CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

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PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE BIOLOGÍA
UNIDAD ACADEMICA: Ingeniería ambiental
CURSO: Biología y laboratorios
PRACTICA Nº 04: Estructura de células procariotas

1. OBJETIVOS
Determinar el tamaño promedio de las células procariotas
Clasificar las bacterias de acuerdo con la tinción de Gram
Relacionar el procedimiento de la tinción de Gram con la composición de la pares celular bacteriana
Comprender la función de la pared celular bacteriana
Reconocer las principales formas de crecimiento de las bacterias

2. CONSULTA PREVIA
Explique la función de cada uno de los colorantes usados en la tinción de Gram
¿Cuál es el tamaño promedio de las células procariotas?
¿Cuáles con las formas de crecimiento más comunes que asumen las bacterias?
¿Cuál es la composición del heteropolisacárido estructural implicado en la pared celular bacteriana?
De acuerdo con el porcentaje de mureína en la pared celular bacteriana, ¿Cómo se explica la clasificación de
las bacterias en las bacterias Gram + y Gram -¿
Defina antibiótico
¿Qué bacterias son más susceptibles a antibióticos como los betalactámicos cuyo blanco de acción es la pared
celular?
¿De qué manera actúa el antibiótico Rifampicina?
Porque razón las bacterias Gram + son más resistentes a los estreses ambientales?
Que son los micoplasmas y fitoplasmas?
¿Qué es un organismo gram variable?

3. FUNDAMENTO TEORICO
Debido a su tamaño, la estructura interna de las células procariotas (pro que significa “antes” y Karyon que
significa “núcleo”), conocidas ampliamente como BACTERIAS, es decir de observar a través del microscopio
óptico. De hecho para identificar su forma y tamaño, se debe recurrir a un tipo especial de tinción (Coloración
Gram) que refleja de alguna manera, la recomposición química de su estructura externa.

Una bacteria es un microorganismo unicelular que a diferencia de las células eucariotas (vegetales, animales,
protistas y hongos) carece de órganos intracelulares recubiertos de membrana, como núcleo, aparato de Golgi,
retículo endoplásmico o mitocondrias. Esto significa, que las actividades fundamentales de tipo metabólico y
biosintético de la bacteria se efectúan dentro del citoplasma de la cubierta celular. Las bacterias difieren de las
células eucariotas en general por la estructura y composición de su envoltura celular y por sus actividades
metabólicas. Teniendo en cuanta que muchas bacterias son patógenas, estas diferencias entre células
procariotas y eucariotas son importantes porque permiten encontrar blancos únicos para la acción de antibiótico
y ellos aseguran que dichos antibióticos tengan toxicidad selectiva.

Las bacterias son de diversos tamaños y formas; van desde las espiroquetas que pueden tener hasta 250
micras de longitud hasta los micoplasmas esféricos que tienen 0.15 micras y difícilmente don observables con el
microscopio óptico. La mayor parte de las bacterias corresponden a bacilos (en forma de bastón), cocos

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(esferas) y vibrios (en forma de comas). Cuando los bacilos o cocos forman cadena, se llaman estreptobacilos o
estreptococos (del griego streptos, que significa “cadena torcida”). Los grupos de cocos (en forma de racimos)
reciben el nombre estafilococos y los pares se conocen como diplococos. Algunas bacterias adoptan tamaños o
formas variables al envejecer o si el medio ambiente se modifica. Si una bacteria adopta diferentes formas se
dice que es pleomórfica. Algunas bacterias del género Actinomyces poseen apariencia superficial de hongos y
forman colonias similares a mohos, otras, no tiene pared celular y se conocen como micoplasmas y fitoplasmas
y se considera que están más cerca de los virus que los procariotes.

La mayor parte de las bacterias se identifican en forma inicial haciéndolas crecer en cultivo puro en un medio de
cultivo determinado y después se examina la forma y el color de las mismas mediante la coloración de una
muestra del cultivo en un portaobjetos y su tinción. En casi todos los casos el procedimiento inicial clave es la
tinción de Gram. Este procedimiento se debe al patólogo danés Christian Gram en 1880 y permite diferenciar
los dos principales grupos de bacterias, cuyas paredes celulares son muy distintas entre sí.

Figura 1. Principales formas de crecimiento de bacterias.

4. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Se debe listar los equipos, materiales y reactivos requeridos para el desarrollo de la práctica.

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos

Mechero Biológico: Solución salina
Pinza de madera Cristal violeta (Violeta de
Cultivo de bacterias Gram Genciana)
positivas (+) y Gram Solución Yodo (Lugol) de
negativas (-) Gram

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Solución acetona: alcohol

Vidriería:
(para decolorar)
Laminas Porta y Safranina (Fucsina)
Cubreobjetos
Aza bacteriológica

5. PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
1. En una gota de solución salina puesta sobre un portaobjeto, realice un frotis con el asa bacteriológica con la
cual ha obtenido las bacterias de manera aséptica a partir del cultico de estas.
2. Deje secar el frotis y fíjelo a la llama con calor moderado (pase varias veces el portaobjeto sobre la llama de
manera rápida sin dejar ebullir la muestra)
3. Cubra el frotis con cristal violeta por 1 minuto
4. Descarte el exceso de colorante y lave con agua corriente (de la llave)
5. Aplique el Yodo de Gram or 1 minuto. Lave con agua de la llave
6. Agregue la solución decolorante (acetona: alcohol) con el portaobjetos inclinado. Tan pronto observe que ya
no se desprende más color, lave con agua corriente para la acción decolorante de la solución.
7. Paso final: cubra el frotis con safranina por 20 segundos. Lave el exceso de colorante con agua corriente y
deje secar al aire
8. Observe al microscopio. Las bacterias Gram + se observan de color azul o morado y las Gram – de color
rojizo o café.

9. NOTA: Para observar las bacterias debe usar el objetivo de inmersión (100X) así que por favor recuerde el
procedimiento para enfocar y el uso del aceite de inmersión. Frente a cualquier duda consulte con su
profesor o con el asistente de laboratorio.

6. BIBLIOGRAFIA
Alberts, B., Bray , D., Hopkin, K., & et all. (2006). INTRODUCCIÓN A LA BIOLOGIA CELULAR (Segunda ed.).
España: Medica PanamericanaS.A.

Campbell, N., & Reece, J. (2007). BIOLOGIA (Septima ed.). Madrid, España: Medica Panamericana S.A.

Curtis, Barnes, Schnek, & Flores. (2006). INVITACIÓN A LA BIOLOGIA (Sexta ed.). Argentina: Medica
panamericana.

Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGIA (Novena ed.). Argentina.
Editorial: Medica Panamericana.

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