Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing.

Ambiental - UNSA 2022

Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

SESION 08
IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS
Se llama microorganismos o microbios a los seres vivos que debido a sus reducidas
dimensiones solo son visibles con la ayuda del microscopio óptico, e incluso en algunas
ocasiones, es necesario recurrir al microscopio electrónico para su observación. Pero
pese a estar incluidos dentro de una misma denominación, existen grandes diferencias
en cuanto a su tamaño. Por ello clasificar a esta gran diversidad de organismos por su
tamaño podría parecer artificial y carente de criterio científico, si el poseer estas
dimensiones tan reducidas no implicaría toda una serie de características funcionales,
comunes a todos los microorganismos.
Las Cianobacterias son organismos procariontes unicelulares y coloniales, con pared
celular a base de celulosa. En estas algas el color que presentan es debido al predominio
de la clorofila "a" que es de color verde brillante, la ficocianina que es de color azul y la
ficoeritrina que es de color rojo, de ahí el color verde azulado ó rojizo que presentan
estas algas. Son de aspecto mucilaginoso y resbaladizo, tienen la capacidad de fijar el
nitrógeno atmosférico y algunas se aprovechan en la alimentación humana; como el
Nostoc.
Los Protozoarios son organismos eucariontes más primitivos, el carácter más
sobresaliente de los miembros de este grupo es que todos son organismos constituidos
de una sola célula, casi todos son microscópicos, su nutrición es heterótrofa (holozoicos,
saprobióticos o parásitos). Su reproducción es asexual. Ej. Paramecium.

OBJETIVOS
Observar y describir la morfología de las Bacterias
Observar y describir la morfología de los Cianobacterias
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

MATERIALES
De laboratorio
Microscopio Óptico Compuesto
Laminas Portaobjetos
Laminillas Cubreobjetos
Laminillas permanentes de Bacilos Gram negativos
Laminillas permanentes de Staphylococcus Gram positivos
Estiletes
Goteros
Bagueta
Placas Petri
Lunas de Reloj
Palillo de dientes
Soluciones y Reactivos
Aceite de Inmersión
Alcohol Isopropílico
Biológico
Nostoc “Murmunta”

PROCEDIMIENTO
Primero: Observación de Cianobacterias: Nostoc
a) Colocar unos cuantos granos de “Murmunta” (Nostoc) en un vaso con agua
durante unas 48 horas, dejando hidratar la muestra
b) Luego en el laboratorio tomar una colonia pequeña de Nostoc, este se
desmenuza en una luna de reloj con unas gotas de agua corriente.
c) Con la ayuda de un gotero o bagueta tomar una gota o dos de la luna de reloj y
colocarla en una lámina portaobjetos.
d) Cubrir la muestra con una laminilla cubreobjetos.
e) Observar al microscopio con objetivo de mediano aumento mayor aumento.
f) Describir, esquematizar y rotular sus observaciones
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

Observación: Con objetivo de mediano o mayor aumento se observan células ovoidales, formando
cadenas lineales, en estas se distinguen células de mayor tamaño denominado heterocistos.

Segundo: Observación de bacterias en láminas permanentes con Coloración

Gram:
a) Observar láminas permanentes de bacilos y Staphylococcus
b) Rotular sus observaciones

Bacilos Gram negativos

Staphylococcus Gram positivos

Observación: Con objetivo de mayor aumento se observan los Staphylococcus Gram (+) esféricos
formando racimos, y los bacilos Gram (-) de forma cilíndrica.
 Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

Tercero: Complementa las experiencias, comentando videos, tutoriales o

información de la red, con relacion a la identificacion de microorganismos (bacterias,
microalgas, y protozoarios) benéficos en la Biorremediación de agua y suelos.
Explicar los mecanismos de actuación y estrategias celulares relacionadas.

Estructura de un protozoario

Biorremediación de los suelos

La biorremediación emplea los procesos metabólicos de los
microorganismos para alterar la estructura química de los contaminantes,
de esta forma se reduce la concentración o toxicidad de los
contaminantes. La característica más importante de la biorremediación es
que los contaminantes no se destruyen, sino que por la actividad
microbiana se pueden transformar en otros compuestos diferentes como
dióxido de carbono, iones de cloruro, agua y biomasa.
La conversión completa del carbono orgánico a carbono inorgánica, se
define como biomineralización, Si la reacción es incompleta y produce
compuestos secundarios, este proceso se llama biotransformación. La
conservación se da por los microorganismos, estos utilizan rutas
metabólicas enzimáticas, que atacan a las moléculas orgánicas en
solución. Todas las reacciones enzimáticas ocurren en soluciones
acuosas. Las enzimas capturan átomos de carbono individuales de
moléculas contaminantes orgánicas que las usan como fuente de energía
y para construir nuevas células.

La biorremediación ofrece muchas ventajas sobre los tratamientos físicos,

químicos, utilizados para tratar aguas y suelo contaminado. La
biorremediación tiene como objetivo degradar y detoxificar
contaminantes peligrosos, mientras que otras tecnologías solo los
transfieren a otra localización.
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

La biorremediación tendrá un papel principal en la recuperación de

tierras afectadas por contaminación difusa y puntual. Por ejemplo, por
exceso de fertilizantes nitrogenados y fosforados, o por residuos de
agroquímicos.
En definitiva, la biología y la biorremediación tendrán un rol principal
en la promoción de la prestación de servicios ecosistémicos por los
suelos, sin duda una de las demandas del milenio.

Biorremediación de compuestos aromáticos

Los microorganismos han involucrado sistemas enzimáticos catabólicos
para el metabolismo de compuestos aromáticos, que como se sabe son
dañinos y cancerígenos para la salud del ser humano. En la oxidación de
compuestos aromáticos, el oxígeno es la llave para la hidroxilación y
fusión del anillo aromático.
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

La biodegradación de una molécula aromática sigue dos pasos: la

activación del anillo y el rompimiento del anillo, esto es, di-hidritación
del núcleo aromático. Este paso es llevado a cabo por enzimas conocidas
como oxigenadas. Los hidrodioles después se oxidan a derivados di-
hidroxilados como los catecoles, que son los precursores del
rompimiento del anillo. El fenol puede ser utilizado como fuente e
carbono por la vía catecol por algunas bacterias como Pseudomonas
putida, algunas levaduras y otros organismos.

Las microalgas en la biorremediación de aguas

contaminadas
El grupo de biotecnología de microalgas ha tenido algunas
contribuciones relacionadas con el tratamiento terciario de aguas
residuales porcinas, en los que ha explotado el potencial de las
cianobacterias phormidium sp, Y Spirulina máxima. Los resultados que
se obtuvieron indicaron que el crecimiento de las cianobacterias
disminuyo la demanda química de oxígeno de los residuales dando como
resultado un efluente terciario cuya calidad hace posible su vertimiento
a cuerpos de agua o también estas aguas ya que se pueden utilizan en
actividades de regadío y de limpieza.

Algunos autores han propuesto un sistema integral a nivel industrial para

el tratamiento terciario de aguas residuales utilizando microalgas, donde
la biomasa obtenida sirva como alimento de peces.

Las microalgas y cianobacterias proveen carbono reducido y nitrógeno

al microbiota presente en los ecosistemas acuáticos, lo que incrementa
el potencial de degradación y eliminación de contaminantes. E n adición,
ciertas algas, cianobacterias y bacterias fotosintéticas son útiles como
indicadores de contaminación ambiental y, por lo tanto, tienen
aplicación en pruebas de toxicidad.

Rol de las actinobacterias en procesos de

biorremediación
Las actinobacterias poseen diversas propiedades que las hacen buenas
candidatas para su aplicación en procesos de biorremediación. Esto se
debe principalmente a que producen enzimas extracelulares que
degradan una gran variedad de compuestos orgánicos complejos. Por una
parte, las pertenecientes al género Streptomyces pueden ser adecuadas
para la inoculación de suelos como consecuencia de su crecimiento
filamentoso, el cual favorece la colonización de las partículas del suelo.

Asimismo, se demostró que especies del género Strptomyces son

dominantes en suelos contaminados con metales pesados, en
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

comparación con suelos prístinos en donde las actinobacterias

constituían alrededor del 20% de la población microbiana, indicando que
estos microorganismos podrían desarrollar estrategias especiales para
sobrevivir en diferentes concentraciones de metales pesados.

Biorremediación de plaguicidas por actinobacterias

Diferentes autores han demostrado la capacidad de las actinobacterias
para remover distintos tipos de plaguicidas; incluso en algunos casos se
ha comprobado la degradación, mediante oxidación, de clorinación y de
alquilación, de diversos plaguicidas, como alaclor, clordano,
clorpirifoss, deltrametrina, diuron, lindano y metoxocloro por
actinobacterias.

Entre los géneros de actinobacterias degradadoras de plaguicidas se han

descripto Arthrobacter, Brevibacterium, Corynebacterium, Nocardia,
Rhodococus y Streptomyces, entre otros.
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

Imágenes de Arthrobacter, Brevibacterium, Corynebacterium,

Nocardia, Rhodococus y Streptomyces respectivamente.

Tratamientos de aguas residuales industriales.

El tratamiento de las aguas residuales industriales se complica por la
presencia de varios contaminantes orgánicos e inorgánicos diferentes,
muchos de los cuales no son fácilmente susceptibles a la biodegradación.

Las tecnologías para el tratamiento de aguas residuales industriales se

pueden dividir en tres categorías: métodos físicos, métodos químicos y
métodos biológicos.

Los métodos físicos incluyen sedimentación, flotación, filtración,

extracción, intercambio iónico, absorción y otros procesos que logran
eliminación sustancias disueltas y no disueltas sin cambiar
necesariamente sus estructuras químicas.
Los métodos químicos incluyen precipitación química, oxidación
química o reducción, la formación de un gas insoluble, seguido de un
stripping y otras reacciones químicas que implican el intercambio o
compartiendo electrones entre átomos.
Los métodos biológicos son aquellos que involucran organismos vivos
usando sustancias orgánicas o en algunos casos sustancias inorgánicas ,
que son transformados en sustancias no tóxicas para el medio ambiente.

CONCLUSIONES
• En este reporte se pudo observar y describir adecuadamente la morfología
de las cianobacterias, como pudimos ver en el caso del Nostoc. Para
realizar la observación de este tuvimos que seguir una serie de pasos antes
de colocar la muestra en el microscopio óptico, siguiendo todos estos pasos
la muestra, al verla en el microscopio se pueda percibir claramente. Con
esto podemos entender que seguir el procedimiento adecuado de la
preparación de la muestra es muy importante, ya que de esta forma no nos
perderemos de nada al observar. Se utilizo un aumento de mediano o
mayor aumento, con esto pudimos ver células ovoidales y muchas cadenas
lineales, donde las más grandes son los heterocistes que al verlo de cerca
presentan dos puntos a los lados que vendrían hacer los puntos polares.
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

También se pudo determinar con un poco de bibliografía que el Nostoc

presenta una morfología filamentosa heterositas.
• En este reporte se pudo observar y describir adecuadamente la morfología
de las bacterias, como vimos en la segunda experimentación donde
observamos laminas permanentes de bacilos y staphylococcus. Aquí
pudimos notar como los bacilos que son gram negativos presentan una
coloración roja de forma cilíndrica y que presentaba una capa gruesa de
peptidoglicano; los staphylococcus que son gram positivos presento una
coloración violeta en forma de racimos y que presentaba una delgada capa
doble membrana.

CUESTIONARIO
1. Cómo se llaman los microorganismos que observaste en el sarro dental
Placa Bacteriana: Streptococcus sanguis y Actinomyces viscosus
Estos pertenecen al reino BACTERIA ya que son células EUCARIOTAS que
otro reino está integrado por células procariotas REINO MONERA O
PROCARIOTA.
2. ¿Cuáles son las características estructurales que diferencian a las bacterias
gram positivas de las gram negativas?

Comparación de las envolturas celulares bacterianas

Diferencias entre las bacterias “Gram +” y “Gram –”

Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

Diagrama de la pared bacteriana Gram positiva y negativa.

3. Explique algunos ejemplos de intervención favorable de las bacterias en el

ambiente
• Las bacterias son de gran utilidad en la biodegradación de diferentes elementos
que hacen daño al suelo, tierra o agua. Por esto es que se usan para realizar la
biorremediación de suelo, agua o tierra. Hay varios estudios y tesis acerca de
esto, en nuestra universidad se realizaron diferentes estudios con el estudio de
las micro algas, bacterias y hongos para biorremediar diferentes zonas de nuestra
ciudad. Como que se planteó el estudio de usar hongos para la biorremediación
de un suelo contaminado por metales pesados, en la tesis “Determinación De La
Biorremoción De Plomo (Pb+2) Mediante Hongos Y Microalgas Nativas
Aisladas De Efluentes Industriales Empacadas En Un Sistema En Serie De
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

Agitación Continua” se pudo determinar que en este caso los basidiomicetos

desarrollaron el sistema de quelación o inmovilización de los metales, y esto
llevaba al hecho de formar el oxalato. La producción del ácido oxálico y otros
agentes quelantes como los ácidos orgánicos poli carboxílicos y acido crítico,
esto se da durante la degradación de la lignina. El ácido oxálico inmoviliza iones
metálicos solubles a compuestos de oxalato insoluble, lo cual disminuía la
disponibilidad que estos metales le hagan daño a los hongos y por esto también
aumenta su tolerancia. En algunos estudios se ha comprobado que la producción
de ácido oxálico por parte de cepas de hongos de la pudrición café, lograron
precipitar el cobre en la forma insoluble de oxalato de cobre. Los cristales de
oxalato de cobre se observaron alrededor de la hifa, de un hongo que se sometió
a crecimiento en madera pretratada con un preservante a base de cobre. Los
oxalatos de metal se pueden también formar con el Cr, Cd, Co, Cu, Mn, Sr, y Zn.

• Estos mismos hongos producen una envoltura hifal extracelular compuesta

principalmente por polisacáridos (B1-3 y B1-6 glucanos); que atrapan los iones
metálicos, ofreciendo así una primera barrera contra el metal. A nivel genético
se reportan mecanismos para evitar lesiones premutagénicas en él ADN,
especialmente bajo la acción del cromo; entre ellas están la reparación por
escisión de nucleótidos (NER) que se encarga de la remoción de lesiones a nivel
estructural y en genes encargados de su expresión. Como este estudia hay varios
más, con esto podemos ver que los microorganismos tienen una gran capacidad
para recuperar los suelos contaminados desde metales pesados hasta metales
radiactivos como el uranio, ya que en un estudio comprobado de España se pudo
determinar que había bacterias capases de degradar este metal radiactivo que no
suele ser fácil de tratar.

• La biorremediación con microorganismos tiene un gran potencial y esta nos abre

muchas puertas para mejorar nuestra situación actual, y recuperar aquellas zonas
que tal vez se daban como perdidas, siendo formas mucho más agradables con el
medio ambiente y pueden llegar a ser más eficientes y económicas.
4. ¿Por qué se consideran a los protozoarios como indicadores de aguas
contaminadas?
• Entre las 21.000 especies de protozoos de vida libre es evidente, por tanto, que
existen variados tipos fisiológicos que exigen variadas condiciones ecológicas
para su existencia. Esto junto con su capacidad de adaptación en el transcurso
del tiempo, su distribución acuática amplia, y su capacidad de alcanzar una
alta densidad de población en poco tiempo, convierte a los protozoos en
importantes indicadores de las condiciones del agua en un momento
determinado, generando interesantes aportaciones en le prevención de
problemas en plantas de tratamiento por cambios en las condiciones de
funcionamiento, ya que estos organismos pueden ser sensibles a cambios
bruscos de parámetros que puedan tardar en detectarse. El uso de protozoos
(ciliados, amebas) como bioindicadores permite la detección de aquella
contaminación intermitente como las emisiones nocturnas y situaciones a largo
plazo. La presencia ó ausencia de conjuntos de especies sirve como ‘proxy’ para
detectar muchas sustancias, ya que sus células responden a esos contaminantes,
difícilmente analizable por algún laboratorio químico. Además, los protozoos
son bioindicadores ideales ya que estos grupos están compuestos por especies de
una distribución mayoritariamente cosmopolita. Por lo tanto, el sistema causa-
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

efecto de estas especies indicadoras tiene una aplicabilidad mundial, ósea que
pueden ser utilizados en cualquier parte del mundo. Debido a que los conjuntos
de especies de protozoos difieren entre los distintos sistemas acuáticos, también
sirven como indicadores del estado de un ecosistema. Los grupos de ciliados
pueden influir en el estado funcional de un sistema, reflejando problemas
ambientales tales como la degradación de la calidad del agua.

• En consecuencia, la composición de las especies indicadoras sirve como 'proxy'

para lograr las reducciones necesarias de los contaminantes, así como los
objetivos de restauración ecológica. En consecuencia, la composición de las
especies indicadoras sirve como 'proxy' para lograr las reducciones necesarias de
los contaminantes, así como los objetivos de restauración ecológica.

5. ¿Qué importancia tienen las algas y hongos en la naturaleza?

• Las algas están en el planeta desde hace cuatro mil millones de años, mucho antes
de que hubiese vida humana. Además de ser responsables de oxigenar la tierra
son fototrópicos, es decir, capaces de hacer fotosíntesis o convertir energía solar
en energía química. Las algas, al igual que las plantas, son organismos
autótrofos, es decir, capaces elaborar su propio alimento a partir de sustancias
inorgánicas como el sol o el agua.
• Los hongos ayudan a reciclar la materia orgánica y nutrientes, descomponiendo
la materia en el ambiente, y liberan estas sustancias que van a emplear otros
organismos. Gracias a los hongos la materia orgánica se descompone y se
incorpora al suelo de nuevo, de manera que puede ser absorbida por las plantas
y animales en forma de nutrientes

BIBLIOGRAFÍA
• Procariotas.2. (s/f). Recuperado el 25 de julio del 2022, de
Scribd.com website:
https://es.scribd.com/presentation/379923683/3-Procariotas-2

• de Salamone, L. B. M. B. I. G. (2018). Biorremediacion de

los recursos naturales. Recupperado el 25 de julio del 2022,
de Gob.ar website:
https://inta.gob.ar/sites/default/files/libro_biorremediacion_de
_los_recursos_naturales_1.pdf

• Dr Peter E. Schmid, D. J. M. S.-A. (s/f). Protozoos como

bioindicadores. Recuperado el 25 de julio del 2022, de
Pjschmid.com website:
https://pjschmid.com/es/bioindicadores.html

• MICROORGANISMOS DE LA PLACA DENTAL

RELACIONADOS CON LA ETIOLOG�A DE LA
PERIODONTITIS. (s/f). Recuperado el 25 de julio del
Manual de Laboratorio de Biología Ambiental para alumnos de Ing. Ambiental - UNSA 2022
Dr. Armando Arenazas Rodríguez; Dr. E. Walter Colque Rondón; MSc. Daniel Luque Z.

2022, de Actaodontologica.com website:

https://www.actaodontologica.com/ediciones/2004/3/microor
ganismos_placa_dental_etiologia_periodontitis.asp

• DIFERENCIANDO BACTERIAS GRAM+ y GRAM-.

Recuperado el 25 de julio del 2022, de
Seleccionesavicolas.com website:
https://seleccionesavicolas.com/pdf-files/2012/2/6536-
diferenciando-bacterias-gran-y-gram.pdf

• Pírez., M. C. (s/f). MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA

BACTERIANA. Recuperado el 25 de julio del 2022, de
Edu.uy website:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%209.pdf

• Protozoos - Enciclopedia Medioambiental. (2018, marzo 7).

Recuperado el 25 de julio del 2022, de Ambientum.com
website:
https://www.ambientum.com/enciclopedia_medioambiental/a
guas/protozoos.asp

• Roberto. (2019, noviembre 24). Reino Procariota: [Concepto,

Ejemplos, Tipos y Características]. Recuperado el 25 de
julio del 2022, de Energiatoday.com website:
https://energiatoday.com/reinos-de-la-naturaleza/procariota/

• Rodríguez, N. Y. M. (s/f). Diferenciando Bacterias Gram

Positivo (+) y Gram Negativo (-) Mediante Tinción de Gram.
Recuperado el 25 de julio del 2022, de 248.48.64 website:
http://132.248.48.64/repositorio/moodle/pluginfile.php/1729/
mod_resource/content/3/contenido/index.html