• CINETICA ENZIMATICA

CINETICA QUIMICA

Cinética Química es aquella parte de la Química que

se encarga de estudiar la velocidad de una Reacción
Química y los factores que permiten su control.
Se limita a :

a) Reacciones Reversibles
 CLASIFICACION DE LA REACCIONES QUIMICAS

• Según el número de moléculas:

A P

A+B p

A+B+C P
SEGÚN EL NÚMERO DE REACCIÓN

R. Primer Orden: A P

V= -d A= K (A)
dT

R. Segundo Orden: A+ B P

V= -dA = -dB ó + dP
dT dT dT

V= K (A) (B)
 CINETICA DE MICHAELIS-MENTEN
En 1913 Michaelis y Menten de Hill propusieron una teória
para explicar la velocidad inicial de una reacción catalizada
por una enzima, en función a la concentración del sustrato.

La concentración de sustrato que produce la mitad de la

velocidad máxima, llamada valor Km o Constante de
Michaelis, se puede determinar experimentalmente
graficando v1(velocidad inicial) como función de [S].
La expresión de Michaelis-Menten

Vo = Vmax [S]
Km + [S]
M.M.en 1913 investigaron el siguiente sistema :

invertasa
Sacarosa Glucosa + Fructosa
agua

Midieron la velocidad inicial Vo en condiciones

experimentales

a)(E) variable y (S) constante

b)(E) constante y (S) variable

A) Efecto de la (E) sobre la velocidad Enzimática

( E)
Vo &

Vo

(E)
 B) Efecto de la concentración del sustrato
sobre la velocidad de una reacción

-------------------------------------------------------

Vo 1/2 Vmax

KM
Sustrato (S)
 Se supone:
E+ S ES

ES E+P
KM = Constante de Michaelis -Menten
Constante global que sustituye o engloba las constantes de
velocidad de la reacción de interacción entre la enzima y
el sustrato

Vo = Velocidad inicial de reacción

Vmax = Cuando la enzima se halla saturada

 Como se relacionan Vmax, Km y Vo?

• Observemos : *
• K1 K3

• E+S ES E+P
• K2 K4
• Que hay un solo sustrato
• Que la velocidad K4 se desprecia
• * Que la concentración del E es muy pequeña
• * Que la E puede estar como: E libre y ES
• * Que el equilibrio alcanzado por K1 es más rápido que
K3, por lo que éste es limitante determina, o limita, la
cantidad de producto formado
 POR LO QUE...

• LA FORMACION DEL PRODUCTO SERA:

• VO = K 3(ES)

• LA ECUACION RESULTANTE SERA:

• VO =Vmax.(S)

• (S) + Km

Ecuac. Michaelis
Menten
La dependencia de la velocidad inicial de una reacción
catalizada por enzima en [S] y en Km puede aclararse
valorando la ecuación de Michaelis-Menten como sigue:

.-1) Cuando [S] es igual que Km:

vo= Vmax*[S] vo = Vmax*[S] = Vmax[S] = Vmax

Km + [S] [S]+ [S] 2[S] 2

2) Km= K2 + K3/
K1

Si K2>> K3 Km =K2/K1

K m= (E) (S) K = (E) (S)

(ES) ES)
 SIGNIFICADO E LA VELOCIDAD MAXIMA

• Vmax= K3 (ET)

• # de recambio

• K3= número de moléculas de Sustrato convertidas

en producto por unidad de tiempo, cuando la
enzima esta saturada
 NÚMERO DE RECAMBIO
Carboxipeptidasa 102
Tripsina 102 a 103
Cinasas 103
Deshidrogenasas 103
Transaminasas 103
Anhidrasa carbonica 106
Superoxido dismutasa 106
catalasa 107

Número de recambio
No. de moléculas de S transformadas /unidad de tiempo,
por una molécula de E ( o por un solo sitio catalítico)
 DETERMINACIÓN DE KM Y Vmax MEDIANTE UNA
ECUACION LINEAL

Se tiene:
vo= Vmax*[S] se invierte 1 = Km + [S]
Km + [S] vo Vmax*[S]

Se factoriza 1 = Km * 1 + [S]
vo Vmax [S] Vmax[S]

Se simplifica:
1= Km * 1 + 1
vo Vmax [S] Vmax

La ecuación de la recta es:

y=a*x+b
La ecuación de la recta es:
y=a*x+b
donde:
y = 1 y x = 1
Vo [S]

El valor de Km puede ser hallado a partir de la

gráfica de Lineweaver-Burk o del doble reciproco
usando la pendiente y la intersección negativa de x.
 Representación recíproca doble
(Lineweaver - Burk)
y=a*x+b

0.04

1/v
0.03

1/Vmax
0.02

1 Km 1 1
-1/Km   
0.01
v V mx s V mx

0.00
-0.4 -0.2 0.0 0.2 0.4 0.6

1/s
 INHIBICION ENZIMATICA

• ENTENDEMOS COMO EL EFECTO DE ALGUNAS SUSTANCIAS

SOBRE LA VELOCIDAD CATALITICA DE LA ENZIMA

• APLICAMOS LA ECUACION DE LINENWEAVER-BURKE EN LA

IDENTIFICACION DEL TIPO DE INHIBICION.
 INHIIBIDORES

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima

libre, con el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica químicamente a la

enzima:
E+I E’
 INHIBICIÓN REVERSIBLE
(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,
IMPIDIENDO LA FIJACIÓN DEL SUBSTRATO:
Inhibición Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de

que lo haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, NO
IMPIDE LA FIJACIÓN DEL SUBSTRATO a la enzima,
pero sí impide la acción catalítica: Inhibición No
Competitiva
 Inhibición Competitiva
S
E ES E+P
I
Se define una constante de [E] [I]
equilibrio de disociación del Ki =
EI inhibidor: [EI]

Características:
- Las fijaciones de substrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibición
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un análogo químico del
substrato.
- El inhibidor es tan específico como el substrato
Por tanto, en la inhibición competitiva,

1. El efecto cinético del inhibidor es el aumento aparente de la

Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki)

2. La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy

altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de inhibidor

3. Cuanto más pequeño sea el valor de Ki mayor será la potencia

del inhibidor competitivo.
Inhibición competitiva - Representación recíproca doble

0.07
1/v
0.06

1/Vmax
0.05

0.04

-1/Km
0.03

0.02

0.01

1/s
0.00
-0.3 -0.2 -0.1 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
-1/(Km(1 + i/Ki))
 Inhibidores
competitivos
Succinato deshidrogenasa COO-
CH2
COO- FAD FADH2 COO- COO-
CH2 CH
CH2 Malonato
SDH CH
COO- COO- COO-

Succinato C O
Fumarato
CH2
COO-
Oxalacetato
 COO-
CH2 Inhibidores competitivos
como ánalogos estructurales
CH2
del substrato
COO-

Succinato

COO-
C O
CH2
COO-
Oxalacetato
 Inhibición No Competitiva

S
E ES E+P
I I
S
EI ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E

y al complejo enzima-substrato ES; ni el complejo EI
ni el complejo ESI son productivos
 INHIBICION NO COMPETITIVA

• E+I EI

• I + ES ESI
• El agente quelante EDTA se une reversiblemente al
Mg2+ y a otros cationes divalentes, e inhibe así de
modo no competitivo a algunas enzimas que precisan
esos iones para su actividad.
DROGA USO ENZIMA TIPO DE
TERAPEUTICO AFECTADA INHIBICION

Lovastina Hipercolestero HMGCoA Competitiva

lemia reductasa
5fluoroacil cancer Dihidrofolato competitiva
reductasa
alopurinol gota Xantino irreversible
oxidasa
cumadin anticoagulante Glutamilcar competitiva
boxilasa
captopril hipertensión ECA competitiva
E Convertidora de angiotensina
concepto de Análogo de Estado de Transición (AET)

- El inhibidor no es estrictamente análogo del substrato,

sino del Estado de Transición de la reacción.

- La afinidad de las enzimas por los AET es enorme, del

orden nM o pM, con lo que la fijación es tan fuerte que
puede considerarse irreversible
 Estado de
transición

Substrato

Análogo de
estado de transición
EN EL ESTADO DE TRANSICIÓN LAS INTERACCIONES ENTRE LA
ENZIMA Y EL SUSTRATO SON ÓPTIMAS
 INHIBICIÓN IRREVERSIBLE

- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo

químico de la enzima, modificándola covalentemente

E+I E’
-El efecto de los inhibidores irreversibles depende del
-tiempo de actuación del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente

tóxicos.
Algunos tipos de inhibidores irreversibles

1. Reactivos de grupos -SH

2. Organofosfóricos

3. Ligandos de metales

4. Metales pesados
Reactivos de grupos -SH,

(a) Agentes alquilantes

Yodoacetato ICH2 COO- IH

E SH E S CH2 COO-

O
(b) Compuestos insaturados
E S
E SH N CH2 CH3
O
O
N CH2 CH3
N-Etil maleimida (NEM)
O
Reactivos de grupos -SH, 2
(c) Formadores de mercáptidos

HOHg COO- p-Hidroximercuribenzoato

E SH E S Hg COO-

(d) Oxidantes

Promueven la oxidación de dos tioles a un disulfuro

 Organofosfóricos

Ser CH CH2 OH H 3C CH3

CH
Ser CH CH2 O P O
H3 C CH3 CH
CH H 3C CH3
F P O
CH
DFP: H3 C CH3
diisopropil - Actúan sobre enzimas serínicas
fluorofosfato - Únicamente sobre la Ser activa
- Insecticidas: Parathion, Malathion
- Inhibidores de la Acetilcolinesterasa
Ligandos de coordinación de metales

Es el caso del ion cianuro, CN-

Se fija con gran afinidad a la sexta posición de coordinación

del Fe hemínico, impidiendo toda modificación posterior.

Por ello actúa sobre sistemas de Fe hemínico con la sexta

posición de coordinación libre, como la citocromo oxidasa,
de lo que deriva su elevadísima toxicidad
 SUBSTRATOS SUICIDAS

(Inhibidores activados enzimáticamente)

- Se trata de moléculas que se unen al centro activo de manera

específica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos

- Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la

molécula en una especie química muy reactiva que modifica
covalentemente a la enzima, inactivándola

-Tienen por tanto :

(a) la especificidad del inhibidor competitivo y

(b) la potencia de los inhibidores irreversibles

Modo de acción de los inhibidores suicidas

1 2 3
E+I EI EI* E’ + I*

1. El inhibidor se fija a la enzima igual que el substrato o un

inhibidor competitivo convencional

2. La acción catalítica de la enzima convierte al inhibidor I

en una especie altamente reactiva I*

3. I* modifica covalentemente a la enzima, inactivándola

de forma definitiva al igual que un inhibidor irreversible.
 INHIBIDORES SUICIDAS,
- SISTEMA DE LA -LACTAMASA BACTERIANA

La utilización masiva de antibióticos -lactámicos (penicilinas,

sus derivados semisintéticos y cefalosporinas) ha conducido a
la aparición de resistencias a los mismos.

Los microorganismos resistentes a estos antibióticos lo son por

producir una enzima, la -lactamasa, que inactiva a los antibió-
ticos -lactámicos.
Penicilina (activa)
S
R CO NH CH3
N CH3
O
COO-

-Lactamasa

S
R CO NH CH3
O C HN CH3
O-
COO-

Ác.peniciloico (inactivo)
Muy a menudo los preparados de penicilinas o penicilinas
semisintéticas se formulan añadiendo un inhibidor suicida
de la -lactamasa, el ácido clavulánico

O CH2OH O
O CH2OH
C -Lactamasa C
N H C
O- HN H
O
-
COO
COO-
Ác.clavulánico
Esta molécula
reacciona con la
O serina activa de la
O CH2OH
C -lactamasa,
C
CH CH2 O HN produciendo su
H
Ser inactivación
COO-
- SISTEMA DE LA MONOAMINO OXIDASA (MAO) CEREBRAL

Los estados depresivos, en general, están relacionados con un

descenso en la concentración de neurotransmisores adrenérgicos
(dopamina, noradrenalina, etc.) en determinadas regiones del
cerebro.

Una de las enzimas encargadas de la degradación de estos

neurotransmisores es la monoamino oxidasa (EC 1.4.3.4).

Por tanto, la inhibición de la monoamino oxidasa se emplea como

terapéutica de los estados depresivos. Se han desarrollado muchos
inhibidores suicidas de la MAO
 Noradrenalina
HO

HO CHOH CH2 NH2

O2 + H2O

Monoamino
oxidasa
NH3 + H2O2 La MAO es una flavoproteína:
tiene un grupo prostético
HO
flavínico (FAD) fundamental
para la catálisis. Los inhibidores
HO CHOH CHO suicidas de la MAO inactivan
al cofactor FAD.
Dihidroxifenilglicol
 O
N,N’ dimetil
H3C N
NH propargilamina
(pargilina)
E S H2C N N O
R
CH3
+
HC C CH N
Flavina CH3

H 3C
N+ CH CH
Inhibición suicida de la H 3C CH O
MAO mediante Pargilina
H3C N
NH

E S H2C N NH O
R
Flavina modificada
CINETICA DE REACCIONES BIMOLECULARES

1 )Reacción Secuencial o de Desplazamiento Simple

Azahar:

A +E AE

AE+B AEB

B+ E BE

BE + A BEA
2) ORDENADA

MALATO + NAD
M.D

OXALACETATO + NADH.

E-NAD-MALATO
1 2
2) REACCION DE DOBLE DESPLAZAMIENTO

ASPARTATO + OXOGLUTARATO

OXALACETATO + GLUTAMATO

1) Aspartato + PLP-E NH3- PLP-E + Oxalacetato

2) Oxoglutarato + NH3 PLP-E + Glutamato

qué son las moléculas
efectoras o moduladoras ?
Son moléculas que pueden ser
activadores (+) o inhibidores (-) de la
velocidad catalítica.

No cambian la afinidad del enzima

por el sustrato.

Pueden ser el mismo sustrato

denominado HOMOTROPICO o es
otra sustancia al que se le conoce
como HETEROTROPICO
 ES DIFERENTE A LAS
N Z IM AS A NT ES VIS TAS?
E

¡SI!!

PORQUE LAS E.A. PRESENTAN 2

LOCALIZACIONES DE UNION DE
LIGANDOS:
1.- Las catalíticas (Centro Activo) a las
que se une el sustrato.
2.- Las reguladoras (Centro Alostérico)
a las que se unen las moléculas
denominada efectores o moduladores.
ENZIMAS
ALOSTERICAS
S

EF
S EF

CA C.ALOST.

ENZIMA
 CINETICA SIGMOIDEA
La unión cooperativa de la primera
molécula de S o ligando a la Enzima
incrementa la velocidad de unión de
subsecuentes moléculas de sustrato
a los otros sitios de unión:
cooperatividad positiva
 ENZIMAS ALOSTERICAS

Enzimas
susceptibles de
ser modificadas
por moléculas
pequeñas.
• ESTADO CONFORMACIONAL

Baja afinidad por el sustrato

Alta afinidad por el sustrato

 MODELOS DE INTERACCIONES ALOSTERICAS

MODELO CONCERTADO:

+S

RR

TT

RR
MODELO SECUENCIAL :

RT
TT +S

+S

RR