UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA LABORATORIO MICROBIOLOGÍA

FACULTAD CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES
PRÁCTICA l: Microscopía y coloraciones

Integrantes:
Jerson David Bravo Amaya (121004807),
Camila Blanco Molano (121004806)
Yuly Valentina Garzón Rosas (121004917)

1. INTRODUCCIÓN

Las bacterias son organismos unicelulares que pertenecen al grupo de los procariontes; esto quiere decir que
carecen de un núcleo celular y de orgánulos como las mitocondrias, los cloroplastos o el aparato de Golgi, por
lo que su material genético (adn) se encuentra libre en el citoplasma. A pesar de su sencilla organización
celular, presentan una gran diversidad de formas conocidas como filamentos, cocos, bacilos, vibrios y
espirilos. Las bacterias miden entre 0.5 y 5 μ de longitud; son tan pequeñas que es imposible verlas a simple
vista, excepto cuando se agrupan en colonias

Estos microorganismos cuentan con una pared que envuelve a la célula y le proporciona solidez y protección
contra el ambiente externo. Esta cubierta, es decir, la membrana junto con otras estructuras que rodean y
protegen el citoplasma, no es una simple membrana. A diferencia de la gran mayoría de los organismos
superiores, las bacterias tienen que enfrentar y soportar condiciones ambientales cambiantes e impredecibles,
y en muchas ocasiones hostiles; para sobrevivir a esto, han desarrollado una sofisticada y compleja protección
que a la vez permite de manera selectiva el tránsito de los nutrimentos que se encuentran en el exterior y de
los productos de desecho desde el interior.

De todos los métodos que existen para clasificar y estudiar la morfología de las bacterias, la tinción Gram ha
sido uno de los que más han resistido el paso del tiempo. Esta técnica de estudio, desarrolla- da en 1884 por el
bacteriólogo danés Hans Christian Gram, permite hacer la diferenciación de las bacterias en dos grupos de
acuerdo con las propiedades de sus membranas para teñirse. Son bacterias Gram- positivas las que después de
la tinción se visualizan al microscopio con un color morado; en cambio, las bacterias Gramnegativas se
visualizan de color rosa, rojo o grosella. Este método que permite hacer un estudio muy general de las
bacterias– puede complementarse con otros rasgos de estos microorganismos que resultan útiles para
agruparlos y clasificarlos.

Tinción especifica, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molécula fluorescente para identificar
una estructura celular en particular (inmunocitoquímico). El control de calidad de los métodos tintoriales es
importante, ya que así́ se asegura que la preparación de la muestra haya sido adecuada, por lo que se
recomienda realizar al mismo tiempo de la evaluación de la muestra clínica, la tinción de un agente infeccioso
ya identificado mediante esa tinción, el cual funcionará como un control positivo.

Algunas técnicas tintoriales Ziehl- Neelsen requieren antes de su proceso la fijación de las muestras, con la
finalidad de preservar la arquitectura estructural y química de las células. 3 Existen dos tipos de fijadores:
físicos y químicos. Entre los procesos de fijación físicos se tienen los siguientes: desecación, calor seco, calor
húmedo, ultrasonido y microondas, mientras que los procesos de fijación químicos se pueden clasificar como
oxidantes y reductores, de acuerdo con sus propiedades químicas.
 2. RESUMEN

En este laboratorio, se buscó comprobar la utilidad del microscopio, reconocer e identificar

las partes que lo constituyen, y realizar montajes tanto húmedos como con aceite de
inmersión. En primer lugar, se realizó el montaje fresco con una gota de agua estancada,
observando así microorganismos presentes en ella. Luego, procedimos a realizar el montaje
de hongos por medio de la coloración simple con azul de metileno. También se realizaron
montajes con aceite de inmersión para tener una observación más detallada y obtener
imágenes más nítidas; por último, se realizó el montaje con tinción china. Durante la
práctica, se reconocieron las partes clave del microscopio y su función, adquiriendo
destreza en su manejo y comprensión de su relevancia en microbiología para el estudio
preciso de microorganismos.

Palabras claves: microscopio, montajes húmedos, coloración simple, azul de metileno,

aceite de inmersión, agua estancada, microorganismos, hongos.

ABSTRACT

In this laboratory, the aim was to test the usefulness of the microscope, to recognize and
identify the parts that constitute it, and to perform both wet and oil immersion mounts.
First, a fresh mount was performed with a drop of stagnant water, thus observing
microorganisms present in it. Then, we proceeded to mount fungi by simple staining with
methylene blue. We also mounted with immersion oil to have a more detailed observation
and to obtain sharper images; finally, we mounted with Chinese staining. During the
practice, the key parts of the microscope and its function were recognized, acquiring skills
in its handling and understanding its relevance in microbiology for the accurate study of
microorganisms.

Key words: microscope, wet mountings, simple staining, methylene blue, immersion oil,
stagnant water, microorganisms, fungi.

3. OBJETIVOS

 Reconocer e identificar las partes que constituyen el microscopio

 Realizar montajes húmedos y con aceite de inmersión
 Comprobar la utilidad del microscopio y adquirir destreza en el manejo del mismo
 Adquirir destreza en la elaboración de frotis de microorganismos a partir de
diferentes muestras y cepas microbianas.
 Realizar las coloraciones más empleadas en microbiología e interpretar los
resultados.
4. METODOLOGÍA
VISUALIZACIÓN DE AGUA ESTANCADA

1. Limpiar bien el portaobjetos antes de ser utilizado

2. Se agrega una gota de la muestra de agua estancada sobre el portaobjetos
3. Cubrir la lámina con un cubreobjetos asegurándose que quede bien expandida
4. Se limpia todo exceso de agua sobre el cubreobjetos y portaobjetos
5. Visualizar en el microscopio

Coloración para montaje de hongos

1. Tomar una pequeña muestra del pollo en descontaminación que contenga hongos
en la superficie
2. Hacer un frotis de la muestra sobre un portaobjetos
3. Aplicar una gota de azul de metileno
4. Se añadió un trozo de cinta transparente sobre el portaobjetos
5. Se observa al microscopio con los objetivos 4x, 10x y 40x

Coloración de gram para observación con aceite de inmersión, elaboración de frotis a

partir de las muestras de hisopados

Se realizo un frotis del prepucio a un canino macho, que presentaba secreción purulenta.

1. Se añadió agua destilada al hisopo, que permitió esparcir el frotis sobre el

portaobjetos
2. Se fija el frotis por medio de calor
3. Se tiñó por medio de coloración de gram

5. RESULTADOS

MONTAJE EN PLACAS
Se realizaron varios montajes de diferentes tinciones y agentes biológicos

Se tomaron anotaciones de algunos organismos observados en las diferentes placas.

6. ANALISIS DE RESULTADOS
DESCRIPCIÓN DE PLACA ANÁLISIS IMAGEN GRÁFICA
Placa de muestra tomada La tinción de Gram
de un hisopado de prepucio manifiesta cuando se
canino con material presenta una infección
purulento, teñida con bacteriana. Si es así, la
tinción de Gram prueba muestra si la
infección es Gram positiva o
gram negativa. Se observa
presencia de leucocitos,
bacilos sp. y cocos sp. Gram
positivos y negativos.
Placa de muestra tomada Se observa una alta
de porción de pollo en concentración de bacterias,
proceso de se logró identificar cocos sp
descomposición. Teñida con bacillus Sp y bacillus
tinción de Gram subtilis. Tanto Gram
positivos cómo Gram
negativos, además de la
presencia de bacterias
teñidas de manera bipolar,
el cual es un patrón de
tinción particular, donde los
colores se concentran en
los polos opuestos del
microorganismo en
cuestión, dejando el resto
de la bacteria sin teñir o de
un color más claro
Placa de muestra de La prueba de tinción de
Klepsiella SP. Diluida en tinta china o nigrosina se
tinta china emplea al realizar un
examen de microscopía
directa de las cápsulas de
muchos microorganismos.
Su función principal es
facilitar la detección de
cryptococos neoformans.

Placa de muestra de moho El Azúl de lactofenol es un

teñida con azul de colorante para la detección
lactafenol. de levaduras y hongos que
contiene fenol, ácido láctico
y azul de metileno. Se
observa alta presencia de
levaduras y esporas de
hongos.

Placa de muestra de agua En el agua muchas veces se

estancada. estanca en una grieta u
agujero en el suelo, se da
tiempo para la proliferación
de microorganismos cómo
por ejemplo protozoos
ciliados o filoplancton.
 7. CONCLUSIÓN

- Logramos adquirir un conocimiento completo sobre las distintas partes que

componen un microscopio y su función. Esto nos ha permitido comprender cómo
utilizar eficazmente el instrumento.
- Durante nuestras observaciones microscópicas, encontramos que los montajes
húmedos y aquellos realizados con aceite de inmersión son indispensables para
obtener imágenes de alta calidad y aumentos precisos, lo que nos permite
examinar con mayor detalle las estructuras y organismos en las muestras
analizadas.
- Durante el análisis de la muestra del prepucio del canino, identificamos la
presencia de microbiotas positivas, lo que sugiere la existencia de una flora
bacteriana normal en esta área anatómica, proporcionando información relevante
para el estudio de la salud y el bienestar animal.
- En el montaje de hongos de la carne, observamos la presencia de Cocos sp.,
Bacillus sp. y algunos Bacillus subtilis.
- Finalmente, durante la observación del montaje de agua, identificamos una
abundante cantidad de protozoos, lo que indica la presencia de organismos
unicelulares en este medio acuático y subraya la importancia de la calidad del agua
para la salud pública y el medio ambiente.

8. REFERENCIAS

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