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ESCUELA POLITECNICA DEL EJERCITO FACULTAD DE CIENCIAS APLICADAS INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA INFORME DE LABORATORIO

Nombre: Juan Carlos Jcome Practica N: 3

Materia: Laboratorio de Biologa Celular

Fecha: Curso/Paralelo: 2011-04-15

1. TEMA: Clulas procariotas. Fijacin de muestras y tincin Gram 2. OBJETIVOS: General Observar clulas procariotas. Fijar muestras y utilizar la tincin Gram. Especficos Observar una muestra bacteriolgica. Comprender la utilidad de la tincin Establecer diferencias entre tincin sinple y Gram Notar diferencias entre bacterias Gram + y Gram 3. INTRODUCCIN o MARCO TEORICO: Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de algunos micrmetros de largo (entre 0,5 y 5 m, por lo general) y diversas formas incluyendo cocos(esferas), bacilos(barras) y espirilos (hlices). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, etc.), no tienen el ncleo definido y presenta orgnulos internos de locomocin. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa. Las bacterias son los organismos ms abundantes del planeta. Son ubicuas, se encuentran en todos los hbitats terrestres; crecen hasta en los ms extremos como en los manantiales de aguas calientes y cidas, en desechos radioactivos, en las profundidades tanto del mar y como de la corteza terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a 40 millones de clulas bacterianas en un gramo de tierra y un milln de clulas bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay aproximadamente 51030 bacterias en el mundo. Las bacterias son imprescindibles para el reciclaje de los elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos biogeoqumicos dependen de stas. Como ejemplo cabe citar la fijacin del nitrgeno atmosfrico. Sin embargo, solamente la mitad de los filos conocidos de bacterias tienen especies que se pueden cultivar en el laboratorio, por lo que una gran parte (se supone que cerca del 90%) de las especies de bacterias existentes todava no ha sido descrita. En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces tantas clulas bacterianas como clulas humanas, con una gran cantidad de bacterias en la piel y en el tracto digestivo. Aunque el efecto protector del sistema inmune hace que la gran mayora de estas bacterias sea inofensiva o beneficiosa, algunas bacterias patgenas pueden causar enfermedades infecciosas, incluyendo clera, sfilis, lepra, tifus, difteria, escarlatina, etc.

Las enfermedades bacterianas mortales ms comunes son las infecciones respiratorias, con una mortalidad slo para la tuberculosis de cerca de dos millones de personas al ao. En todo el mundo se utilizan antibiticos para tratar las infecciones bacterianas. Los antibiticos son efectivos contra las bacterias ya que inhiben la formacin de la pared celular o detienen otros procesos de su ciclo de vida. Tambin se usan extensamente en la agricultura y la ganadera en ausencia de enfermedad, lo que ocasiona que se est generalizando la resistencia de las bacterias a los antibiticos. En la industria, las bacterias son importantes en procesos tales como el tratamiento de aguas residuales, en la produccin de queso, yogur, mantequilla, vinagre, etc., y en la fabricacin de medicamentos y de otros productos qumicos. Aunque el trmino bacteria inclua tradicionalmente a todos los procariotas, actualmente la taxonoma y la nomenclatura cientfica los divide en dos grupos. Estos dominios evolutivos se denominan Bacteria y Archaea (arqueas). La divisin se justifica en las grandes diferencias que presentan ambos grupos a nivel bioqumico y en aspectos estructurales. Tincin: El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie. 4. MATERIALES Y MTODOS: Microscopio compuesto Porta y cubre objetos. Goteros Papel filtro

Cajas Petri Asa bacteriolgica Mechero de alcohol Palillos

Procedimiento 1. Lave un porta y cubre objetos con agua y jabn 2. Coloque una gota pequea de agua en el centro de los porta objetos. 3. Con un palillo frote las mejillas internas. 4. Y se dispersa la muestra sobre la superficie del microscopio que va hacer observado 5. Se deja secar el microscopio al ambiente. 6. Se procede a hacer la fijacin pasando de 4 a 5 veces el frotis por el cubre por la lmpara sin q se caliente demasiado. 7. Se coloca una gota de azul de metileno o safranina.

8. Observe la muestra en 4, 10 ,40x para luego observar con el objetivo de inmersin. 5. RESULTADOS Y OBSERVACIONES:

6. DISCUSION: Las bacterias son organismos muy pequeos difciles de observar incluso con el microscopio ptico. Para su estudio completo es necesario un microscopio electrnico de barrido. Las Bacterias se tien de una u otra manera dependiendo le la estructura de su pared celular. La pared celular de las bacterias estn compuestas de una capa de pptido glucano, el color del que se tian depender de que tan gruesa sea la pared la capa de pptido glucano. La tincin simple no ayuda a reconocer de que est compuesta la pared celular pero si formas y como se agrupan.

7. CONCLUSIONES Las bacterias son clulas procariotas cuya pared celular esta compuesta de una capa de pptidoglucano. Las bacterias de pptidoglucano son muy grueso por lo que aprovecha mejor el colorante, al contrario que las bacterias gran neganitas. 8. BIBLIOGRAFA http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro4.htm

9. ANEXOS 1. Compare la tincin simple con la tincin diferencial Tincin Simple: Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de lactofenol). Tincin Diferencial: Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin qumica. (Tincin de Gram, Coloracin de cido resistencia). 2. Elabore un cuadro de la informacin de tincin gram (tcnica, procesos que ocurre y resultados)

3. Hacer una lista de 10 bacterias Gram positivas y 10 bacterias Gram negativas, sealar el papel que desempean en relacin al ser humano. Gram Positivas 1. Lactobacillus 2. B. anthracis 3. B. cereus 4. C. botulinum, un organismo productor de una toxina alimenticia causante de botulismo un desorden neurolgico agudo potencialmente letal. 5. C. difficile, el cual puede sobrepopular la flora saprfita intestinal durante terapias con antibiticos, causando colitis seudomembranosa 6. C. tetani, el organismo causante de ttano 7. Neumococo: Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumona adquirida en la comunidad. 8. Streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos dentales. 9. C. glutamicum, el trmino glutamicus se debe a su capacidad de producir cido glutmico en condiciones aerbicas usado en la industria alimenticia como glutamato monosdico en la produccin de salsa de soja o el yogurt. 10. L. monocytogenes, es la especie tpica y es el patgeno causante de la listeriosis. Gram Negativas 1. Neisseria gonorrhoeae: causa la gonococia, una enfermedad de transmisin sexual que se presenta en los humanos. 2. Neisseria meningitidis: de importancia en salud pblica por su papel en la meningitis y otras formas de enfermedad meningocccica. Slo afecta a seres humanos ya que no existe ningn reservorio. Es la nica forma conocida de meningitis bacteriana en causar epidemias. 3. Moraxella catarrhalis: nicamente estas bacterias son conocidas por causar otitis media, bronquitis, sinusitis, y laringitis. 4. Haemophilus influenzae 5. Klebsiella pneumoniae 6. Legionella pneumophila 7. Pseudomonas aeruginosa 8. Escherichia coli 9. Proteus mirabilis 10. Enterobacter cloacae