EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO EN LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA.

En las reacciones no catalizadas por enzimas la formación de producto depende

linealmente de la concentración de sustrato añadido. Mientras que en las reacciones
catalizadas por enzimas, generalmente se obtiene una dependencia hiperbólica de la
velocidad respecto a la concentración de sustrato, distinguiéndose 3 partes distintas en la
curva. En la primera parte, a bajas concentraciones de sustrato, la velocidad es
proporcional a la concentración de sustrato, de tal manera que si se duplica la concentración
de sustrato, se duplica la velocidad (reacción de primer orden). La segunda parte de la
curva, a concentraciones intermedias de sustrato, la velocidad se incrementa menos que en
la primera parte con el incremento de la concentración, iniciando alrededor de la ½ de la
Vmax. La última parte de la curva, a altas concentraciones de sustrato, la velocidad es
independiente de la concentración de sustrato (reacción de orden cero), así la velocidad
alcanzada es cercana a la máxima.

A pesar de que la curva del efecto de la concentración de sustrato en la velocidad de

la enzima es compleja, existe una ecuación matemática que expresa la relación que existe
entre las variables: la hipérbola cuadrática o también denominada ecuación de Michaelis-
Menten llamada así debido al trabajo pionero de Michaelis y Menten y de Bringgs y
Haldane:

𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆]
𝑉=
𝐾𝑚 + [𝑆]

En la ecuación de Michaelis-Menten hay dos variables que son la velocidad (v) y la

concentración de sustrato [S]. La Km y la Vmax son constantes. La Km es llamada la
constante de Michaelis-Menten. El valor de Km de una enzima para un sustrato específico
es la concentración del sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la
velocidad máxima. La Vmax es la velocidad teórica máxima de la reacción catalizada por
la enzima. A concentraciones muy altas de sustrato el valor de la velocidad se aproxima al
de la velocidad máxima de la reacción, pero nunca se llega a ésta. Los valores de Km y
Vmax son característicos de una enzima, y se conocen como parámetros cinéticos de la
enzima. Aunque son constantes, dependen de las condiciones en las que se lleva a cabo la
reacción, ya que hay que recordar que la enzima es una proteína cuya estructura y carga
eléctrica se modifican cuando los componentes de la solución cambian.

Una manera para obtener los valores de Km y Vmax de una enzima es graficando los
valores de velocidad contra la concentración de sustrato. Este método tiene la desventaja de
que se grafica una curva y no una línea recta, por lo que la interpolación es difícil. Otra
manera para obtener los valores de Km y Vmax es la de utilizar alguna de las expresiones
matemáticas que producen una línea recta como son la de Eadie-Hosftie, la de Hanes o la
de Lineaweaver-Burk, también llamada de dobles recíprocos, que es la más popular y se
muestra a continuación:

1 𝐾𝑚 1 1
= × +
𝑉 𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆] 𝑉𝑚𝑎𝑥

𝒴 =𝓂×𝒶+𝒷

Puede observar en la ecuación que las formas lineales de la ecuación de Michaelis-

Menten son expresiones matemáticas simples y son útiles para obtener los valores de Km y
Vmax. Y son ampliamente usados para evaluar o analizar el efecto de inhibidores sobre la
actividad enzimática. (0141 BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL 2009).

Se obtuvo la Amilasa (enzima perteneciente en la saliva) y se coloco en cada tubo de

ensayo y así saber más acerca de cómo se comporta bajo distintas condiciones. Así que en
una serie de pruebas en las que se tomo diferentes concentraciones de sustrato, y se
encuentra la velocidad de reacción (qué tan rápido tu sustrato se convierte en producto)
cuando añades enzima en cada caso. Por supuesto, se tiene que ser cuidadoso para añadir la
misma concentración de enzima en cada reacción, de forma que pueda comparar en las
distintas preparaciones en cada tubo de ensayo.

La velocidad de reacción se debe determinar, pero lo que en realidad se requiere es la

velocidad de reacción inicial, justo en el momento en que se combina el sustrato y la
enzima, y esta cataliza la reacción tan rápido como puede a esa concentración particular de
sustrato (porque la velocidad de reacción disminuirá a cero conforme se usa el sustrato). De
este modo, se medirá la cantidad de producto sintetizado por unidad de tiempo al inicio de
la reacción, cuando la concentración de producto aumenta en forma lineal. Este valor, la
cantidad de producto sintetizado por unidad de tiempo al inicio de la reacción, se
llama velocidad inicial o V0 para esa concentración.

Una vez obtenidos los valores de V0 para todas las concentraciones, ahora se puede
trazar cada concentración de sustrato con su V0, un par (X, Y). Una vez que trazado todos
los pares (X, Y) para las diferentes concentraciones, se puede conectar los puntos por
medio de una curva que mejor se ajuste a ellos para obtener una gráfica. Para muchos tipos
de enzimas en la gráfica que se obtiene, los valores de V0 se incrementan rápidamente en
concentraciones bajas de sustrato, luego se estabilizan a una meseta plana en altas
concentraciones de sustrato. Esta meseta se genera porque la enzima está saturada, es decir,
que todas las moléculas de enzima disponibles ya están ocupadas procesando sustratos.
Cualquier molécula adicional de sustrato tendrá que esperar hasta que una enzima se
desocupe, por lo que la velocidad de reacción (la cantidad de producto generado por unidad
de tiempo) está limitada por la concentración de enzima.

La concentración de sustrato que da una velocidad que está a la mitad de la Vmax se

llama Km y es una medida útil sobre la rapidez con que aumenta la velocidad de reacción
respecto a la concentración del sustrato. El Km también es una medida de la afinidad de
una enzima por su substrato (la tendencia a unirse a él). Un Km más baja corresponde a una
mayor afinidad por el sustrato, mientras que un Km más alto corresponde a una menor
afinidad por el sustrato.

La velocidad de la catálisis aumenta linealmente a medida que aumenta la

concentración del sustrato y luego comienza a nivelarse y acercarse a un máximo a
concentraciones más altas de sustrato. La cinética de Michaelis-Menten; una gráfica de la
velocidad de reacción (V0) como una función de la concentración de sustrato [S] para una
enzima que obedece a la cinética de Michaelis-Menten muestra que la velocidad máxima
(Vmax) se aproxima asintóticamente. La constante de Michaelis (Km) es la concentración
de sustrato que produce una velocidad de Vmax/2.

El grado de formación del producto se determina en función del tiempo para una serie
de concentraciones de sustrato. Como se esperaba, en cada caso, la cantidad de producto
formado aumenta con el tiempo, aunque finalmente se alcanza un tiempo en el que no hay
un cambio neto en la concentración de S o P. La cantidad de producto formado a diferentes
concentraciones de sustrato se grafica en función del tiempo. La velocidad inicial (V0) para
cada concentración de sustrato se determina a partir de la pendiente de la curva al comienzo
de una reacción, cuando la reacción inversa es insignificante.

Definimos V0 como la tasa de aumento en el producto con el tiempo cuando [P] es

bajo; es decir, a veces cerca de cero. Por lo tanto, para la gráfica V0 se determina para cada
concentración de sustrato midiendo la velocidad de formación del producto en los primeros
tiempos antes de que se acumule P. A una concentración fija de enzima, V0 es casi
linealmente proporcional a [S] cuando [S] es pequeño pero es casi independiente de [S]
cuando [S] es grande. En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten propusieron un modelo
simple para explicar estas características cinéticas. La característica crítica en su
tratamiento es que un complejo de ES específico es un intermedio necesario en la catálisis.
(Berg, J. M., Tymoczko, J. L. y Stryer, L. 2002).
Bibliografia
(1) Berg, J. M., Tymoczko, J. L. y Stryer, L. (2002). The Michaelis-Menten model
accounts for the kinetic properties of many enzymes (El modelo Michaelis-
Menten explica las propiedades cinéticas de muchas enzimas). En Biochemistry
(Bioquímica) (5th ed., section 8,4). Nueva York, NY: W. H. Freeman. Tomado
de: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK22430/.
(2) Khan Academy. Fundamentos de las graficas de cinética enzimática. Tomado de:
https://es.khanacademy.org/science/biology/energy-and-enzymes/enzyme-
regulation/a/basics-of-enzyme-kinetics-graphs
(3) 0141 BIOQUÍMICA EXPERIMENTAL (2009). Parte II: Factores que
modifican la actividad de las enzimas: Efecto de la concentración de sustrato y de
un inhibidor. Departamento de Bioquímica, Conjunto E, Facultad de Química,
UNAM. Tomado de:
https://bioquimexperimental.files.wordpress.com/2009/08/seccic3b3n3-sustrato-
e-inhibidor-final.pdf