solamente se
va a cumplir cuando la disolución sea homogénea y la concentración de la sustancia no sea muy elevada.
• Monocromador o filtro: Permite seleccionar una determinada longitud de onda, necesaria para la realización
de la medida, ya que es a la que el compuesto que vamos a estudiar va a absorber la luz. El material del
monocromador es especial, ya que va a dejar pasar, de forma selectiva, las ondas seleccionadas, absorbiendo
el resto.
• Cubetas para muestras: Son recipientes, ópticamente transparentes, donde se van a colocar las disoluciones
de las muestras para realizar las medidas. Generalmente, son de cuarzo, pero también pueden ser de vidrio
y/o plástico (el material a utilizar va a depender de la longitud de onda seleccionada, ya que no todos los
materiales permiten el paso de la luz).
• Detectores: Son los encargados de la conversión de la energía luminosa en energía eléctrica (cuantificable).
Hay de diferentes tipos. Se basan en la diferencia de potencial entre electrodos, causada por el desplazamiento
de electrones que ocasiona la luz no absorbida.
• Dispositivos de lectura, medidores o registros: Son los que reflejan el valor de esa señal eléctrica convertida
por los detectores en unidades de absorbancia o de transmitancia.
• Espectroscopía de absorción atómica: En este caso, la luz que se va a utilizar es la ultravioleta (UV) o visible.
Nos va a permitir detectar y cuantificar los metales presentes en una muestra en estado gaseoso.
• Espectroscopía de emisión atómica: Se emplea una llama en una longitud de onda característica de la
sustancia. Esto provocará que los electrones vuelvan a su estado basal liberando energía en una longitud de
onda determinada. Será posible cuantificar esa intensidad de energía.
• Espectroscopía de IR (infrarrojo): Se emplea luz infrarroja para determinar y cuantificar moléculas cuya
frecuencia de vibración de sus enlaces se da en esa longitud de onda.
• Espectroscopía de luminiscencia: Se basa en la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz, por lo
que se podrá determinar la concentración de esas moléculas, ya que la cantidad de luz es proporcional a su
concentración. Pueden ser técnicas de fosforescencia, fluorescencia y quimioluminiscencia.
Durante la presente unidad, vamos a analizar las técnicas de espectroscopía de absorción molecular (dentro de
las que se incluyen la espectroscopia de absorción molecular UV-V y la espectroscopia infrarroja) y las técnicas de
espectroscopía de absorción y emisión atómica. Dejaremos el estudio de la espectrometría de luminiscencia para
el próximo tema.
Nudo: Define qué es una curva de calibrado y qué tendrías que hacer para determinarla.
Desenlace: Una curva de calibrado es una curva de referencia que se construye a partir de cantidades conocidas de
una sustancia. Permite determinar la cantidad de sustancia de una muestra problema.
TEMA 3. ESPECTROSCOPÍA. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR Y DE EMISIÓN Y ABSORCIÓN ATÓMICA
/9 MEDAC · Instituto Oficial de Formación Profesional
• Preparar disoluciones seriadas de la sustancia conocida. Van a ser nuestro estándar o patrón. La concentración
de estas disoluciones es conocida y creciente. Lo ideal es preparar, al menos, cinco.
• Identificar sustancias de forma cualitativa, comparando los espectros de absorción del analito con espectros
de absorción conocidos.
El equipo que se utiliza es un espectrofotómetro visible-ultravioleta. Es un aparato que permite trabajar en esta
longitud de onda y puede, también, realizar barridos para proporcionar en gráfico de espectro de emisión. Siempre
se hará la medición frente a un ‘blanco’.
Hay veces que las muestras en sí no absorben en el ultravioleta-visible, pero sí los complejos que forman. En este
caso, la aplicación de esta técnica espectroscópica no es directa, ya que necesitará una reacción previa de la muestra,
para la posterior medición de su absorbancia.
TEMA 3. ESPECTROSCOPÍA. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR Y DE EMISIÓN Y ABSORCIÓN ATÓMICA
Análisis bioquímico / 10
Los espectros IR son característicos de cada molécula, por ello se dice que un espectro IR es la ‘huella dactilar’ de
una molécula.
Esta técnica resulta muy interesante a la hora de la determinación cualitativa de diversas sustancias, ya que,
comparando las longitudes de onda que absorbe una muestra en el infrarrojo, nos va a proporcionar información
sobre el tipo de molécula que es.
Los equipos que se van a utilizar son espectrómetros IR; los más conocidos son los NIR (near infrared). Actualmente,
los más usados son los llamados espectrómetros de transformada de Fourier, que aplican métodos matemáticos
muy complejos a los picos que se obtienen del espectro de absorción en esa longitud de onda.
La representación de un espectro de infrarrojo se realiza mediante un gráfico en el que podemos ver la frecuencia
(en número de onda), frente a la transmitancia (porcentaje de luz transmitida). La ecuación que relaciona esto es
la siguiente:
% Transmitancia = IM / IR x 100
Donde:
Sabías que...
Durante la pandemia, la Universidad Rey Juan Carlos intentó aplicar
técnicas de espectroscopía infrarroja para la detección de la COVID-19,
para ayudar al diagnóstico de la enfermedad.
Veamos, en este apartado, la primera de ellas. La espectroscopía de emisión atómica por llama es el método más
utilizado de esta categoría, sobre todo para determinar en disoluciones acuosas componentes como Na, Ca, K, etc.
Para determinar la concentración del analito siguiendo esta técnica, también se necesita aplicar la ley de Lambert-
Beer, realizando la correspondiente curva de calibrado y obteniendo los diferentes valores de absorbancia de las
muestras patrones definidas previamente.
El equipo que se utiliza es un espectrofotómetro de emisión atómica (EEA) y, en este caso, en la cubeta donde
colocamos la muestra, debe situarse un mechero que va a producir la llama para atomizar la muestra. La temperatura
que se alcanza es la necesaria para que haya una excitación de los átomos y una emisión posterior.
Esta técnica está basada en la fluorescencia: cuando la luz visible y/o ultravioleta es absorbida por algunas moléculas,
los electrones de estas pasan del estado basal a un estado excitado; la fluorescencia es la emisión de luz cuando el
electrón vuelve de ese estado excitado al estado basal. En este caso, lo que ocurre es que la energía de esa luz que se
emite es menor que la energía de la luz que previamente se ha absorbido, por lo que su longitud de onda es mayor.
En relación con esto, encontramos la conocida desviación de Stokes, medida que indica la diferencia entre la
longitud de onda de emisión y la longitud de onda de absorción. Generalmente, se obtendrá un buen resultado de
fluorescencia cuando una sustancia presente una diferencia notable entre ambas longitudes de onda.
Hay muchas sustancias que presentan este fenómeno de fluorescencia, la mayoría suelen tener enlaces múltiples
con electrones deslocalizados.
Un plasma es un gas caliente que está ionizado de forma parcial y que contiene una concentración alta de cationes
y electrones. Esta elevada concentración le confiere la característica de conductor.
El gas que se emplea en este tipo de técnica suele ser el argón, que, al ionizarlo, va a producir electrones y iones de
argón; y el movimiento de estos va a provocar que el plasma pueda alcanzar temperaturas muy altas.
En este caso, esta técnica permite alcanzar temperaturas muy superiores a las conseguidas cuando se utiliza una
llama, por lo que la atomización de las sustancias va a ser mayor y también mejor. Así, esta resulta una técnica idónea
para la determinación multielemental, ya que permite que todos los átomos de una sustancia se exciten a la vez.
Es una técnica rápida y permite que se puedan analizar simultáneamente muchos componentes.
En este tipo de espectrometría, como los átomos no se pueden medir de forma directa en una disolución, hay que
volatilizarlos previamente; puede hacerse con llama o de forma electrotérmica. Cuando consigamos volatilizar esos
átomos, van a poder absorber la radiación en una longitud de onda determinada, siendo la luz absorbida proporcional
al número de átomos.
• Lámpara de cátodo hueco: Es distinta para analizar cada metal, ya que se caracteriza por estar hecha del
metal del elemento a analizar.
También suele haber una lámpara complementaria para corregir las interferencias.
• Monocromador: Selecciona el haz de luz con la longitud de onda deseada para realizar el análisis.
Este tipo de equipos sirven para determinar elementos de forma individual; o también un conjunto pequeño de
materiales sin tener que cambiar las fuentes.
Enlaces de interés...
Si tienes curiosidad sobre cómo funciona un equipo de emisión y
absorción atómica, en el siguiente enlace encontrarás un vídeo de
ejemplo:
https://www.youtube.com/watch?v=I0a68JetfoU
Una técnica no citada hasta el momento y similar a la atomización por llama es la llamada atomización electrotérmica.
Desenlace: A continuación, en la siguiente tabla (Tabla 1), podemos ver las principales similitudes y diferencias de
estas dos técnicas espectroscópicas. Hay que destacar que tanto la atomización por llama como la electrotérmica
necesitan que la muestra sea líquida o se presente en una disolución, por lo que toda muestra sólida deberá prepararse
previamente para su análisis.
En general, la elección de uno u otro método dependerá de la concentración del elemento de la muestra a analizar.
En primer lugar, hemos conocido las leyes de la absorción y los componentes de un equipo espectroscópico.
Posteriormente, hemos estudiado las técnicas de espectroscopía más utilizadas, destacando las técnicas de
espectroscopía de absorción molecular (dentro de las que se incluyen la espectroscopia de absorción molecular
UV-V y la espectroscopia infrarroja) y las técnicas de espectroscopía de absorción y emisión atómica (viendo dentro
TEMA 3. ESPECTROSCOPÍA. ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR Y DE EMISIÓN Y ABSORCIÓN ATÓMICA
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de estas últimas las de emisión atómica por llama, las de emisión fluorescente atómica y las de emisión atómica con
atomización de plasma).
Fundamento
Leyes de la absorción
ESPECTROSCOPÍA
Técnicas
Equipos
TÉCNICAS DE
ESPECTROSCOPÍA DE Emisión fluorescente atómica
ABSORCIÓN Y EMISIÓN
ATÓMICA
Emisión atómica con atomización de plasma
Tras el estudio de este tema, podríamos afirmar que la espectroscopía infrarroja sería la técnica seleccionada para
este fin.
/ 11. Bibliografía
Rubinson, K.A., Rubinson, J.F. (2000). Análisis Instrumental. Ed. Pearson Educación.
Burriel, F. (2003). Química Analítica Cualitativa. Editorial Paraninfo. ISBN: 8497321405. Pp. 1072.