UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE AGRONOMÍA
DEPARTAMENTO DE QUIMÍCA Y TECNOLOGÍA
CATEDRA DE BIOQUÍMICA

FACTORES QUE AFECTAN LA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

La concentración del sustrato.

La concentración de la enzima.

El pH.

La temperatura.

Los inhibidores.

Los activadores.
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO

CINÉTICA ENZIMATICA

Estudio de las velocidades de Descripción de los mecanismos de

reacción catalizadas por enzimas. reacción química.

Rapidez con que varía la Pasos secuenciales para que

concentración de los sustratos. se lleve a cabo la reacción
química.

Concentración vs Velocidad. vs
tiempo concentración
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO
Comportamiento gráfico de velocidad en función de la concentración de
sustrato
Enzima no alostérica
E Características
Vo
S P
Vmax 1-.Curva hiperbólica.
c
2-.Comportamiento Asintótico en Vmax.
b Orden o
Orden mixto 3-.Presentan tres comportamientos:
Zona a: Aumento de velocidad lineal.
a
Orden 1 Zona b: Aumento de velocidad no
lineal.
S  Zona c: Velocidad constante (zona
de saturación).
Comportamiento general
La velocidad inicial de reacción aumenta con la concentración de sustrato hasta
alcanzar un máximo valor y permanecer constante (saturación).
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO

Estudio analítico del comportamiento de la velocidad de reacción en función de

la concentración de sustrato

Teoría de Michaelis – Mente

Mecanismo de reacción Expresión matemática

K+1
E+S ES Rápida Vmax  S 
Vo 
Km   S 
K-1
K2
ES P + E Lenta 𝑆 :Concentración de sustrato, M

Reacción Global 𝑉𝑜 : Velocidad inicial de reacción, M/s

K+1 K 𝑉max : Velocidad maxima de reacción,M/s
2
E+S ES P + E 𝐾𝑚 : Constante de Michaelis-Mente, M
K-1
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO

Definición de los Parámetros cinéticos: Km y Vmax

Vo Velocidad máxima
Es la velocidad que se alcanza cuando se
Vmax
ha saturado la enzima con el sustrato.

Saturación de la enzima
Sustrato ha ocupado los
sitios activos de todas las
Vmax enzimas. (No existe enzima
2 libre).

Enzima
Km S  Sustrato
Complejo ES
Definición de Km
Es la concentración de sustrato en la cual la velocidad
inicial es la mitad de la velocidad máxima.
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO

Características de la Constante de Michaelis-Mente

A condiciones especificas, su valor depende Indicativo de la afinidad de la enzima por el

de la enzima y sustrato. sustrato.
1
Enzima Sustrato KM Afinidad 
Km
Glucosa 0,15
Hexoquinasa Afinidad de la enzima
Fructosa 1,5 Km
por el sustrato
Glutamato Glutamato 0,12
deshidrogenasa NH4+ 57 E+S ES

Afinidad de la enzima
Km
Tiene unidades de concentración, M por el sustrato

E+S ES
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO
Determinación de Km y Vmax: Gráfico de Lineweaver-Burk

Vmax  S  1 K 1 1
Vo  Linealización: Doble recíprocos  m 
Km   S  Vo Vmax  S  Vmax

Y = mX + b
1
Vmax

Km
m Permite determinar
Vmas con mayor facilidad
1 los parámetros
 1 cinéticos.
Km
Vmax

1
S 
 EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA
Condiciones:
1-.Temperatura y pH constante.
Vo 2-. Cantidades saturantes de sustrato.

A Mayor conc. De enzima mayor

V  K E cantidad del complejo ES.

A menor conc. De enzima menor

cantidad del complejo ES.

Enzima E
Sustrato
Complejo ES
 EFECTO DEL pH

La Enzima se encuentra en su
Vo
pH optimo conformación mas activa.

Es característico de Generalmente el
cada enzima rango esta entre
5 y 9.

Inactivación reversible

pH
 EFECTO DEL pH
Los cambios de pH afectan el estado ionización de los grupos funcionales de las
cadenas laterales de la proteína y por lo tanto alteran su conformación, y con
ello su sitio activo.
A pH optimo:
Adecuada distribución de cargas
- + -+
+ - +-
- + -+ Favorecida

Sustrato Enzima Complejo ES

A pH diferente del optimo:

- + +
+ + + No Favorecida
- + +

Sustrato Enzima Complejo ES

 EFECTO DEL pH
Curvas de actividad de la enzima en función al pH

Vo
Vo
Pepsina Colinesterasa

pH
pH
Enzima con centro activo protonado Enzima con centro activo desprotonado
 EFECTO DE LA TEMPERATURA

Temperatura optima
V
e
l
o
c
i
d
a
d

Temperatura (°C)
 EFECTO DE LOS INHIBIDORES

Definición
Son sustancias que hace disminuir la actividad enzimática o detenerla,
a través de interacciones con el centro activo u otros centros
específicos (alostéricos).

clasifican

Irreversible Reversibles

E  I  EI
Se unen covalentemente Se unen no covalentemente
con la enzima. con la enzima.

E  I  EI
Modificación química de la Competitivo No Competitivo Acompetitivo
enzima
 EFECTO DE LOS INHIBIDORES

Inhibición Reversible Competitiva.

El inhibidor y el sustrato
compite por el sitio activo en la
enzima. Representación gráfica de la inhibición
competitiva.

El complejo EI es inactivo, y
reduce el número de centros
activos útiles .

Reduce la conc. De enzima libre

Tiene estructura química similar
al sustrato
Inhibición Competitiva.
EFECTO DE LOS INHIBIDORES

COMPETITIDAD DEL SUSTRATO Y EL INHIBIDOR POR EL SITIO ACTIVO

DE LA ENZIMA

Las fijaciones de substrato e inhibidor son

mutuamente EXCLUYENTES; el complejo EI no es productivo.
 EFECTO DE LOS INHIBIDORES
Inhibición Reversible Competitiva.

Grafico de Lineweaver-Burk
Grafico de Michaelis-Mente
Vo
1
Vmax Vmax

La inhibición es superada para

concentraciones saturantes de
sustrato.
1
Vmax

Km S.I Km C.I
S  1 1 1
 
Sin inhibidor.
Con inhibidor.
K mS . I K mC . I S 

El inhibidor aumenta el valor de Km, pero no modifica el valor de Vmax

 EFECTO DE LOS INHIBIDORES

Inhibición Reversible No Competitiva.

El inhibidor se puede unir a con la enzima

libre o con el complejo enzima-sustrato,
interfiriendo con la acción de ambos.

El inhibidor se une en un sitio

diferente del centro activo .

El complejo EI reduce la
velocidad de unión del
sustrato

Reduce la velocidad para liberar el

producto.
 EFECTO DE LOS INHIBIDORES
Inhibición Reversible No Competitiva.

Grafico de Lineweaver-Burk
Grafico de Michaelis-Mente
Vo
1
Vmax S.I
Vmax

Vmax C.I
1
Vmax C . I

1
Vmax S . I
Km S.I = Km C.I
S  1 1

Sin inhibidor.
Con inhibidor.
Km S 

El inhibidor Dismuniye el valor de Vmax, pero no modifica el valor de Km.

 EFECTO DE LOS INHIBIDORES
Inhibición Reversible Acompetitiva.

El inhibidor no afecta ni a
la enzima ni al sustrato,
solo se combina con el
complejo ES para formar
el complejo ESI.

El complejo ESI es totalmente inactivo

 EFECTO DE LOS INHIBIDORES
Inhibición Reversible Acompetitiva.

Grafico de Michaelis-Mente Grafico de Lineweaver-Burk

Vo 1
Vmax S.I
Vmax

1
Vmax C.I Vmax C . I

1
Vmax S . I

Km C.I Km S.I
S  1 
1 1
Sin inhibidor. 
Con inhibidor. K mC . I K mS . I
S 
El inhibidor afecta tanto el valor de Vmax como el de Km.
Resumen. EFECTO DE LOS INHIBIDORES

IR COMPETITIVO

IR NO COMPETITIVO

IR ACOMPETITIVO
EJEMPLO DE IDENTIFICACIÓN DE PARÁMETROS CINÉTICOS Y NATURALEZA DEL INHIBIDOR

Se siguió la cinética de una reacción catalizada por una enzima X sin inhibidor y con
inhibidor, los resultado siguen a continuación:

Concentración Velocidad Inicial (mM/min) a-. Determine Vmax y Km en la

de Sustrato reacción sin inhibidor
Sin inhibidor Con Inhibidor
2 10 8 Vmax S.I = 24 mM/min
3,5 12 10
4,3 18 12 Vmax
= 12 Km S.I = 3,5 M
5,3 24 18 2
6,4 24 24
b-. Cual es la naturaleza del inhibidor
7,8 24 24
a Vmax C.I = 24 mM/min
Vmax
= 12 Km C.I = 4,3 M
2
Como no varía Vmax y además Km C.I es mayor que Km S.I, entonces estamos en
presencia de un inhibidor competitivo
 EFECTO DE LOS ACTIVADORES

Son moléculas pequeñas, generalmente iones inorgánicos,

que son requeridos o al menos estimulan, la actividad
catalítica de una enzima.

Mecanismo de acción

Interacción obligatoria Interacción obligatoria

con la enzima libre con el sustrato libre
Conformación optima S+ A SA Verdadero sustrato
E+ A EA de la enzima
EA + S EAS SA + E ESA E + PA

EA EA + P PA P + A

La presencia de los activadores son indispensable para la actividad enzimática.

Bajas concentraciones de los activadores disminuye la cantidad de EA o SA y por lo

tanto se reduce la cantidad de producto.
 EFECTO DE LOS ACTIVADORES

Enzimas Activador Enzima-activador

Menor concentración de A

Menor cantidad de enzimas óptimamente activas

Enzimas Activador

Mayor cantidad de enzimas óptimamente activas

Mayorconcentración de A
GRACIAS! ! !