UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTÍN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA ACADÉMICA DE MEDICINA VETERINARIA

PROCEDMIENTO DE DIAGNOSTICO EN
LABORATORIO
 TINCIÓN GRAM
La técnica de tinción Gram es un método utilizado en microbiología para identificar y clasificar
bacterias en dos grupos principales: Gram positivas y Gram negativas. Esta técnica se basa en la
propiedad de las paredes celulares de las bacterias de retener o no el colorante violeta de cristal.
Aquí hay un paso a paso detallado de la técnica de tinción Gram:
1. Preparación de la muestra: Se toma una pequeña cantidad de cultivo bacteriano y se
coloca en un portaobjetos. Se añade una gota de líquido de fijación, como alcohol
etílico, para mantener la forma de la bacteria durante la tinción o en caso que no se
cuente con este se puede usar un mechero de alcohol
2. Tinción primaria: Se añade una gota de colorante violeta de cristal o azul de metileno
(también conocido como solución de tinción de Gram) al portaobjetos y se deja reposar
durante unos minutos. (1 -2 min)
3. Lavado: Se lava por la parte de atrás del porta objeto para no barrer con la muestra, para
luego colocar Lugol por unos minutos. (1-2 min)
4. Decolorante: Se añade una gota de solución de decoloración, como cloroformo o
alcohol –acetona al portaobjetos y se agita suavemente. ( 15 – 30 sec )
5. Tinción secundaria: Se añade una gota de solución de tinción safranina al portaobjetos y
se deja reposar durante unos minutos. (30 sec – 1 min) luego se lava .
6. Observación: Se observa el portaobjetos bajo un microscopio con ayuda de aceite de
inmersión y se clasifican las bacterias según su capacidad de retener el colorante. Las
bacterias Gram positivas retienen el color violeta, mientras que las bacterias Gram
negativas pierden el color y se tiñen de rosa.
Gram Positivas:

 Staphylococcus: un grupo de bacterias que pueden causar infecciones en la piel y las

membranas mucosas de los animales.
 Streptococcus: un grupo de bacterias que pueden causar infecciones respiratorias,
gastrointestinales y de la piel en los animales.
 Clostridium: un grupo de bacterias que pueden causar enfermedades graves como el
tétanos y la gangrena en los animales.
Gram Negativas:

 Escherichia coli: una bacteria común en el tracto gastrointestinal de los animales que a
menudo es benigna, pero puede causar infecciones graves en casos específicos.
 Salmonella: una bacteria que puede causar infecciones gastrointestinales y otros
problemas de salud en los animales.
 Pasteurella: una bacteria común en la boca de los animales que puede causar
infecciones graves después de una mordida o lesión.

TINCIÓN DE WRIGHT

Alumno Mv : Piero Martin Sinti Flores

La tinción de Wright es un procedimiento comúnmente utilizado para teñir muestras de sangre y
otros tipos de células para su observación microscópica. A continuación, se presentan los pasos
para realizar la tinción de Wright:
1. Preparación de la muestra: La muestra de sangre o tejido se coloca en un portaobjetos
limpio y se deja secar al aire durante unos minutos.
2. Fijación: Para fijar la muestra, se sumerge el portaobjetos en metanol durante 1-2
minutos o con mechero de alcohol. Luego se retira y se deja secar al aire.
3. Tinción: Se coloca el portaobjetos fijado en un soporte y se cubre con una solución de
tinción de Wright durante 3-5 minutos.
4. Lavado: Luego de la tinción, se enjuaga el portaobjetos cuidadosamente con agua
destilada para eliminar el exceso de tinte.
5. Secado: El portaobjetos se deja secar al aire.
6. Observación: Finalmente, el portaobjetos se observa al microscopio para examinar las
células teñidas.
USOS/APLICACIONES DE LA TINCIÓN DE WRIGHT
A. Hematología
Es ideal para la tinción de frotis de sangre periférica, para el examen de gota gruesa de sangre y
para el estudio de células de muestras de médula ósea.
Debido a las propiedades químicas de esta combinación de colorantes, las estructuras celulares
pueden ser fácilmente reconocidas, pudiéndose distinguir los diferentes tipos de células
presentes.
B. Secreción nasal
Esta técnica es muy útil para identificar las células de la secreción nasal (células epiteliales,
segmentados eosinófilos, polimorfonucleares) en el diagnóstico de rinitis alérgicas.
C. Parasitología
En este sentido, ha sido útil para el estudio de Leishmania sp dentro de los histiocitos del tejido
celular subcutáneo en úlceras de la piel. Asimismo, es empleada para identificar leucocitos en
muestra de heces (leucograma fecal).
En este caso, es de interés para el médico saber si la leucocitosis presente en las heces es por
polimorfonucleares o mononucleares. Este hallazgo en el leucograma fecal orientará si se trata
de una infección bacteriana o viral, respectivamente.
Por otra parte, los parásitos que circulan en la sangre pueden hallarse dentro del eritrocito o
libres en el plasma. Los parásitos buscados son Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii y filarias,
y en veterinaria es útil en la búsqueda de Theileria equi y Babesia caballi, agentes causales de la
bebesiosis, especialmente en equinos.
La coloración de Wright, y también la de Giemsa, permiten diferenciar los hemoparásitos de los
componentes celulares normales. Para ello se pueden utilizar dos tipos de extendidos:

Alumno Mv : Piero Martin Sinti Flores

 D. Extendidos finos
La sangre es extendida como una película delgada sobre un portaobjetos. Se tiñe con tinción de
Wright, revelándose las características del núcleo y del citoplasma.
E. Gota gruesa
Esta metodología se usa para investigar la presencia de parásitos en una mayor cantidad de
sangre.
Para ello se coloca sobre un portaobjetos una gota grande de sangre. Una vez allí se debe
desfibrinar, haciendo círculos cada vez más grandes desde el centro hacia afuera, utilizando para
ello el borde de otro portaobjeto.
Finalmente, para poder observar los parásitos en el frotis grueso, los eritrocitos deben ser
lisados con agua.
F. Infecciones respiratorias
A nivel respiratorio esta técnica también es útil, debido a que las células presentes en las
muestras de esputos, lavado bronquial o bronco alveolar, son importantes para establecer el
diagnóstico.
Aquí pueden distinguirse las células polimorfonucleares y las células mononucleares.
G. Bacteriología
El uso de esta técnica en bacteriología es limitado, debido a que no es buena para teñir las
bacterias. Por ello, para la tinción de las mismas, se usan otras técnicas de coloración
especializadas.
Sin embargo, se ha empleado para buscar células epiteliales con cuerpos de inclusión de
Chlamydia trachomatis en frotis de mucosa uretral o endocervical, aunque hay que reconocer
que no es el mejor método.
También es posible observar, entre los glóbulos rojos, bacterias tipo espiral, como la Borrelia
burgdorferi en pacientes infectados, así como mórulas o cuerpos de inclusión de Ehrlichia sp en
el citoplasma de linfocitos, monocitos o neutrófilos en un frotis sanguíneo.
H. Micología
El Histoplasma capsulatum es un hongo patógeno frecuentemente diagnosticado por la
observación microscópica de diversas muestras de tejidos, teñidas con tinción de Wright.

TINCIÓN DE GIEMSA

Alumno Mv : Piero Martin Sinti Flores

La tinción de Giemsa es un procedimiento de tinción diferencial que se utiliza comúnmente en
microbiología y hematología para teñir preparaciones de células, incluyendo frotis de sangre y
bacterias. A continuación, se presentan los pasos para realizar la tinción de Giemsa:
1. Preparación de la muestra: La muestra de células o bacterias se coloca en un
portaobjetos limpio y se deja secar al aire.
2. Fijación: Para fijar la muestra, se sumerge el portaobjetos en metanol durante 10-15
minutos. Luego se retira y se deja secar al aire.
3. Tinción de Giemsa: Se coloca el portaobjetos fijado en un soporte y se cubre con una
solución de tinción de Giemsa diluida en buffer fosfato salino (PBS) durante 20-30
minutos.
4. Lavado: Luego de la tinción, se enjuaga el portaobjetos cuidadosamente con agua
destilada para eliminar el exceso de tinte.
5. Secado: El portaobjetos se deja secar al aire.
6. Observación: Finalmente, el portaobjetos se observa al microscopio para examinar las
células o bacterias teñidas.
Las muestras pueden ser sangre, médula ósea, cortes de tejidos histológicos o muestras cérvico-
vaginal. Se recomienda que los extendidos sean finos y tengan 1 o 2 horas de secado antes de
colorearlos.
USOS/APLICACIONES DE LA TINCIÓN DE GIEMSA
La técnica de tinción de Giemsa es utilizada en diversas áreas: en hematología, micología,
bacteriología, parasitología, citología y citogenética.
A) Hematología
Es el uso más frecuente que se le da a esta tinción. Con ella se logran identificar todas y cada
una de las células presentes en muestras de médula ósea o sangre periférica. Así como calcular
el número de cada serie, pudiéndose detectar leucocitosis o leucopenia, trombocitopenia, etc.
Debido a que es sensible para identificar células inmaduras, es relevante en el diagnóstico de
leucemias agudas o crónicas. También es posible hacer el diagnóstico de anemias, como la
anemia drepanocítica, falciforme, entre otras.
B) Micología
En esta área es común su utilización para la búsqueda de Histoplasma capsulatum (hongo
dimórfico intracelular) en muestras de tejidos.
C) Bacteriología
En frotis hematológicos teñidos con Giemsa, es posible detectar Borrelias sp en pacientes que
cursan con la enfermedad denominada fiebre recurrentis. Las espiroquetas se observan
abundantes entre los eritrocitos, en muestras tomadas en el pico febril.
También es posible visualizar bacterias intracelulares como Rickettsias sp y Chlamydia
trachomatis en células infectadas.
D) Parasitología
En el campo de la parasitología, la tinción de Giemsa ha permitido hacer el diagnóstico de
enfermedades parasitarias, como la malaria, el mal de Chagas y la leishmaniasis.

Alumno Mv : Piero Martin Sinti Flores

En las dos primeras, los parásitos Plasmodium sp y el Tripanosoma cruzi, respectivamente,
pueden visualizarse en sangre periférica de los pacientes infectados. Los mismos pueden
encontrarse en diversos estadios según la fase en la que esté la enfermedad.
Para mejorar la búsqueda de parásitos en sangre se recomienda usar la tinción de Giemsa
mezclada con el colorante de May-Grünwald.
Asimismo, la leishmaniasis cutánea puede diagnosticarse al evaluar muestras de biopsias de piel
teñidas con Giemsa, donde se encuentra el parásito.
E) Citología
La tinción de Giemsa también es usada para el estudio citológico de muestras endocervicales,
aunque no sea la técnica más frecuentemente empleada para este fin.
Pero en casos de escasez de recursos puede utilizarse, teniendo una funcionabilidad similar a la
que ofrece la técnica de Papanicolaou y a un menor costo. Sin embargo, requiere de experticia
por parte del examinante.
F) Citogenética
Una característica relevante de la tinción de Giemsa es su capacidad para unirse fuertemente a
las regiones ricas en adeninas y timinas del ADN. Esto permite que el ADN pueda ser
visualizado durante la mitosis de las células, en diferentes estados de condensación.
Estos estudios son necesarios para detectar aberraciones cromáticas, como duplicaciones,
deleciones o translocaciones de las distintas regiones de los cromosomas.

TINCIÓN DIFF-QUIK
La tinción Diff-Quik es una técnica de tinción rápida que se utiliza comúnmente en hematología
para teñir y observar las células sanguíneas. Esta técnica se basa en una combinación de
colorantes y alcohol que permiten una rápida observación de las células, lo que es especialmente
útil en situaciones de emergencia en las que se necesita una respuesta rápida.
La tinción Diff-Quik se compone de tres soluciones de tinción diferentes: solución 1, solución 2
y solución 3. La solución 1 es una solución de fijación que se utiliza para fijar las células en una
muestra de sangre en un portaobjetos. La solución 2 es una solución de colorante que se utiliza

Alumno Mv : Piero Martin Sinti Flores

para teñir los núcleos de las células en la muestra, y la solución 3 es una solución de colorante
que se utiliza para teñir el citoplasma de las células.
La técnica de tinción Diff-Quik es rápida y simple, y consta de los siguientes pasos:
1. Colocar una pequeña muestra de sangre en un portaobjetos limpio y seco.
2. Añadir unas gotas de la solución 1 de fijación sobre la muestra de sangre y dejar que la
solución actúe durante unos segundos.
3. Añadir unas gotas de la solución 2 de tinción de núcleos y dejar que la solución actúe
durante unos segundos.
4. Añadir unas gotas de la solución 3 de tinción de citoplasma y dejar que la solución
actúe durante unos segundos.
5. Lavar el portaobjetos con agua destilada y dejar secar al aire.

Su principal ventaja es la sencillez y rapidez en su uso. Tiene una calidad un poco inferior a
otras tinciones como MayGrundwald-Giemsa o Wright.
Permite un aumento selectivo o dependiendo del tiempo que quede el frotis en las soluciones de
se utiliza en material que se seca al aire antes de la con alcohol (en lugar de sumergirlo
inmediatamente, es decir, en El uso principal de las tinciones de tipo Romanowsky es para el
detalle como mucinas gotas de grasa y neurosecretores
Con esta técnica se diferencían una variedad de frotis, frotis de sangre y no incluidos los de
aspirado con aguja fina.
Variando el número de inmersiones en las soluciones de tinción, se pueden conseguir diferentes
grados de sombreado e intensidad.

PRUEBA DEL ANILLO DE HELLER

Esta prueba nos permite determinar la presencia de proteínas en la orina más no es exacta en la
cuantificación. Nos brinda sólo resultados positivos o negativos. Respecto a la tira reactiva, el
examen de Heller es mucho más sensible para positivos a proteína y billirrubina. Para realizar la
prueba se necesita llenar un tubo de ensayo con 2 ml de ácido nítrico concentrado sin que toque
las paredes del tubo(usar una jeringa con aguja para éste propósito).
Un anillo positivo a bilirrubina en caninos no tiene importancia diagnóstica pero un anillo
de bilirrubina en felinos es siempre un patología.

Alumno Mv : Piero Martin Sinti Flores

Luego depositar 2 ml de orina en el mismo tubo. La orina debe bajar lentamente por las paredes
del tubo para no crear turbulencia. Esperar 01 minuto y proceder a la lectura. Si se forma un
anillo blanquesino lechoso en el centro del tubo el resultado será positivo a proteína. Si se forma
un anillo verdoso por debajo del anillo de proteína será positivo a bilirrubina. Se debe recordar
que un anillo positivo a bilirrubina en caninos no tiene importancia diagnóstica pero un anillo de
bilirrubina en felinos es siempre un patología. Los caninos con restos seminales en cantidad alta
darán un resultado positivo a proteína, es por está razon que se recomienda realizar un frotis de
orina y observarla al microscopio para buscar espermatozoides.

DETECCIÓN UROLITOS
Para visualizar urolitos en un microscopio, primero se debe recolectar una muestra de orina del
paciente y, a continuación, se deben realizar los siguientes pasos:
1. Centrifugar la muestra de orina: Para separar los urolitos de la orina, es necesario
centrifugar la muestra a una velocidad y durante un tiempo específicos. El tiempo y la
velocidad pueden variar dependiendo de la densidad de los urolitos y de la orina, pero
generalmente se centrifuga a una velocidad de 1500 a 2000 rpm durante 5 a 10 minutos.
2. Descartar la orina sobrenadante: Una vez que se ha centrifugado la muestra, se debe
descartar cuidadosamente la orina sobrenadante sin perturbar el sedimento que contiene
los urolitos.
3. Preparar un frotis: Se debe tomar una pequeña cantidad del sedimento y se extiende en
un portaobjetos de vidrio limpio, utilizando una varilla de vidrio o un palillo. Se deja
secar al aire.
4. Observar el frotis: Una vez que el frotis está seco, se observa bajo el microscopio. Los
urolitos pueden ser cristales o pequeñas masas sólidas que pueden tener diferentes
formas y tamaños.

Materiales cantidad precio

tubos de ensayos 6
gradillas 1
pizetas 1
mecheros de alcohol 2
porta objetos 1 caja
cubre objetos 1 caja
pipeta de transferencia 4
soporte de porta objeto 1
Laboratorio
azul metileno 1
rojo safranina 1
Lugol 1
aceite de inmersión 1
kit de tinción Wright 1
kit de tinción Giemsa 1
kit de diff quick 1
Acido nítrico 1

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