ADN

Estructura y Replicación

• Semana 2 Sesión 3
Reflexión desde la experiencia: saberes previos

Fiebre? Inapetente? malestar general?

Ciprofloxacino,
levofloxacino,
moxifloxacino,
norfloxacino y
ofloxacino.
Reflexión desde la Experiencia
Resultado de Aprendizaje

Al término de la sesión, el estudiante reconoce la importancia

de la replicación y su aplicación en la Medicina Veterinaria a
través de estudio de la duplicación del ADN.
Contenido

1. ADN:
estructura 2. Replicación 3.Aplicación

• Características • Enzimas que participan • Importancia

• Estructura • Etapas: iniciación,
• Composición elongación y terminación
Estructura del ADN
Propiedades
ADN: nociones básicas

¿Qué significa? Ácido desoxirribonucleico

¿Cuál es el ADN El ADN de doble cadena

más común?

Eucariotas (núcleo, mitocondrias,

¿Dónde está el
cloroplastos), procariotas
ADN?
(citoplasma), ADN virus

¿Cuál es su Almacenar la información

función? genética (instrucciones para la
vida)

Link
El ADN se desnaturaliza con calor (95°C)

Link
El ADN tiene carga eléctrica negativa

OH
Niveles de estructura del ADN

Terciaria
Compactación del ADN:
cromatina (eucariotas) y
superenrollamiento (bacterias)

Secundaria
Doble hélice, explica la
replicación y transcripción

Primaria
Secuencia de bases
nitrogenadas (A, T, C y G)
Composición del ADN: el nucleótido
Nucleótido

Nucleósido

Base
nitrogenada

Grupo
Presente
fosfato
solo en el
Pentosa ARN!!!!
 Enlace fosfodiéster

Enlace
fosfodiéster

Nucleótido 1

ADN C
polimerasa
A

H 2O Dinucleótido

Nucleótido 2
Dinucleótido
Polinucleótido
Nucleótidos que se
unen entre si mediante
un enlace fosfodiéster
para formar un
polinucleótido
 Doble hélice: dos cadenas de polinucleótidos
complementarias y antiparalelas
Cadena 5'-3' Puente Cadena 3'-5'
hidrógeno
Como la cadena 3’-5’ La figura de la izquierda puede
P 5’
OH está “de cabeza”, se resumirse en este esquema:
T 3’
dice que ambas
A
cadenas son
5’ 3’
P P antiparalelas
G A = T
C Las bases
Enlace P P nitrogenadas forman C ≡ G
fosfodiéster pares de bases
C
G mediante puentes de G ≡ C
hidrógeno y siempre
P P
cumplen la regla de
A complementariedad de T = A
3’ T Chargaff (G-C, A-T), 3’ 5’
OH P 5’ por eso se dice que
ambas cadenas son
complementarias
El esqueleto de azúcar-fosfato (“backbone”)
del ADN es siempre constante. Además
está cargado negativamente y es hidrofílico,
lo que le permite interactuar con el agua.
Figura modificada de Cummings (2001)
Replicación del ADN
El ADN hace copia de sí misma
Replicación: Enzimas
 Proteínas y enzimas implicadas en la
Replicación
PROTEÍNAS Y
FUNCIÓN EN LA REPLICACIÓN
ENZIMAS

Separan las dos hebras de ADN, mediante el rompimiento de los enlaces de

Helicasas hidrógeno que mantienen unidas las cadenas. Forman así las “horquillas de
replicación”.
Proteínas SSB Se fijan a las cadenas separadas impidiendo la renaturalización del ADN
Alivian los estados de super enrollamiento del ADN por delante de la horquilla
Topoisomerasas
de replicación, desenrolla la molécula de ADN y finalmente vuelve a unir las
I y II
cadenas.
Inician la copia de la hebra molde colocando un oligonucleótido “cebador” de
ADN-Primasa
ARN
ADN polimerasa III, replica el ADN en dirección 5`- 3’ de forma continua en
una de las hebras (adelantada) y discontinua en la otra (cadena retardada)
ADN
mediante fragmentos de Okazaki.
Polimerasas
Incorpora nucleótidos en las cadenas separadas (1000 nucleótidos/seg)
Tienen además actividad exonucleásica, que permite corregir errores.
I y III La DNA-Pol I elimina cebadores y rellena los huecos con oligonucleótidos de
ADN y corrige los nucleótidos mal apareados.

DNA-Ligasas Enlaza los fragmentos de Okazaki en la hebra retardada.

https://www.schoolmouv.fr/cours/la-replication-de-l-adn/fiche-de-cours Solomon, 9na edición, pagina 274 - modificada
La ADN polimerasa III sintetiza ADN en
dirección 5’→3’
• Mecanismo de acción: Formación de enlaces fosfodiéster de los dNTPs adicionados por complementariedad
• La ADN polimerasa III requiere:
1. Un grupo 3’-OH suministrado por el cebador (primer). Con este 3’-OH la ADN polimerasa III sabe dónde
empezar a polimerizar.
2. Sustratos: dNTP: los “ladrillos” para sintetizar la nueva cadena. Son cuatro: dATP, dTTP, dCTP y dGTP
3. Iones Mg2++: es el cofactor enzimático
4. Una secuencia de ADN 3’-5’ que sirve de plantilla (“template” o molde) para sintetizar la nueva cadena
complementaria

https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-
regulation/replication/a/molecular-mechanism-of-dna-replication
La ADN polimerasa III sintetiza ADN en dirección 5’→3’

La ADN polimerasa no puede

agregar nucleótidos sin un
ácido nucleico existente,
La ADN necesita un primer. La clave
polimerasa
es el grupo OH del extremo
solo sintetiza
3’ del primer.
ADN de 5’ a 3’
Modelos de replicación del ADN

A finales de los años 50, se propusieron tres mecanismos diferentes para la replicación del ADN.

a) Semiconservative model b) Conservative model c) Dispersive model

Parental Parental Parental

After first After first After first

replication replication replication
cycle cycle cycle

After second After second After second

replication replication replication
cycle cycle cycle
Replicación semiconservativa:
“perpetuación de las mutaciones”

Modelo semiconservativo de Meselson-Stahl:

Se originan dos moléculas de ADN - una de ellas hebra de ADN original y una hebra
complementaria nueva.
Etapas de la replicación
en procariotas
Etapas de la replicación de ADN

1 Iniciación

2 Elongación

3 Terminación
Proceso de replicación en E. coli

1. Fase de iniciación
• El inicio de la replicación empieza en un origen o sitio ori (rico en A y T)
Punto de
origen
Ori C

• Ciertas proteínas reconocen el origen de

replicación y separan las dos cadenas
abriendo una “burbuja de replicación”.

• Las helicasa rompen los puentes de hidrógeno

• Una primasa agrega un primer en la cadena líder
conjunto de enzimas
que sintetizan ADN:
• La topoisomerasa alivia el enrollamiento helicasa, primasa, ADN
Polimerasa III y SSBs.

• Las proteínas SSB estabilizan las hebras

• Se forma la burbuja u ojo de replicación (replicón)
• La replicación del ADN progresa en ambas
direcciones hasta que se copia a la molécula
entera.
Se copia 4.6
MB de ADN en
aproximadamen
te 1 hora
2. Fase de elongación

• Realizada por la enzima ADN polimerasa III.

• La elongación incluye la síntesis de la cadena líder

(leading strand, 5’→3’) y la síntesis de la cadena
rezagada o retrasada (lagging strand, 3’→5’). @ 2010 Pearson Education. Inc

• Al haber dos horquillas (forks), la elongación es bidireccional y a medida que cada horquilla avanza
en su respectiva dirección, la burbuja u ojo de replicación crece.

• La elongación es asimétrica: continua en la cadena líder y discontinua en la cadena rezagada.

Síntesis en la cadena retrasada

• La enzima ADN polimerasa III que tiene dos dominios, hará un loop en la cadena retrasada para poder
sintetizar en dirección 5’-3’ a medida que avanza con la horquilla.

• Los extremos 3’OH en esta cadena son otorgados por cebadores de ARN transitorios producidos por la primasa
que está ubicada al lado de la helicasa.

• Por cada cebador de ARN, la ADN pol III sintetizará segmentos de ADN
cortos llamados fragmentos de Okazaki.

• La ADN pol I remueve los cebadores de ARN y los reemplaza por ADN.

• La enzima Ligasa forma los fosfodiéster creando ADN nuevo.

Yao & O’Donnel (2009)

3. Fase de terminación

• Participan la ADN polimerasa I y la ligasa.

• La replicación termina cuando:

• Se unen todos los fragmentos de Okazaki de la hebra retardada.

• La dos horquillas se fusionan y se liberan los dos ADNs circulares.

• Las hebras nuevas se vuelven a enrollar.

Videos
• https://www.youtube.com/watch?v=6rvlyYpaEaQ
• https://www.youtube.com/watch?v=FBYeBb4C5Rc
Replicación del ADN
eucariota
Proceso de replicación en eucariotas

• Ocurre en la fase S del ciclo celular

• Dentro del núcleo.
• Los cromosomas son ADNs lineales que
tienen múltiples orígenes de replicación.
• La naturaleza linear de los cromosomas
necesita telómeros para proteger.
• No se requiere ADN girasa
Proceso de replicación en eucariotas

1. Fase de iniciación

• Múltiples orígenes de replicación (aprox. 1000 por cromosoma)

• ADN polimerasas: alfa, delta y épsilon
2. Fase de elongación

• A medida que las dos horquillas avanzan y se alejan entre sí, el replicón o burbuja crece.

• Los fragmentos de Okazaki son pequeños

• Proceso lento (100 nt por segundo)

3. Fase de finalización

• La replicación termina cuando todas las burbujas se encuentran liberando a las dos nuevas cromátides hermanas.

• En algunas células, estos extremos son extendidos por la telomerasa. En la mayoría, un tramo se pierde en cada

replicación.
Replicación en eucariotas

Replicón Replicón Replicón

Replicación: procariotas
vs eucariotas

• Resumiendo
Replicación de ADN:
procariotas vs eucariotas

(a)

Moléculas
hijas

(b)
Replicación de ADN:
procariotas vs eucariotas

Comparison of Bacterial an Eukaryotic Replication

Property Bacteria Eukaryotes
Genome structure Single circular chromosome Multiple linear chromosomes
Number of origins per Single Multiple
chromosome
Rate of replication 1000 nucleotides per second 100 nucleotides per second
Telomerase Not present Preset
RNA primer removal DNA pol I Rnase H
Strand elongation DNA pol III Pol δ, Pol Ɛ
Resumen
Semi-conservativo
Bidireccional
Horquillas (“forks”) - “burbujas de replicación” : Procariota (una) Eucariota (múltiples)
Dirección 5' to 3' en ambas cadenas.
Cadena adelantada (continua)
Cadena atrasada (fragmentos Okazaki) de longitud entre 1000 y 2000 nucleótidos en bacterias y 100 y
400 nucleótidos en eucariontes.
Inicio: cebadores de ARN
ADN polimerasa I: Elimina y rellena
ADN ligasa los une a la cadena en crecimiento.
 Apliquemos lo aprendido

Cómo actúan los antibióticos sobre la síntesis de ADN?

• Fluoroquinolonas • Sulfonamidas
Inhibición de síntesis de ADN bacteriano Inhibición de la síntesis de las purinas
causando la muerte de la bacteria. y pirimidinas.
Son de amplio espectro actuando sobre
bacterias grampositivas y gramnegativas

Ciprofloxacino, levofloxacino, Doxiciclina, sulfanilamida,

moxifloxacino, norfloxacino y sulfatiazol, minociclina
ofloxacino.
 Apliquemos lo aprendido

Cómo actúan los antibióticos sobre la síntesis de ADN?

• Fluoroquinolonas
• Sulfonamidas
Inhibición de la síntesis de las purinas y pirimidinas.
Doxiciclina, sulfanilamida, sulfatiazol, minociclina
Integremos lo aprendido

• ¿Qué diferencias hay entre las replicación procariota y eucariota?

• ¿Por qué es importante conocer el proceso de replicación?

Actividad asincrónica

SEMANA 2
• Replicación del ADN, extraído de Fester, R. 2009. DNA Synthesis: Doubling your genetic stuff en Molecular and cell
biology for dummies. Wiley publishing, inc. 257-266
• Replicación del ADN (Vídeo 1, Vídeo 2)

SEMANA 3:
Transcripción y traducción de ADN, extraído de Chandar, N; Viselli, S. 2019.
Traducción (Vídeo)
Extracción de ADN (Vídeo 1), Vídeo 2), electroforesis de agarosa (Vídeo 1, Vídeo 2)
Bibliografía

• De Robertis, E., & Hib, J. (1997). Fundamentos de biología celular y molecular de De

Robertis (4ta edición). El Ateneo, Buenos Aires.
• Griffiths, A. J. F., Lewontin, R. C., Carroll, S. B., & Wessler, S. R. (2008). Genética (9na
edición). McGraw-Hill
• https://www.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-
regulation/replication/a/molecular-mechanism-of-dna-replication
• https://www.schoolmouv.fr/cours/la-replication-de-l-adn/fiche-de-cours
MUCHAS GRACIAS