ENZIMAS

Blgo. Julio Mariano Chávez Milla

Magister en Bioquímica
UNTRM
2019
Las enzimas son proteínas formadas por las
células de los organismos vivos.
Características generales.
Términos usados en actividad enzimática:
Velocidad de reacción. apoenzima , cofactor
grupo prostético, especificidad , etc.
Las enzimas pueden actuar dentro de la célula ,
fuera de ésta, y en el tubo de ensayo.

E + S→ (ES)→ P + E

E E E E
CINETICA QUIMICA
La enzima disminuye la energía de
activación
Sin enzima
Con enzima

• La Ea de la hidrólisis de la
urea baja de 30 a 11
kcal/mol con la acción de las
E+S
enzimas, acelerando la
reacción 1014 x

E+P • El aumento de temperatura

Tiempo de la reacción
necesario para producir la
reacción no catalizada seria
de 529ºC
Enzima - Catalizador
⚫ Tanto la enzima como el catalizador aceleran
la velocidad de una reacción química.
⚫ Una enzima puede transformar 1000
moléculas de sustrato/ segundo
⚫ La enzima aumenta la velocidad de reacción
en un factor de 10 4 a 10 17
⚫ Las enzimas tienen 4 propiedades que los
catalizadores NO tienen
• Especificidad por el sustrato
• Se inactivan por desnaturalización
• Pueden ser reguladas
• Pueden ser inducibles
Las enzimas cumplen su papel catalítico gracias a:
• Fijación estereoquímicamente complementaria
del substrato
• Transformación catalítica del mismo

En ambas funciones participan:

• Cadenas laterales de los aminoácidos

• Grupos o moléculas no proteicas:
❖ Grupos prostéticos
❖ Iones metálicos
❖ Cofactores
Los siguientes hechos:
⚫ Especificidad de la reacción enzimática
⚫ Carácter heterogéneo de la catálisis
enzimática

Nos llevan a postular la existencia de un

Centro Activo en la molécula de enzima,
capaz de:

⚫ Fijar específicamente al substrato

⚫ Transformarlo catalíticamente.
 La unión del sustrato es muy
específica

⚫ Complementariedad geométrica
⚫ Complementariedad de cargas, uniones
iónicas
⚫ Modelos:
➢ Encaje inducido
➢ Llave – cerradura.
➢ Estado de transición
Una enzima puede unir dos sustratos
en su sitio activo
 Clasificación y
nomenclatura de enzimas
Cinética Enzimática
 Cinética Enzimática
➢ La cinética enzimática es el análisis cuantitativo del efecto
de cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimática, que se evalúa a través de la velocidad de la
reacción catalizada.
➢ Las variables más importantes son:
• Concentración de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
• pH
• Temperatura
• Tiempo
 Efecto de la concentración de substrato

. . . .
v
.
.
.
.
[s]
Una cinética hiperbólica implica un proceso saturante:

Hay un número limitado de sitios en la enzima

para fijar substrato; una vez que están ocupados
todos, por mucho que aumente la concentración
de substrato, la velocidad permanecerá constante
tendiendo a un valor asintótico

k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1
 Hipótesis de Michaelis - Menten
k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1
- La primera parte del mecanismo,

k+1
E+S ES
k-1
Tiene lugar mucho más rápidamente que la segunda:

k+2
ES E+P
 Hipótesis de
Michaelis-Menten
 E  S  es (e0 − x)s
Km = = =
Equilibrio rápido  ES  x x

e0 s
x=
Km + s
Vmax s
v = k +2 x v=
k +2 e0 s Km + s
v=
Km + s

k +2 e0 = Vmax
 Vmax s
v=
Km + s
Significado de la constante Km

1. Constante de equilibrio de disociación del complejo ES

(en condiciones de equilibrio rápido)

2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato
(en condiciones de equilibrio rápido)
3. Mide la función de fijación (en cond.de equilibrio rápido)
4. A mayor Km menor es la afinidad de la enzima por el sustrato
5. A menor km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato
6. Se mide en unidades de concentración
Significado de la constante Vmax = k+2 e0

1. Velocidad asintótica para s

2. Directamente proporcional a la concentración de

enzima (hoy se prefiere caracterizar a la enzima
por k+2)

3. Mide función de transformación catalítica

4. Se expresa en unidades de velocidad

 Representación directa

v
100
Vmax
80

60
Vmx s
v=
40 Km + s

20

s
0
0 20 40 60 80 100

Km
 Representación recíproca doble
(Lineweaver - Burk)
Representación Lineweaver-Burk
0.04

1/v
0.03

1/Vmax
0.02

1 Km 1 1
-1/Km =  +
0.01
v Vmx s Vmx

0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6

1/s
Definición Actividad Enzimática

⚫ Es el número de moles de sustrato que

reaccionan para formar producto, por mol de
enzima y por unidad de tiempo. Esto supone
que la enzima está plenamente saturada con
sustrato y por tanto que la reacción se efectúa
con su máxima rapidez
⚫ El índice de recambio muestra la eficiencia
impresionante de la catálisis enzimática
La actividad enzimática : Es la cantidad de sustrato convertido por unidad
de tiempo por volumen de reacción.

*La unidad según el S.I: es el katal.

1 katal = 1 mol S-1

*Otra unidad mas utilizada de enzima (U)

U: 1 umol. min -1.

*La equivalencia katal es 16,67.

*La actividad especifica esta referida a :

U/mg. Proteina: umol/min. mg de proteína.

*La actividad enzimática es dependiente de las condiciones ensayadas.

Estas condiciones tienen que seres especificadas.
 Factores que afectan la actividad enzimatica:
Efecto del pH en la ENZIMA

Cada enzima tiene un pH óptimo para su actividad

El pH afecta las interacciones iónicas
Efecto del pH

1. Sobre la fijación del substrato al centro activo:

- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato

2. Sobre la transformación catalítica del substrato

3. Sobre la estructura de la proteína enzimática

En el efecto de la temperatura hay dos componentes:

1. Aceleración de la reacción según la ecuación

de Arrhenius

k = A exp (-Ea/RT)

2. Desnaturalización térmica de la proteína

Efecto de la temperatura en la ENZIMA
Aumento de la Desnaturación
velocidad por calor

15º 40º 75º

Temperatura

Cada enzima tiene una temperatura óptima.

Tiempo de incubación
Concentración de la enzima
Concentración del sustrato
 Coenzimas
⚫ Las coenzimas son pequeñas moléculas
orgánicas, que se unen a la enzima.
⚫ Las coenzimas colaboran en la reacción
enzimática recibiendo transitoriamente
algún grupo químico: H+ , OH, CH3 .
⚫ La enzima sin la coenzima recibe el nombre
de APOENZIMA (inactiva)
⚫ La holoenzima es una enzima activa
catalíticamente.
⚫ La holoenzima: apoenzima + cofactor
Algunas enzimas requieren metales para
mejorar su actividad
Isoenzimas o Isozimas
⚫ Son proteínas con diferente estructura pero
cataliza la misma reacción. Ejemplo:
Glucocinasa, hexocinas
Ribozimas
⚫ Es una molécula de RNA con capacidad
catalítica.
⚫ El termino ribozima deriva de la
combinación de las palabras ENZIMA de
acido RIBONUCLEICO.
⚫ El sustrato de esta enzima es con
frecuencia la molécula de RNA.
Inhibición enzimática
Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimática, a través de
interacciones con el centro activo u otros centros específicos
(alostéricos).

Esta definición excluye todos aquellos agentes que inactivan a

la enzima a través de desnaturalización de la molécula enzimática

De esta forma, habrá dos tipos de inhibidores:

I. Isostéricos: ejercen su acción sobre el centro activo

II. Alostéricos: ejercen su acción sobre otra parte de la

molécula, causando un cambio conformacional con
repercusión negativa en la actividad enzimática.
Inhibición enzimática
Los inhibidores pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la enzima:

E+I E’
Inhibición reversible

(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,

impidiendo la fijación del substrato: Inhibición Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo

haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijación del substrato a la enzima, pero sí impide la acción
catalítica: Inhibición No Competitiva

(c) El inhibidor se fija únicamente al complejo enzima-substrato

una vez formado, impidiendo la acción catalítica; este tipo
se conoce como Inhibición Acompetitiva
Inhibición Competitiva
Inhibidores Competitivos

⚫ Compiten con el sustrato por el sitio

activo de la enzima
⚫ Se une solo a la enzima libre
⚫ V máx no se altera y K M cambia
 Inhibición competitiva

Al aumentar la cantidad
de SUSTRATO el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto
 S
E ES E+P
I
Se define una constante de [E] [I]
equilibrio de disociación del Ki =
EI inhibidor: [EI]

Características:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibición
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un análogo químico del
substrato.
- El inhibidor es tan específico como el substrato
Por tanto, en la inhibición competitiva,

1. El efecto cinético del inhibidor es el aumento aparente de la

Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)

2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy

altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto más pequeño sea el valor de Ki mayor será la potencia

del inhibidor competitivo.
 Sin inhibidor

Con inhibidor

El inhibidor competitivo
aumenta la Km

Km Km
Sin con
inhibidor inhibidor
Inhibición competitiva - Representación recíproca doble

0.07
1/v
0.06

0.05

0.04
1/Vmax
0.03

0.02
-1/Km
0.01

1/s
0.00
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

-1/(Km(1 + i/Ki))
Ejemplo Inhibidor Competitivo

⚫ Ácido succínico + FAD == ácido

fumárico + FADH2
⚫ El inhibidor competitivo es el ácido
malónico
⚫ Es un análogo estructuralmente
parecido al ácido succínico
Ácido Fólico y Sulfanilamida
⚫ La sulfanilamida es un análogo estructural
del ácido p - aminobenzoico (PABA)
⚫ PABA es el punto de partida para la síntesis
de ácido fólico en las bacterias
⚫ El ácido fólico es una vitamina esencial para
la proliferación (división) bacteriana
⚫ Sulfanilamida se usa en el tratamiento
algunas infecciones
Metotrexato y Dihidrofolato
⚫ El ácido fólico en sus formas de dihidro y
tetrahidrofolato es coenzima de la reacción
catalizada por la dihidrofolato reductasa
⚫ Esta reacción es parte del metabolismo de
los nucleótidos para la síntesis de DNA
⚫ Metotrexato se usa en la terapia de algunos
cánceres, inhibiendo la síntesis de DNA
Inhibición No Competitiva
Inhibidor No Competitivo

⚫ Se une a un lugar diferente del sitio

activo la enzima
⚫ Se une a la enzima libre y también al
complejo enzima-sustrato
⚫ Por acción del inhibidor disminuye la Vm
pero el valor de Km no se altera
Inhibición NO competitiva
 Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un
sitio diferente del sitio activo
 S
E ES E+P
I I
Inhibición
S No Competitiva

EI ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
Inhibición Acompetitiva o
Incompetitiva
Inhibidor Acompetitivo o
Incompetitivo
En este tipo de inhibición el inhibidor se enlaza al centro
activo pero solo después de que el sustrato lo haya hecho y,
por tanto, inhibidor y sustrato no compiten. De esta manera,
aunque todo el sustrato esté saturando la enzima y toda la
enzima esté como complejo ES, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo ESI.

Como I solo se une a ES estimula la formación de ES y, por

tanto, incrementa la unión del sustrato a la enzima,
disminuyendo Km . Sin embargo, el complejo ESI no
conduce a productos y Vm disminuye.
Inhibidor acompetitivo o
Incompetitivo
⚫ Se une a un lugar diferente del sitio
activo de la enzima
⚫ Se une sólo al complejo enzima-sustrato
⚫ Los efectos que tiene: disminuye el valor
de Km y también el de Vmáx
 S
E ES E+P
I
Inhibición
Acompetitiva
ESI

El inhibidor sólo puede fijarse al complejo ES;

el complejo ESI no es productivo
Inhibición Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
químico de la enzima, modificándola covalentemente

- Su acción no se describe por una constante de equilibrio Ki,

sino por una constante de velocidad ki:

E+I E’
- A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuación
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente

tóxicos.
Inhibidores Irreversibles

⚫ Producen inactivación permanente de la

actividad enzimática
⚫ Se interfiere con el normal desarrollo de
una reacción o vía metabólica
⚫ Ejemplos: p-cloromercuribenzoato,
yodoacetato, diisopropilfluorfosfato
Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosforados

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
RESUMEN

⚫ Las enzimas son proteínas que catalizan

las reacciones biológicas
⚫ Presentan especificidad por su sustrato
⚫ Cada enzima presenta dos parámetros
importantes Vmax (saturación de la
enzima) y la Km (medida de la afinidad
por el sustrato)
RESUMEN

⚫ La actividad enzimática puede ser

inhibida, por inhibidores competitivos
(similares al sustrato) o por inhibidores
no competitivos.
⚫ La temperatura y el pH afectan a la
enzima en su actividad catalítica.
⚫ Algunas enzimas requieren de
coenzimas y/o cofactores para su
actividad.