Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Katherine Rodríguez
Microbiología II
1. TEMAS DE ESTUDIO
Conocimientos teóricos sobre bacterias relacionadas con infecciones del tracto urinario
Toma de muestras, examen directo, tinción Gram
Fundamentos e interpretación de pruebas bioquímicas para enterobacterias y cocos Gram (+)
2. FUNDAMENTO TEORICO
Varios miembros de las enterobacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato
urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones.
La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de
orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que
proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal.
La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por Staphylococcus coagulasa-positivo y
negativo, diversos Streptococcus, difteroides, enterobacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias
anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta microbiota influyen localización
anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped.
En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y
crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter,
Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. P. aeruginosa y
S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación
repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Enterococcus faecalis y
excepcionalmente, Staphylococcus.
La orina recolectada debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ºC durante un tiempo máximo de 24 horas.
Agar CLED
Composición: La peptona, el extracto de carne y la caseína aportan los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable para la obtención de
energía, la L-cistina es el agente reductor, el azul de bromotimol es el indicador de pH y el agar es el
agente solidificante.
Fundamento: La diferenciación de los microorganismos se basa en la utilización que éstos puedan hacer
de la lactosa; las cepas que la fermentan, acidifican el medio que vira del verde al amarillo, mientras que
los que no lo hacen, dan colonias incoloras que viran el medio al color azul. La restricción de electrolitos en
1
Dra. Katherine Rodríguez
Microbiología II
el medio impide el desarrollo invasor de especies de Proteus, por tal motivo, es un medio ideal para el
recuento de colonias.
3. PROCEDIMIENTO:
El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo, el cual abarca dos aspectos:
el cuantitativo y el cualitativo.
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para diferenciar bacteriuria
verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de
suero fisiológico, estériles.
Se deposita 1 ml. de cada dilución en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vacía un
tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45°. Mediante rotación suave, se
favorece la distribución homogénea de la siembra.
Para calcular el número de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas
éstas, basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.
Método del asa calibrada. Esta estimación cuantitativa consiste en sembrar una placa con agar con CLED
en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando asa de platino calibrada (4 mm. de diámetro).
Después de incubar las siembras a 37° durante 24 a 48 horas, se cuenta el número de colonias
desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada de platino contiene 0.01 ml. de orina
(10 µl)
2
Dra. Katherine Rodríguez
Microbiología II
Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar recuentos inferiores a 10 000 colonias/ml.
Cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10 0000 y 100 000 colonias /ml, el examen debe
repetirse. Importante mencionar que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas, si no se
toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml, ya que existen diversos factores que
pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstrucción
uretral, infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos.
Se usa para identificar que microorganismo es el causante de la infección. Por lo tanto, las pruebas de
identificación bioquímica a emplearse, dependerán de la morfología de las colonias.
4. BIBLIOGRAFIA
Forbes, Sahm, Weissfeld. Diagnóstico microbiológico Bailey&Scott. 12 ed. 2009. Ed.
Panamericana.
Procop, Churchill, Koneman. Diagnóstico microbiológico Texto y Atlas. 7 ed. Ed. Wolters
Kluwer Health. 2017
Trigoso. C. Bacteriología básica. UMSA
Diaz R. Gamazo C. López I. Manual práctico de microbiología. 3 ed. Ed. Masson.