FACULTAD DE CIENCIAS Y FILOSOFIA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y FISIOLÓGICAS

Curso: U0009 Biología I

Práctica # 4
Microscopia: Mediciones con el microscopio compuesto de campo claro: Volumen
Autores de la guía: Dra. Margarita Arana, Dr. Oswaldo Ramírez

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Brindar el entrenamiento necesario para que el alumno pueda calcular la concentración
de células en suspensión utilizando la cámara de Neubauer.

I. Midiendo volumen. Uso del hemocitómetro o cámara de Neubauer.

Materiales
Microscopio de luz
Cámara de Neubauer (hemocitómetro)
Suspensión de células
Pipeta Pasteur

Procedimiento

1) La muestra a contar será una dilución (entre 1/10 a 1/1000) a partir de una
suspensión de células.
2) Tome un hemocitómetro y póngalo sobre la mesa. Coloque un cubreobjetos sobre el
centro de la cámara.
3) Use una pipeta Pasteur (o un gotero) para transferir una pequeña gota de la dilución
al hemocitómetro. Coloque la punta de la pipeta en el canal en forma de V del
hemocitómetro (en caso no tenga la ranura, coloque la punta de la pipeta al borde de
la lámina cubreobjetos) y permita que la suspensión fluya hacia la cámara por
capilaridad hasta que ésta se llene. No sobrellene (Fig. 1)

Figura 1. Cargando la cámara

Neubauer con muestra.

4) Agregue una muestra similar al lado opuesto de la cámara y deje que las células
sedimenten por un minuto antes de empezar a contar.
5) Cada cuadrante del hemocitómetro representa un volumen total de 0.1 mm3 ó 10-4
cm3 (Fig. 2).
 Figura 2. Cámara de
Neubauer o hemocitómetro

Un cm3 es equivalente a 1ml y 0.1 mm3 es igual a 10-4 ml por lo que la

concentración de células por ml y el número total de células puede determinarse
usando los siguientes cálculos:

N° Células / ml = promedio contado por cuadrante x factor de dilución x 104

N° Células totales = N° Células / ml x volumen de la suspensión de células

Un (1) Mililitro = 1000 milímetros cúbicos (mm 3) = Un (1) centímetro cúbico (cm3)
Un (1) Microlitro (µl) = Un (1) milímetro cúbico (mm3)

Para que sea válido estadísticamente, la cuenta por cuadrante debe ser aproximadamente
entre 10 y 100 células. Si la cuenta es superior, limpie el hemocitómetro y empiece
nuevamente pero con la muestra más diluida.

Figura 3. Ejemplo de criterio para contar:

Todas las células que caen sobre el borde
izquierdo o el borde superior o sólo lo
tocan, sí se cuentan (18 en el ejemplo).
Las células que caen sobre el borde
inferior o borde derecho o sólo lo tocan,
no se cuentan. La figura representa el
cuadrante de la esquina izquierda superior
del hemocitómetro.
 Ejercicio #1

Cuente las células en los cuatro cuadrantes de las esquinas de la cuadrícula de

hemocitómetro de la figura 4, considerando que se hizo una dilución 1/10 a partir de 10
ml de una suspensión de células. El área de cada cuadrante (que contiene 16 cuadrados
de 0.25 mm de lado) es 1 mm2 y el volumen es 0.1 mm3 (1 mm2 de área x 0.1 mm de
profundidad). Determine el número de células por ml y el número total de células
suspendidas en el tubo inicial y complete la tabla 2.

1 2

3 4

Figura 4. Cuadrícula de hemocitómetro o cámara de Neubauer

Tabla 1. Conteo de células de la figura 4.

Cuadrante # Número de células
1
2
3
4
Promedio
N° células/ml en la
suspensión inicial de
células
N° total de células en
el tubo con la
suspensión inicial de
células
 Ejercicio #2

De manera similar al ejercicio #1, realice ahora el conteo de células en la cámara de

Neubauer. Considerando que se hizo una dilución 1/100 a partir de 10 ml de una
suspensión original de células, determine el número de células por ml y el número total
de células suspendidas en el tubo inicial y complete la tabla 3.

Tabla 2. Conteo de células

Cuadrante # Número de células
1
2
3
4
Promedio
N° células/ml en la
suspensión inicial de
células
N° total de células en
el tubo con la
suspensión inicial de
células

Conclusión

Referencias bibliográficas.
1. Bregman, A. (1983). Laboratory Investigations in Cell Biology. John Wiley & Sons.
New York, Chichester, Brisbane, Toronto, Singapore.

Enlaces internet recomendados para revisar antes de la práctica:

Heidcamp, W. Cell Biology Laboratory Manual.
http://homepages.gac.edu/~cellab/chpts/chpt1/ex1-6.html

Bikandi, J., San Millán, R., Rementeria, A., and Garaizar, J. 2004. In silico analysis of
complete bacterial genomes: PCR, AFLP-PCR, and endonuclease restriction.
Bioinformatics 20:798-9. DOI: 10.1093/bioinformatics/btg491
http://insilico.ehu.es/camara_recuento/

BioyNano Tecnoparque.
http://www.youtube.com/watch?v=AzQywzHjXvA