UNIVERSIDAD TECNICA ESTATAL DE QUEVEDO

FACULTAD DE CIENCIAS PECUARIAS

INGENIERIA EN ALIMENTOS

TEMA:
CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS SEGÚN SU TINCIÓN

INTEGRANTES:
LELIS ALEJANDRINA CHEVEZ PAZ
ALEJANDRO SEBASTIAN ENRIQUEZ ORTEGA
JOSE ALONSO MESTANZA MERA
EVELYN RAQUEL OLIVO PRUNA
MELANI BRIGHIT RIVAS BUSTE
EYDA ARIANA ROSADO ALVAREZ
JEFFERSON MANUEL GONZALEZ QUINTANILLA
DAJARI DAGMAR GALLO FLORES

INGENIERO:
ROMERO GARAICOA DIEGO ARMANDO

CURSO:
III ALIMENTOS “B”
 TINCIÓN
Una tinción es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son
sustancias que usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de
diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser
utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de tejido,
poblaciones celulares o incluso para resaltar orgánulos dentro de células
individuales.
En bioquímica, esto implica agregar un colorante específico a un sustrato para
cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Tanto la
tinción como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos
propósitos.
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n

TINCIÓN DE GRAM 
Es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización
de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al
bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana,
como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación
bacteriana, considerándose bacterias Gram positivas a las que se visualizan de
color morado, y bacterias gramnegativos a las que se visualizan de color
rosado y rojo
Un microorganismo Gram positivo debe presentar una pared celular sana. El
mismo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se
vuelve Gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retención
o el escape del colorante.
Procedimiento

1. Recoger muestras para ubicarlas en el microscopio.

2. Hacer el extendido con un palillo de madera.
3. Dejar secar a temperatura ambiente y fijarlas utilizando un mechero.
4. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor
5. Agregar azul violeta y esperar un minuto.
6. Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
7. Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
8. Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la
concentración del reactivo
9. Enjuagar con agua.
10. Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto.
Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
11. Lavar levemente con agua.
 Bacterias resistentes a la tinción de Gram
Las siguientes bacterias de naturaleza Gram positiva se tiñen como Gram
negativas:

 Mycobacterias (están encapsuladas).
 Mycoplasmas (no tienen pared).
 Formas L (pérdida ocasional de la pared).
 Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared,
respectivamente).
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
Ejemplos
Bacterias Gram positivas:
 Staphylococcus aureus: Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones
localizadas y posibles gastroenteritis.

 Streptococcus pyrogenes: Causante de infecciones supurativas en el

trayecto respiratorio, así como de fiebre reumática.

 Streptococcus faecalis: Usual en infecciones en vías biliares y urinarias,

habita en el colon humano.
Bacterias gramnegativos:
 Neisseria meningitidis: Peligrosa bacteria causante de meningitis y
meningocococemias, coloniza las vías respiratorias humanas y asciende a las
meninges por vía sanguínea.

 Neisseria gonorrhoeae: Conocidísima por ser la causante de la gonorrea,

común enfermedad de transmisión sexual.

 Brucella abortus: Ocasiona la brucelosis, una enfermedad del ganado que se

transmite al hombre por contacto con los animales o por ingesta de lácteos sin
pasteurizar.
https://www.ejemplos.co/20-ejemplos-de-bacterias-gram-positivas-y-gram-
negativas/
TINCIÓN DE ZIEHL-NEELSEN 
Es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada para la
identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes, como M. tuberculosis o el
filo Api complexa . Fue descrita por primera vez por dos médicos
alemanes: Franz Ziehl, un bacteriólogo, y Friedrich Neelsen, un patólogo.
Fundamento
 Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos de cadena
larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos.
Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. El mico bacterias
como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan por sus
propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-
Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con
agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el
colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento
aumenta la energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también
facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración
son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza  azul de
metileno como tinción de contraste. Debido a esto, está que está muy
influenciado con la enfermedad de tuberculosis.
Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes

 Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistentes.

 Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistentes.
 Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras fecales.
https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen
EJEMPLOS
 Mycobacterium tuberculosis: es una bacteria aerobia estricta patógena
responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo. Quien
la descubrió por primera vez, el 24 de marzo de 1882, fue Robert Koch, a quien
posteriormente se le otorgó el Premio Nobel de Fisiología o Medicina.

 Nocardia: es un género de bacterias que se encuentran en suelos de todo el

mundo ricos en materia orgánica. Son catalasa-positivas y con forma de bacilos
filamentosos, parecen hilos alargados. Algunas especies son patogénicas que
causan nocardiosis.

 Cryptosporidium parvum: es un protista, una de tantas especies que causan

criptosporidiosis. La infección causa diarrea aguda, acuosa, no sanguinolenta
en pacientes inmunocomprometidos. En infecciones HIV, puede causar una
diarrea acuosa, que puede asociarse con anorexia, náusea/vómito y también
dolor de abdomen.

https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/#:~:text=La%20tinción%20de%20Ziehl-
Neelsen%20sirve,identifica%20ciertos%20tipos%20de
%20microorganismos.&text=Algunos%20de%20estos%20microorganismos
%20son,por%20ejemplo%2C%20Cryptosporidium%20parvum).

https://www.google.com/search?
client=opera&q=Cryptosporidium+parvum&sourceid=opera&ie=UTF-8&oe=UTF-8
 https://es.wikipedia.org/wiki/Nocardia

https://es.wikipedia.org/wiki/Mycobacterium_tuberculosis
TINCIÓN DE SCHEFFER-FULTON
Es una técnica diseñada para aislar endosporas al teñir cualquier endospora
presente de verde y cualquier otro cuerpo bacteriano de rojo. La tinción
principal
es verde malaquita y la contra tinción es safranina, que tiñe de rojo cualquier
otro cuerpo bacteriano.

Procedimiento
Usando una técnica aséptica, las bacterias se colocan en un portaobjetos y se
fijan con calor. Luego, el portaobjetos se suspende sobre un baño de agua con
una especie de papel poroso sobre él, de modo que el portaobjetos se
vaporice. Se aplica verde de malaquita al portaobjetos, que puede penetrar las
duras paredes de las endosporas y teñirlas de verde. Después de cinco
minutos, se retira el portaobjetos del vapor y se retira la toalla de papel.
Después de enfriar, el portaobjetos se enjuaga con agua durante treinta
segundos. Luego, el portaobjetos se tiñe con safranina diluida durante dos
minutos, lo que tiñe la mayoría de los demás cuerpos de microorganismos de
rojo o rosa. A continuación, el portaobjetos se enjuaga de nuevo y se seca con
papel absorbente. Después de secar, el portaobjetos se puede ver con un
microscopio óptico.
https://es.qaz.wiki/wiki/Schaeffer%E2%80%93Fulton_stain
EJEMPLOS
 Clostridium difficile forma una espora oval en posición terminal que deforma el
bacilo.

 La espora de Clostridium tertium es oval, no deforma al bacilo y se ubica a nivel

terminal.

 La endospora de Clostridium tetani es terminal y deforma al bacilo, dando el

aspecto de un palillo de tambor.

 Las esporas de Clostridium botulinum, C. histolyticum, C. novy y C. septicum

son redondas u ovales subterminales y deforman al bacilo.

 La endospora de Clostridium sordelli se ubica en la posición central, con una

leve deformación.
https://www.lifeder.com/tincion-de-esporas/

TINCIÓN DE CONKLIN
Teñir las endosporas bacterianas es complejo por su situación, en el interior del
cuerpo celular, y por su estructura, con varias cubiertas impermeables. Por ello
 se requieren tinciones con calor para favorecer la penetración de los
colorantes.
La técnica más empleada es la tinción de Wirtz-Conklin, que se practica sobre
extensiones fijadas por calor.

Procedimiento

1. Nosotros vamos a utilizar como género alguna especie de Bacillus, ya que

produce endosporas. Tiene que ser un cultivo ya envejecido, ya que la espora
es una forma de resistencia ante condiciones adversas.

2. Lo primero que haremos será cubrir la extensión con papel de filtro y le

añadiremos por encima verde malaquita al 5%. Esto lo hacemos para que no
se seque la muestra y que cristalice el reactivo sobre el papel y no sobre la
muestra. Calentamos el portaobjetos con un mechero o una torunda empapada
en alcohol durante 5 minutos, evitando que el colorante entre en ebullición y se
seque.

3. Después lavamos con abundante agua el exceso de colorante, que no hay

crisis.

4. A continuación, cubrimos la extensión con una solución de safranina al 0,5%.

Este es el colorante de contraste que sirve para teñir las formas vegetativas.

5. Lavamos con agua abundante y lo dejamos secar la preparación a tª ambiente.

6. Por último, visualizaremos la muestra. Las esporas se observan verdes,

mientras que las formas vegetativas se ven de color rojo

https://pipetealo.wordpress.com/2016/12/07/tincion-de-wirtz-conklin-esporas/

TINCIÓN DE GROCOTT

La tinción de Grocott se usa para la identificación de hongos y bacterias,

mayormente en muestras de pacientes con infecciones respiratorias y
neumonías.

La reacción tintorial está basada en que en presencia de Ácido Peryódico, los

polisacáridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehídos que a
su vez reducen el complejo Nitrato-Plata Meten amina produciendo una
coloración café a negra debido al depósito de plata reducida, en los lugares de
localización de los aldehídos.  Con esta técnica los hongos se tiñen de color
negro: la mucina adquiere un color gris oscuro; las partes internas del miscelio
rosa oro; el fondo aparece de color verde claro.

Procedimiento
1) Sumergir en alcohol la muestra previamente fijada con fijador celular
aproximadamente 15 minutos. Pasado este tiempo lavar bien el extendido con
agua destilada
 2) Con pipeta colocar sobre la muestra, la solución de ácido peryódico por 15
minutos. Transcurrido este tiempo virar nuevamente con agua destilada.

3) Prepara la solución de trabajo usando

– 12 ml de agua destilada
– 12 ml solución de meten amina plata
– 1 ml de solución de Borax
Filtrar la solución y colocarla en un coplin (previamente enjuagado con agua
destilada) apta estufa/microondas de laboratorio

4) Poner el preparado en el coplin con la solución de trabajo y llevarlo 40

minutos a estufa de 60° o de tener microondas apto laboratorio 30 segundos
controlando en intervalos que la solución vaya tomando color caramelo (marron
dorado). Controlar en microscopio el material, debemos verlo color jarabe de
coca-cola.

5) Lavar con agua destilada y colocarle la solución de verde luz de 1 a 2

minutos. Quitar el exceso de verde luz con agua destilada. Realizar pasajes por
alcohol 96, 100 y xilol para su montaje.

http://sociedaddecitologia.org.ar/sac/casos/coloracion-de-grocott/
#:~:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20Grocott%20se,inmuno
%20comprometidos%20o%20con%20HIV.

EJEMPLOS

 Mucicarmin: se visualiza una zona rosa brillante que rodea una levadura de
tamaño medio lo que confirma que el polisacárido capsular está presente.

 Fontana-Masson: es útil para demostrar que el hongo produce melanina como

los hongos dematiáceos y Cryptococcus. Hay que ser cauteloso interpretando
la tinción de Fontana-Masson ya que también se tiñen muchos Aspergillus spp.,
algunos Mucorales y Trichosporon.

 Violeta Cresil: la mayoría de los hongos se tiñen de azul o púrpura, los

Mucorales lo pueden hacer de rojo.
http://www.life-worldwide.org/esp/m/fungal-diseases/histopathology

TINCIÓN DIETERLE
La tinción de Dieterle es una forma de marcar el tejido para su examen
microscópico. El reactivo clave de la tinción de Dieterle es el nitrato de plata.
Puede teñir microbios como Treponema pallidum en gris o negro y el fondo en
amarillo. Se utiliza para encontrar los organismos que causan la enfermedad
por arañazo de gato y la sífilis y son sensibles a Mycobacterium tuberculosis.

https://es.qaz.wiki/wiki/Dieterle_stain

TINCIÓN NEGATIVA

Es una técnica de microscopía que permite contrastar las muestras mediante

una sustancia opaca a los fotones (microscopía óptica) o a los electrones
(microscopía electrónica). En el primer caso, se emplea nigrosina o tinta china;
para el caso de bacterias que esporulan, esta técnica permite visualizar las
esporas como entes refringentes sobre un campo de fondo oscuro. 1 En caso
de microscopía electrónica de transmisión, se emplean sustancias de
alto número atómico que, por tanto, resultan opacas a los electrones
transmitidos. Típicamente, estas sustancias son acetato de uranilo, citrato de
plomo o molibdato de amonio. Al electrónico, esta técnica permite
visualizar virus, flagelos, bacterias y otros entes de escaso tamaño.

https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_negativa

TINCIÓN DE MUCICARMÍN
Es un procedimiento de tinción que se utiliza para diferentes propósitos. En
microbiología, la tinción ayuda a identificar una variedad de microorganismos
en función de si la pared celular se tiñe intensamente de rojo o no.
Generalmente, esto se limita a microorganismos con una pared celular que
está compuesta, al menos en parte, por un componente polisacárido. Uno de
los organismos que se identifica mediante esta técnica de tinción es
Cryptococcus neoformans. Otro uso es en patología quirúrgica donde puede
identificar mucina. Esto es útil, por ejemplo, para determinar si el cáncer es de
un tipo que produce mucina. Un ejemplo sería distinguir entre el carcinoma
mucoepidermoide de parótida de alto grado, que se tiñe positivamente, frente al
carcinoma de células escamosas de la parótida que no lo hace.

https://es.qaz.wiki/wiki/Mucicarmine_stain