Programa de Medicina

BIOQUÍMICA Y
BIOLOGÍA MOLECULAR

SESIÓN 02:
CINÉTICA ENZIMÁTICA

Dr. WILLIAM BENJAMIN RUIZ CHANG

 Sitio
catalítico

Enzima
Sustrato
4
Productos formados

1 Enzima disponible con

sitio ctalítico vacío

Sustrato es
convertido a
productos

2 Sustrato se une a
la enzima
 FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

EFECTO DE LA TEMPERATURA

❖ En nuestro organismo la temperatura optima es de 37°C promedio, cuando disminuye

o aumenta esta temperatura, la actividad enzimática disminuye, la enzima sufre
alteración en su estructura.
❖ Por debajo de la temperatura optima, la actividad enzimática disminuye, por que la
enzima se inactiva (proceso reversible) y si la temperatura aumenta por encima de la
optima la actividad enzimática también disminuye, pero en este caso enzima se
desnaturaliza (proceso irreversible).

Temperatura optima para una Temperatura optima para

típica enzima humana enzima de termófila
Actividad

0 20 40 80 100
Temperatura (Cº)
Temperatura optima para dos enzimas
 EFECTO DEL PH
❖ La mayoría de las enzimas tiene un pH el cual
varia entre 6 y 8. Sin embargo, esto depende del
tejido o del órgano donde actúen, y así determinar
el pH mas optimo para las enzimas.
❖ Los cambios de pH en el medio pueden afectar el
estado de ionización de ciertos grupos funcionales
en la enzima y también en la del sustrato.
❖ Cuando las enzimas son sometidas a pH extremos
se afecta la actividad enzimática por que las
enzimas sufren desnaturalización.

ENZIMA pH Actividad enzimática

Fosfatasa alcalina 9.5
Lipasa pancreática 8.0
Quimotripsina 8.0
Tripsina 7.9
Catalasa 7.6
Carboxipeptidasa 7.5
Amilasa salival 6.8
Fosfatasa ácida 5.0
Pepsina 1.5
14
pH
 CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO

❖ Cuando aumenta la concentración de sustrato, se produce un aumento en la velocidad

de reacción, al seguir aumentando la concentración de sustrato la velocidad de reacción
se hace constante. Por lo tanto obtiene una velocidad máxima de reacción.
❖ Esto nos sirve para obtener la velocidad máxima media, y por ende determinar el Km de
la reacción (constante de Michaelis-Menten)

Km = Afinidad

L
 Teoría de la acción enzimática

L. Michaelis M. Menten

En 1913 propusieron una ecuación de velocidad que explica el comportamiento cinético de

las enzimas. Este modelo sólo es válido cuando la concentración del sustrato es mayor
que la concentración de la enzima, y para condiciones de estado estacionario, es decir,
cuando la concentración del complejo enzima-sustrato es constante.

K1 K2
E+S ES E + P
K-1
La constante de Michaelis-Menten (símbolo Km) corresponde a la concentración de
sustrato con la cual la velocidad de reacción enzimática alcanza un valor igual a la
mitad de la velocidad máxima.
La Km nos da una idea la afinidad que
tiene el enzima por su sustrato, cuanto
mayor es Km menor es la afinidad
(predominan las formas E y S libres),
cuanto menor es Km mayor es la afinidad
(predomina la forma ES). La velocidad
máxima Vmáx estima el número de
centros activos del enzima.

K2 + K-1
Km =
K1

[S]
Vo = Vmáx
Km + [ S ]
 Cálculo de Km y Vmax por ecuación de Lineweaver-Burk

Dobles recíprocos de ecuación de Michaelis-Menten

El diagrama de Lineweaver-Burk se
emplea como herramienta gráfica
Km
para calcular los parámetros
Vmáx cinéticos de una enzima. Su utilidad
consiste en que el recíproco de la
cinética de Michaelis-Menten es
fácilmente representable y que de él
emanan mucha información de
interés.

1 Km + [ S ]
=
V0 Vmáx [ S ]

[S]
Vo = Vmáx
Km + [ S ]
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Los inhibidores enzimáticos son aquellos agentes que interfieren con la catálisis,
disminuyendo o deteniendo la reacción enzimática. Se dividen en dos grupos:
1.- INHIBICIONES REVERSIBLES 2.- INHIBICION IREVERSIBLE
✓ Inhibición no competitiva
✓ Inhibición competitiva y
✓ Inhibición acompetitiva

INHIBICIÓN COMPETITIVA
El inhibidor generalmente tiene una estructura química semejante al sustrato, por lo tanto
puede combinarse con la enzima libre, de tal modo que compite con el sustrato especifico por
el sitio catalítico. Una característica de este tipo de inhibición está dada por el hecho de que
puede ser revertida aumentando la concentración de sustrato.

Sustrato Inhibidor
Competitivo

Inhibidor Competitivo
INHIBICIÓN NO COMPETITIVA

El inhibidor no tiene una estructura semejante a

la del sustrato, por lo tanto se une a un sitio
activo diferente al sitio catalítico de la enzima, Inhibidor No competitivo
deformándola de tal manera que no puedan
formarse el complejo enzima-sustrato (ES).
No existe competencia por el sitio catalítico
entre el sustrato y el inhibidor.

Sustrato Sustrato

Inhibidor
No Competitivo
INHIBICION ACOMPETITIVA
El inhibidor no tiene ninguna semejanza estructural con el sustrato, se une a un sitio activo
de la enzima, pero no se une a la enzima sola, este se une al complejo ES, formando de
esta manera un complejo ESI.

Sustrato

Inhibidor Inhibidor Acompetitivo

Acompetitivo

INHIBICIÓN IRREVERSIBLE:

El inhibidor produce un cambio permanente en la molécula de enzima, que resulta en un

deterioro definitivo de su capacidad catalítica.
Por lo general estos inhibidores modifican químicamente residuos de aminoácidos en la
enzima que tienen funciones fundamentales en la catálisis. Ej. los gases nerviosos, como el
fluorofosfato de diisopropilo (DIFP) que reaccionan con aminoácido serina de la enzima
acetilcolinesterasa, el ácido iodoacético y iodoacetamida que reaccionan con cisteína.
 INHIBICIÓN ENZIMATICA

Medicamento Enzima inhibida Enfermedad tratada

Amburicin® Topoisomerasa 2 Cáncer (Quimioterapia)

Antabuse® Aldehido deshidrogenasa Alcoholismo

Captopril® Enzima de la síntesis de angiotensina Hipertensión

Digoxin® ATPasa de la bomba K+ Na+ Problemas cardiacos

Lipitor® 3-hidroxo-3-metil-glutaril CoA Hipercolesterolemia

Viagra® Fosfodiesterasa 5 5 Disfunción eréctil

Hycamtin® Topoisomerasa 1 Cáncer(Quimioterapia)

 REGULACION O MODULACION ENZIMATICA

REGULACION ALOSTERICA
ᴥ Los reguladores alostéricos actúan como co-sustratos, se unen a la enzima en un lugar
especifico denominado “sitio alostéricos”.
Efectores Positivos: se unen a la enzima, modificando el sitio catalítico para que se una
el sustrato y así pueda este transformarse en productos.
Efectores Negativos: se unen a la enzima, modificando la estructura del sitio catalítico de
tal manera que ya no se pueda unir al sustrato, por lo tanto no se forma los productos.

Sitio
Sitio Sitio Sitio Catalítico PRODUCTOS
SUSTRATO
Alostérico Catalítico Alostérico

ENZIMA ENZIMA

Efector Efector
Positivo Negativo

PRODUCTOS
SUSTRATO

NO FORMACIÓN DE
PRODUCTOS

ENZIMA – EFECTOR
ENZIMA – EFECTOR
NEGATIVO
POSITIVO
 REGULACION COVALENTE
QUINASA
Se produce cuando la enzima que regula
el proceso sufre estados de fosforilación, FOSFATASA
este proceso es llevado a cabo por GLUCOGENO GLUCOGENO
enzimas denominadas quinasas. Estas FOSFORILASA b
(inactiva)
FOSFORILASA a
(activa)
enzimas modifican su actividad catalítica,
a través de su unión a un grupo químico
de pequeño tamaño (grupos fosfato).
Estos grupos serán eliminados
posteriormente de la enzima reguladora
por enzimas denominadas fosfatasas.
CADENA DE GLUCOGENO (n)
MOLECULA DE
GLUCOSA

La enzima fosforilasa, se encuentra en el

músculo en reposo en un estado inactivo
de baja actividad llamada fosforilasa b, GLUCOGENO
FOSFORILASA a
la cual es convertida en fosforilasa a (activa)

activa, por adición de restos fosfato que

se unen al hidroxilo de residuos serina
en la molécula de la enzima.

GLUCOSA-1-FOSFATO CADENA DE GLUCOGENO (n-1)

REGULACION POR RETROALIMENTACION

❖ Este tipo de modulación se caracteriza por

que la enzima clave en la ruta sintética es
inhibida por los productos finales, lo que da
como resultado la interrupción del proceso
metabólico.
❖ También se denomina regulación por
retroinhibición (inhibición feed-back), es decir
el producto regula su propia síntesis.

VIA DE REUTILIZACION

ÁCIDOS
NUCLEICOS

VIA DE NOVO
 PROENZIMAS

❖ También denominados zimógenos,

se sintetizan como precursores
inactivos en un determinado tejido
u órgano.
❖ Para poder transformarse a su
forma activa (enzimas) se debe
producir una ruptura proteolítica de
un segmento de aminoácidos, este
proceso se tiene que realizar en un
tejido diferente del cual fueron
originados.

Sitio de Zimógeno Enzima

síntesis
Estómago Pepsinógeno Pepsina

Páncreas Quimotripsinógeno Quimotripsina

Páncreas Tripsinógeno Tripsina

Páncreas Procarboxipeptidasa Carboxipeptidasa

Páncreas Proelastasa Elastasa

 ISOENZIMAS ISOENZIMAS DE CREATINA FOSFOQUINASA

❖ Son enzimas que tienen diferente

secuencia de aminoácidos, es decir, son
formas moleculares diferentes. pero
catalizan la misma reacción química.
❖ Estas isoformas son codificadas por
genes diferentes y sintetizados en
tejidos u órganos diferentes. MUSCULO MUSCULO CEREBRO
ESQUELETICO CARDIACO Y RIÑON
❖ Su acción la realizan de forma
intracelular por eso cuando se
encuentran elevadas en el suero o
plasma son de gran utilidad en el ELECTROFORESIS
diagnostico de enfermedades.

DENSITOGRAMA

ISOENZIMAS DE LACTATO DESHIDROGENASA

 IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS EN EL DIAGNOSTICO

Enzima sérica Abreviatura Enfermedad

Aspartato aminotransferasa AST Enfermedades hepáticas

Isquemia miocárdica

Alanina aminotransferasa ALT Enfermedades hepáticas

Isquemia miocárdica

Amilasa Pancreatitis aguda

Creatinfosfocinasa
Colinesterasa
Fosfatasa ácida
Fosfatasa alcalina
Glutamato descarboxilasa
-Glutamil transferasa
Lipasa
CPK Isquemia miocárdica
CHE Intoxicación alcohólica aguda
ACP Carcinoma de Próstata
AP Ictericia obstructiva. Tumores
GAD Diabetes mellitus(tipo I)
GT Cirrosis alcohólica.
Pancreatitis aguda
GRACIAS