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1.

Fundamento teórico
Observación de organismos microscópicos, ya sea fresco u seco permite la identificación
mediantes sus características ya sea procariota o eucariota, para ello usaremos como
muestra agua estancada sarro y levadura las cuáles serán las más apropiadas para esta
ocasión.

La tinción de Gram: también conocida como coloración de Gram, es una técnica de


laboratorio que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiológicos de las bacterias.
Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram
era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de
bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. La prueba resultó todo un éxito y
pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino
también para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar
el antibiótico más adecuado para tratarla.

La técnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen
que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes tiñen la pared de
las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del colorante.
Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya
ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de bacterias Gram
positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificación de la amplia
mayoría de las bacterias. Cada grupo responde de forma diferente a cada tipo de
antibióticos, por eso es una técnica útil para seleccionar el fármaco antimicrobiano inicial
ante una infección. Hay que tener en cuenta que en ciertas situaciones es importante
iniciar un tratamiento antibiótico adecuado de forma precoz, por eso la tinción de Gram
se pide de urgencia en muchas ocasiones.

2. Objetivos
-saber diferenciar entre celular eucariotas y procariotas a través del microscopio
-poder saber las características de la tinción de gram

3. Materiales
 Microscopio Laminillas cubre objetos
 Laminillas porta objetos 250ml de agua estancada

 Levadura en polvo Gradilla para colorear

 Alcohol Azul de metileno

 Violeta de genciana Palitos mondadientes


4. Procedimiento

I) Preparados en fresco

a) observación de organismos unicelulares eucariotas(levaduras)

en un tubo de ensayo colocar unos gramos de levadura fresca o seca activa,


agregue agua tibia y agite hasta tener una solución muy diluida; deposite una
gota sobre sobre el portaobjetos, ponga el cubreobjetos y observe al
microscopio con los objetivos 10x 40x 100x

B)observación de organismos unicelulares eucariotas(protozoos de vida libre)

En un portaobjetos coloque una gota de agua estancada, cubrirla con un


cubreobjetos y observar al microscopio, enfoque la muestra con el objetivo
10x 40x

II) preparados en seco

Observación de organismos procariontes en sarro dentario

Con un mondadientes tomar una pequeña porción de sarro dental y


disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos. Extender la muestra en
el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis. Dejar secar y fijar con
calor. Realiza una tinción compuesta o diferencial (tinción Gram) por dos o
tres minuto .

III) tinción compuesta (tinción Gram)

Teñir con cristal violeta por 1 minuto, lavar con abundante agua el exceso de
colorante, cubrir con lugol por 1 minuto, lavar con agua el exceso de este,
decolorar con alcohol-acetona hasta que la preparación pierda el color, lavar
con abundante agua para eliminar el resto de disolvente y teñir con safranina
por 1 minuto,lavar con agua para eliminar el colorante de contraste, secar el
preparado y examinarlo en el microscopio
5. Interpretación
I) Preparados en fresco

A) Observación de organismos unicelulares eucariotas (levaduras)

Los objetivos que se utilizan 10X,40X y 100X. en esta muestra que consta de
levaduras, azúcar y agua tibia con 8 horas previas antes de preparación. Al
sacar una pequeña muestra y verla en el microscopio se observa que se
empieza a dividir la cual se realiza por gemación

B) observación de organismos unicelulares eucariotas (protozoos de vida


libre)

Podemos identificar microorganismos móviles en muy pequeña cantidad. Los


microorganismos observados son paramecios que son protozoos ciliados con
forma ovalada, habilidades en aguas estancadas como charcos o estanques.
II) Preparados en seco

A)observación de organismo procariontes en sarro dentario

El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el


esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por restos proteicos,
sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora
bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
condiciones que se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen
abundar bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de
morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

Gram positivas: o bacterias Gram-positivas, aquellas bacterias que se tiñen


de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram.1 Esta característica química
está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que
refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales
grupos de bacterias, y cuando se tratan como taxón se utiliza también el
nombre de Posibacteria.2 Las restantes son las bacterias gramnegativas.

La envoltura celular de las bacterias grampositivas comprende la membrana


citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de
peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la
membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa
de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la
responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram.
Gram negativas: aquellas que no se tiñen de azul oscuro o de violeta por la
tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue: de ahí el nombre de
"gramnegativas" o también "Gram-negativas".1 Esta característica está
íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la envoltura celular,
pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática),
lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los
principales supergrupos de bacterias, y cuando se tratan como taxón se
utiliza también el nombre de Negibacteria2 o Didermata. Las restantes son
las bacterias grampositivas.

Las bacterias gramnegativas presentan dos membranas lipídicas entre las que
se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las
bacterias grampositivas presentan solo una membrana lipídica y la pared de
peptidoglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el
colorante durante la tinción de Gram.

6. Conclusiones
 tras realizar la práctica y poder ver al microscopio la muestra
obtenida, observamos que presenta en el sarro dental se
encontraba un tipo de bacteria con forma de esfera, los cocos
 los protozoos son los animales más sencillos ya que están
compuestos de una sola célula y mediante esa única célula
realizan todas las funciones de protozoos que con muchas
especies , viven como parásitos

7. Bibliografía
http://franklinnroosevelt.blogspot.com/2016/04/bacteria-de-sarro-dental.html
https://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399
https://okdiario.com/curiosidades/bacterias-gram-positivas-697551
https://www.google.com/search?
biw=1366&bih=625&tbm=isch&sa=1&ei=C14oXcrkL5iztAbl3KPoBw&q=gram+positivas&oq
=gram+p&gs_l=img.3.0.0j0i67j0j0i10j0i67j0l5.780483.783121..784257...0.0..0.206.1116.0j
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