Tincin de Ziehl Neelsen

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f 'cobacterium tuberetl*osis visualizacin

usando la tincin de

ZiehI-Neelsen. Visualizacin de Mycobacterium tuberculosis usando la

tincin de Ziehl-Neelsen

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin

diferencial rpida y econmica,

para la identificacin de microorganismos patgenos, por ejemplo M

tuberculosis.

Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl, un
bacterilogo y Friedrich

Neelsen , un patlogo.

Fundamento

Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen

cidos grasos (cidos miclicos) de

cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la

propiedad de resistir la decoloracn

con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por

esto se denominan cido-

alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis v M.

marinum y los parsitos

coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de

cido-alcohol resistencia.

La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que

el colorante atraviese la

pared bacteriana que contiene ceras, Al suspender el calentamiento y

enfriar con agua, provoca una

nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya

no puede salir de las bacterias.

Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de las

molculas del colorante lo cual

tambin facilita su enfrada a las bacterias. Las bacterias que

resisten la decoloracin son de color
rojo y la que no se ven de color azul, ya que se utiliza azul de
metileno como tincin de contraste.

Variante clsica o "en caliente"

Esta y la siguiente variantes son para preparaciones citolgicas.

1. Hacer un frotis de la muestra.

1. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al

portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente
negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobietos
durante la Gncin.

2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de

tincin con los extendidos hacia arriba. Nunca tia ms de 12
portaobjetos a la vez.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5
minutos.
Mantenga el calor durante este perodo.
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre
y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque
el colorante.

PNT-A1r13

Investigacin y recuento de Staphylococcus aureus en medio slido

OBJETO:

Describir el mtodo de deteccin y recuento de St. Aureus presentes en

la muestra del alimento en

estudio. Se realiza por siembra directa en medios slidos selectivos.

Staphylococcus, y especialmente S. aureus, puede producir

enterotoxinas y por lo tanto

Intoxicaciones alimemarias-

La presencia de estafilococos puede deberse a procedencia endgena

(infecciones de origen animal)

, o exgena, a partir de manipuladores fundamentalmente- Las ltimas

investigaciones indican que

es ms frecuele el origen humano que el animaL

Los valores mxrmos de S. aureus enterotoxicgenico para los distintos

alimentos son casi siempre

inferiores a 102 ufc/g, recogida en la los valores para los distintos

alimentos

APARATOS Y MATERIALES:
Material de uso habitual en el laboratorio y en particular el
siguiente:

Autoclave

Incubadoras a (36+20)0 C

Pipetas estriles de I ml

Asa de cultivo

Asa de vidrio estril

Bolsas de polietileno estriles

Triturador de paletas

Balanza sensibilidad 0, 1 gramo

Material cortarte estril para la preparacin de las muestras

1WD10s DE CULTIVO:

o Agar Baird-Parker (BP)

o Como diluyere: Agua de peptona o Agua de triptona

o Caldo cerebro corazn (BHL)

o Agar para la prueba de DNasa con verde de metilo.

0 Plasma de conejo EDTA

PROCEDIMIENTO:
A partir de la serie de diluciones decimales, y por duplicado, se
siembra con pipeta estril 0,1 ml de cada dilucin sobre superficie
bien seca de agar Baird-Parker corenido en placas de Petri.
Diseminar cuidadosamente con asa de vidrio estril.
Invertir la placa y colocar en estufa a (36+2) co durante 48 horas.