Universidad Autónoma de Querétaro

Facultad de Ciencias Naturales

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Laboratorio de Bacteriología y Micología

Dra. Andrea M. Olvera Ramírez

Práctica 1
Bioseguridad

Equipo #4
Índice

Introducción

Revisión bibliográfica

Material y método

Resultados

Discusión

Conclusión

Referencias literarias

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 Introducción

La bacteriología como ciencia nos permite vigilar las enfermedades de una

población y prevenir su propagación por medio de diferentes técnicas de estudio
cuya finalidad es el diagnóstico de diversas enfermedades, en el caso especial de
la medicina veterinaria el objeto de estudio son microorganismos que pueden ser
causantes de enfermedades tanto en animales o en los humanos.

En medicina veterinaria los agentes microbianos causan en mayor proporción

enfermedades de índole infecciosa que afectan la salud de los animales y
representan un grave riesgo para la salud pública. El estudio de la bacteriología y
micología aumenta en importancia porque adquirir parte de los conocimientos que
posteriormente se integran junto con las de enfermedades infecciosas para
identificar, diagnosticar, prevenir y controlar y erradicar enfermedades microbianas
de importancia en medicina veterinaria y salud pública.

A lo largo de esta práctica, describimos la metodología, resultados y discusión

acerca de lo aprendido en clase, las actividades que abarcamos y realizamos con
éxito las fueron un frotis bacteriano, una tinción de Gram que nos permite
visualizar bacterias con ayuda de un microscopio y casi al finalizar la clase una
activación de bacterias en tripticasa de soya, la cual es un medio de cultivo
recomendado para la recuperación y aislamiento de bacterias Gram positivas y
gramnegativos aerobias.
 Revisión bibliográfica

Escherichia coli es un bacilo gram negativo anaerobio facultativo de la familia Enterobacteriaceae,

tribu Escherichia. Esta bacteria coloniza el intestino del hombre pocas horas después del nacimiento
y se le considera un microorganismo de flora normal, pero hay cepas que pueden ser patógenas y
causar daño produciendo diferentes cuadros clínicos, entre ellos diarrea. Para determinar el grupo
patógeno al que pertenecen Kauffman desarrolló un esquema de serotipificación que continuamente
varía y que actualmente tiene 176 antígenos somáticos (O), 112 flagelares (H) y 60 capsulares (K).
El antígeno “O” es el responsable del ser grupo la determinación del antígeno somático y flagelar
(O:H) indica el serotipo, el cual en ocasiones se asocia con un cuadro clínico en particular. La
serotipificación de E. coli requiere de gran número de antisueros. Como hay pocos laboratorios que
la realizan, se prefiere identificar las cepas mediante sus factores de virulencia empleando ensayos
in vitro como por ejemplo ensayos de adherencia en células Hep-2 y ensayos de toxigenicidad en
células. También se pueden realizar ensayos in vivo, como el asa ligada o la prueba de Sereny, así
como ensayos inmunológicos y pruebas de biología molecular, para poner de manifiesto la presencia
de fragmentos de genes involucrados en el mecanismo de patogenicidad y que sirvan de
marcadores moleculares. ¹

La listeriosis es una infección producida por Listeria monocytogenes, un bacilo grampositivo y

microaerofílico, que se encuentra distribuido ampliamente en la naturaleza. El suelo se considera su
reservorio real. Se encuentra en el intestino del hombre, animales domésticos y salvajes, los que
pueden ser portadores asintomáticos. También se encuentra en las aguas contaminadas con heces
fecales, así como en el ambiente donde se elaboran, procesan, transportan y almacenan los
alimentos, incluyendo los destinados a los animales. Entre los años 80 y 90 del siglo XX, este
patógeno se comenzó a considerar como un problema de salud pública en los Estados Unidos,
Canadá y algunos países de Europa, al sucederse una serie de brotes con balances trágicos.
A pesar de ser considerada una zoonosis que puede ser transmitida por contacto directo con
animales infectados (exposición ocupacional), la mayoría de las infecciones humanas se adquieren
por ingestión de alimentos contaminados y de madre a hijo intraútero o durante el parto.
El embarazo y la inmunodepresión incrementan la susceptibilidad a la infección, se evidencia la
transmisión nosocomial.²

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Tinción de Gram

¿Qué es una tinción de Gram?

La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se sospecha una
infección, como la garganta, los pulmones, los genitales o las lesiones en la piel. Las tinciones de
Gram también se pueden usar para detectar bacterias en ciertos fluidos corporales, como la sangre
o la orina.

Hay dos categorías principales de infecciones bacterianas, grampositivas y gramnegativas. Las

categorías se diagnostican según cómo reacciona la bacteria a la tinción de Gram. La tinción de
Gram es de color púrpura. Cuando la tinción se combina con la bacteria en una muestra, las
bacterias puede seguir de color púrpura o volverse rosadas o rojas. Si se mantienen púrpura, son
grampositivas. Si se vuelven rosadas o rojas, son gramnegativas.

¿Para qué se usa?

La tinción de Gram se suele usar para saber si usted tiene una infección bacteriana. Si es así, la
prueba muestra si la infección es grampositiva o gramnegativa.

La tinción de Gram también puede usarse para diagnosticar infecctiones por hongos.

¿Por qué necesito una tinción de Gram?

Usted puede necesitar esta prueba si tiene síntomas de una infección bacteriana. El dolor, la fiebre y
la fatiga son síntomas comunes de muchas infecciones bacterianas. Otros síntomas dependen del
tipo de infección y de la parte del cuerpo afectada.

¿Qué ocurre durante una tinción de Gram?

El profesional de la salud necesita tomar una muestra del lugar donde se sospecha que hay una
infección o de ciertos fluidos corporales. ³

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 Material y método

MATERIAL
- Pipetas
- Porta objetos
- Gradilla
- Mechero de alcohol
- Asa bacteriológica
- Agua destilada
- Tubo de Listeria
- Tubo Escherichia coli
- Tubos de control

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MÉTODO
Tinción de Gram
 Encender el mechero para tener un campo estéril.
 Esterilizar el asa, enfriar y tomar una muestra del tubo con Listeria y colocarla en el porta objetos.
 Tomar una muestra de agua destilada, colocarla junto a la muestra de la bacteria y homogenizar.
 Realizar el mismo procedimiento con el tubo de Escherichia coli, tendremos dos porta objetos de
cada bacteria.
 Para sellar el frotis se realizar de 3 a 5 pases por la flama hasta que se seque.
 Una vez que se tiene el frotis, se cubre con cristal violeta por 1 minuto para después enjuagarlo
con agua.
 Después se cubre con Lugol por 1 min y se enjuaga con agua para posteriormente cubrirlo con
alcohol por 30 segundos y secarlo.
 Para finalizar se cubrirá con safranina por 20 segundos, se enjuagará y secará.
 Cuando se encuentre seco, observar al microscopio.

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Activación de bacterias

 Con el mechero encendido para crear un campo estéril, tomar el tubo con Listeria y
homogenizarlo en un agitador tipo vórtex.
 Tomar 1 mililitro con una pipeta y agregarlo en un tubo de control. Realizar el mismo
procedimiento con el tubo de Escherichia coli.
 Los colocaremos en la gradilla y los incubaremos por 24 horas a una temperatura de 37° para
que se lleve a cabo la activación.

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 Resultados
Al ver los frotis bajo el microscopio en el objetivo (100x) pudimos observar que había presencia de
las bacterias.

Al siguiente día de activar las bacterias, se observo el cambio de color en el liquido de nuestros
tubos y un pequeño crecimiento en el tubo de Escherichia coli con lo que comprobamos que se
hizo una buena activación.

¿Qué contiene la tripticasa de soya y que necesitan las bacterias para crecer?
El medio de cultivo Tripticasa de Soya tiene entre su composición digerido pancreático de caseína y
digerido papaico de harina de soya que aportan los nutrientes, nitrógeno orgánico, aminoácidos y
péptidos de cadena larga para el crecimiento, cloruro sódico para mantener el equilibrio osmótico y
agar como agente gelicante.

Las bacterias para poder desarrollarse necesitan de varios factores:

1. Nutrientes: requieren elementos como carbono, nitrógeno, hidrógeno y fósforo, entre otros.
2. Agua: sin este componente, el crecimiento disminuye o se detiene.
3. pH: es un factor determinante para controlar el crecimiento bacteriano. Con un pH bajo
(condiciones ácidas) se detiene el desarrollo de bacterias, con un pH neutro, la mayoría de
bacterias crecen muy bien.
4. Temperatura: cada microorganismo tiene una temperatura de crecimiento adecuada.
Aunque también pueden necesitar un mínimo de nutrientes: agua, una fuente de carbono, una fuente
de nitrógeno y algunas sales minerales, todo dependerá del medio donde se desarrollen.

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 Discusión.

Según los autores del artículo de la “revista MVZ de Córdoba” (Gabriel Gaviria A,
María González de S, Jhon Castaño O) en su experimento de aislamiento de E.
coli, a partir de aguas residuales, el cual se buscaba Establecer una técnica para
el aislamiento de bacteriófagos a partir de aguas residuales específicos para E.
coli DH5α; Llegando a los resultados siguientes, exitosamente se observó la
formación de unidades formadoras de placas. ⁴

Este experimento es parecido al que nosotros realizamos ya que también

buscábamos replicar las bacterias de E. coli aunque no las pusimos para que se
formaran unidades formadoras de placas pasando a la bacteria listeria
monocytogenes, encontramos un artículo del instituto nacional de seguridad y
salud en donde nos explican la morfología y ciertas caracteristicas de la bacteria y
cito: “Listeria monocytogenes pertenece a la familia Listeriaceae. Se trata de un
bacilo Gram positivo, con un tamaño de 0,5 - 2 x 0,5 micras, patógeno intracelular
facultativo del sistema reticuloendotelial y móvil a temperaturas entre 20ºC y 25ºC.
En relación con su metabolismo, es anaerobio facultativo, catalasa positiva y
oxidasa negativa.” ⁵

Con los resultados obtenidos en clase podemos confirmar esta información ya que
al observar nuestro frotis en el microscopio pudimos ver la tinción característica de
las gram positivas siendo de un color intenso, en este caso morado.

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 Conclusión
El conocer los pasos a seguir para lograr un frotis bacteriano y una tinción de
Gram exitosa son conocimientos básicos que nos permite como alumnos de
bacteriología poder determinar ciertas características de la bacteria a estudiar, así
como observarla claramente con un microscopio gracias a un método correcto. En
cuanto a la activación de bacterias, lo aprendido nos ayudará más adelante a
poder hacer nuestros propios cultivos en los medios adecuados para generar
división bacteriana de nuestra muestra, la cual será usada para nuestro estudio
como futuros profesionistas conectando los conocimientos que obtendremos a lo
largo de este semestre, así como de toda la carrera, la finalidad general es ampliar
nuestro conocimiento y capacidad como estudiantes en esta licenciatura
multidisciplinaria.

Referencias literarias
1.- MedlinePlus: Lo sentimos, pero no hemos podido encontrar la página que usted
ha solicitado. (s. f.). https://medlineplus.gov/spanish/ecoliinfections.htm

2.- Listeria (Listeriosis) | Listeria | CDC en Español. (s. f.).

https://www.cdc.gov/spanish/listeria/index.html

3.- Tinción de Gram. (s. f.). https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-

laboratorio/tincion-de-gram/

4.- Gaviria, G., & Castaño, J. (2012). Técnica para aislamiento de bacteriófagos
específicos para E. coli DH5α a partir de aguas residuales. Revista MVZ Córdoba,
17(1), 2852-2860.

5.- Heras C., García-Patos, V., Palacio, L., Bartralot, R., Mollet, J.,
Rodríguez, L., Pascual, C., Bodet, D., Tallada, N., Castells, A.
Listeriosis neonatal. Actas Dermosifiliogr 2006;97:59-61 - Vol. 97

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