CÓDIGO: FO-DOC-112

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN:

PÁGINA: 1 de 6
01
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

UNIDAD
ACADEMICA: PROGRAMA DE ENFERMERIA

CURSO: MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

PRACTICA Nº 5: MÉTODOS DE SIEMBRA - ANTIBIOGRAMA

OBJETIVOS
Desarrollar la habilidad manual en la siembra de los medios de cultivo mediante diferentes
técnicas.
Seleccionar y aplicar antibióticos para el antibiograma de acuerdo a las características e
identificación de los microorganismos.
Afianzar la definición de resistencia y sensibilidad a antibióticos a través de la lectura de los
antibiogramas.
CONSULTA PREVIA
1. Dibuje las técnicas de siembra y cuál es la finalidad de cada una de las técnicas
existentes de siembra.
2. Investigue y dibuje las diferentes características macroscópicas de las colonias de
microorganismos.
3. En qué consisten los métodos directo e indirecto de siembra para antibiogramas?
4. ¿Qué significa zona de inhibición en un antibiograma?
5. Realice un cuadro donde indique los antibióticos que pudo utilizar para Gram positivos
y los antibióticos que pudo utilizar para Gram negativos.
6. Anexe a la guía la tabla de kirby bauer

FUNDAMENTO TEORICO

El proceso de colocar las bacterias u otros microorganismos en medios de cultivo, recibe el

nombre de Siembra, esta operación la podemos realizar a partir de muestras biológicas
(orina, secreción), de análisis para control de calidad (alimentos, aguas, cosméticos,
ELABORADO POR: CARGO: FECHA:
 CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN:
PÁGINA: 2 de 6
01
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

medicamentos), procedentes de muestras ambientales (agua, suelo, etc), o de un cultivo

microbiano a otro, si la realizamos de un cultivo a otros lo denominados subcultivo o repique.
Para el estudio de las bacterias y otros microorganismos cultivables, es necesario además,
conocer y reconocer la morfología microscópica y macroscópica a partir de su crecimiento en
medios de cultivo.
El tratamiento adecuado de un proceso infeccioso está relacionado con tres premisas
esenciales:
El foco o sitio de localización de la infección
El conocimiento adecuado del agente etiológico
La susceptibilidad de tal agente a las drogas antimicrobianas que pueden alcanzar niveles
terapéuticas en el sitio de infección.
Las dos últimas premisas deben ser desarrolladas por el laboratorio de microbiología, el cual
debe proveer información útil a tiempo para que el proceso infeccioso no siga evolucionando
con riesgo para la vida del paciente.
El antibiograma por el método de difusión en agar es una prueba en la que se enfrenta la
bacteria inoculada sobre la superficie de un medio de agar con una solución antibiótica
absorbida en discos de papel de filtro. Este método está estandarizado y los halos de
inhibición han sido obtenidos correlacionándolos con las CMI y aparecen en unas tablas.
Para conocer la sensibilidad de una bacteria a distintos antibióticos se siembra una muestra
del cultivo puro en un medio en el que conocemos la capacidad de difusión de cada una de
las sustancias a testar. Este es el medio de Mueller Hilton.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS

Equipos Materiales Sustancias y/o Reactivos

Asa recta y curva por grupo Tres (03) Medios de cultivos sólidos de Agar Nutritivo en caja
por grupo y un medio de cultivo Mueller Hilton por grupo.
pinzas
Dos medios líquidos BHI por grupo
Gasa
Incubadora 37° C Sensidiscos para Gram positivos y Gram Negativos
Algodón
Mecheros Alcohol al 70%
Hisopos estériles por grupo
Solución Salina
Papel absorbente
Colorantes de Gram
Cepas bacterianas Gram+ y
Gram-. Hipoclorito de Sodio al 0,5%

ELABORADO POR: CARGO: FECHA:

 CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN:
PÁGINA: 3 de 6
01
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Estudiantes:
Láminas portaobjetos
Marcador de vidrio
Regla

PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA
Desinfectar el área de trabajo, encender el mechero.
Recuerde marcar las cajas y tubos de siembra

METODOS DE SIEMBRA

Siembra En Caldo: (Realizarla con la cepa provista por el docente)

La siembra de los medios en tubo requieren cuidado, un solo organismo contaminante del
medio ambiente puede superar en crecimiento al microorganismo de interés, se debe tener
precauciones como:

Mantener inclinado el tubo que contiene el medio de cultivo, los tapones se deben mantener
en la mano contraria a aquella que sostiene el tubo, sosteniéndolos con el dedo meñique y
anular, nunca colocarlos encima de la mesa, esterilizar siempre el asa y dejarla enfriar, no
tocar las paredes del tubo cuando se va a hacer la siembra.
1. Tomar un asa redonda y esterilizarla a la llama
2. Mezclar la muestra y tomar un asa cargada.
3. Destapar el tubo con el caldo flamear la boquilla de este e introducir la muestra del
asa, dando movimientos de rotación a esta.
4. Esterilizar la boquilla del tubo y tapar.
5. Esterilizar el asa.
6. Incube el tubo a 37ºC por 24 horas y observe el crecimiento. Formación de película,
precipitado o enturbiamiento = positivo

ELABORADO POR: CARGO: FECHA:

 CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN:
PÁGINA: 4 de 6
01
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Diferentes clases de siembra en agar – caja:

Agotamiento: (Realizarla con la cepa provista por el docente)
Realice la descripción morfológica de la colonia (tamaño, forma, borde, elevación,
superficie, consistencia, aspecto, pigmento y hemolisis), recuerde que las observaciones
deben hacerse en colonias aisladas, no en zonas con crecimiento abundante de la bacteria,
caracterice un número representativo de colonia y concluya al respecto. Una vez finalizada la
caracterización proceda a realizar la caracterización de morfología y agrupación bacteriana
para ello realice un frotis y coloración de Gram.

Se trata de un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del inóculo

sobre un medio sólido contenido en una placa de Petri. El objetivo es obtener, a partir de un
elevado número de bacterias, un número reducido de ellas distribuidas individualmente sobre
la superficie de la placa. Cada una de estas bacterias originará una colonia. Procedimiento:
Esterilizar el asa curva y enfriarla en las proximidades del mechero.
Tomar el inoculo, igual que en la siembra en caldo.
Transferir el inoculo a un área pequeña de la superficie de la placa, próxima al borde.
Extenderlo formando estrías muy juntas sobre la superficie de una porción pequeña de la
placa.
Flamear el asa y enfriarla. Rozar una vez con el asa las estrías sembradas la primera vez y
realizar sobre una porción virgen de la placa una segunda tanda de estrías que no toque la
primera.
Flamear y enfriar el asa. Repetir la operación descrita en el apartado anterior, pero rozando
al empezar la segunda tanda de estrías.
Flamear el asa y cerrar la placa e incubar a 37ºC, 24 horas y observe el crecimiento por
formación de colonias.

ELABORADO POR: CARGO: FECHA:

 CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN:
PÁGINA: 5 de 6
01
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Estrías: (Realizarla con la muestra definida por el docente)

Dividir la base de la caja con marcador en dos partes: marcar superior Nº1 e inferior Nº2.
Tomar muestra con el asa y ponerla en el Nº1 y hacer estrías hasta la mitad.
Luego haga estrías en el Nº2, sin tomar nueva muestra ni esterilizar entre cada
procedimiento.
Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 24 horas.
Realizar la lectura macroscópica de las colonias observadas y coloración de Gram de las
mismas.

Rejilla: (Realizarla con la cepa provista por el docente)

Utilizar el agar Mueller Hilton (para hacer antibiograma).
En un tubo con caldo prepare una suspensión a partir de 2 colonias y observe, que la
turbidez sea similar al 0,5 de la escala de McFarland, aproximadamente 10 8 UFC/ml y ser
preparado en solución salina estéril o caldo de cultivo.
Inocular la superficie de la placa de agar Mueller Hilton con un hisopo pasándolo
uniformemente por toda la superficie en tres direcciones.
Por último, pasar el hisopo por el reborde de la placa de agar.
Dejar secar 5 minutos, antes de colocar los discos de antibióticos verifique cuales de los
provistos le sirven a la cepa entregada por su docente, ubique los sensidiscos sobre la
superficie del agar utilizando unas pinzas estériles y apretándolos suavemente sobre la
superficie del agar. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de los bordes de la placa y
lo bastante separados entre ellos para que no se superpongan sus zonas de inhibición.
Dejar las placas 15 minutos a temperatura ambiente para que comiencen a difundir los
antibióticos.
Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 24 horas.
Una vez cumplido el tiempo de incubación, medir los diámetros de los halos de inhibición con
una regla, alrededor de los discos de papel.
Se valora la efectividad de los mismos consultando la tabla de Kirby Bauer en la que según
el antibiótico, se evidencia la medida de halo, según su longitud corresponderá a una
bacteria sensible, sensibilidad intermedia, o resistente.

ELABORADO POR: CARGO: FECHA:

 CÓDIGO: FO-DOC-112
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VERSIÓN:
PÁGINA: 6 de 6
01
PROCESO GESTION DE APOYO A LA ACADEMIA FECHA: 02/09/2016
FORMATO GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO VIGENCIA: 2016

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

RESULTADOS
POST-LABORATORIO:
Cuál es el objetivo o finalidad de la técnica de siembra por agotamiento?
Existen otras técnicas para la realización de antibiogramas? En qué consisten?
Hacer entrega al docente del análisis de resultados.

ANALISIS DE RESULTADOS: Acudir al laboratorio para realizar la lectura de las siembras,

en horario acordado en clase para tal fin. Entregar informe de la práctica que debe incluir:
resultados de los Gram, descripción detallada de las características morfológicas de las
colonias, lo observado en los resultados de las diferentes siembras realizadas, resultados del
Antibiograma.

BIBLIOGRAFIA
Sánchez, María P. y Guzmán Miguel. Manual de procedimientos en bacteriología clínica.
Biobacter. Colombia. 5ª edición. 1998.
Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologia medica. Ed. Mc Graw Hill. 25 ed. 2010.
Lennette, Balows y otros. Manual de microbiología Clínica. Ed. Médica panamericana.
www.bact.wisc.eduu/Bact330/Bact330homepage
www.altillo.com/medicina/microbiologia/bacterias.asp
www.estafilococo.com.parasito.
www.microbiol,org/vlmicro/index.html

ELABORADO POR: CARGO: FECHA: