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FACULTAD PROGRAMA CICLO DE FORMACIÓN

Ciencias de la salud Ingeniería Ambiental Profesional

CURSO Microbiología Ambiental CÓDIGO AS431 SEMESTRE III

UNIDAD Historia de la Microbiología – Coloración de Gram

TEMA Morfología de las Bacterias (primera y segunda parte) HORARIO Lunes

4-6 pm

1. INTRODUCCIÓN
Microbiología es la ciencia que estudia los microorganismos los cuales se pueden observar a
través del microscopio.
Las bacterias están constituidas por una sola célula procariotica, sin núcleo definido.
Estas según la forma pueden ser cocos, bacilos, espirilos, vibrios, y espiroquetas (figura 1)

Figura 1. Formas bacterianas y su agrupación.

Estas se pueden observar gracias a las coloraciones microbiológicas, una de ellas es la

coloración desarrollada por Christian Gram en 1884, que lleva su nombre: coloración de Gram.
Según el color tomado por la célula pueden clasificarse como Gram positivas (Color Morado) o
Gram negativas (color rosado). Esta capacidad obedece a las propiedades de la pared celular
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que poseen las gram positivas, pues posee una gruesa capa depeptidoglicano, además de dos
clases de ácidos; anclado en la cara interna de la pared celular y unidos a la membrana
plasmática, se encuentra el ácido lipoteicóico, y más en la superficie, el ácido teicóico que está
anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína). Por el contrario, la
capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una capa
de la membrana plasmática por medio de lipoproteínas. La membrana exterior está hecha
deproteína, fosfolípidos y lipopolisacarido Figura 2.
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Figura 2. Bacterias Gram positivas y Bacterias Gram negativas, Estructura de Pared Celular.

2. OBJETIVOS
 Observar láminas coloreadas con Gram.
 Realizar la coloración de Gram a partir de medios de cultivo sólidos y/o líquidos y observar
las respectivas formas microbianas.

3. BIOSEGURIDAD
 Gorro
 Guante
 Tapaboca
 Bata manga larga
 Zapatos cerrados (si hay alguna patología o situación que impida usarlos, debe usar
polainas).

4. MATERIALES Y EQUIPOS
Láminas coloreadas con Gram y Microscopio.

Coloración de Gram:

 Cristal violeta o violeta de genciana.

 Lugol.
 Alcohol-acetona
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 Safranina.
 Láminas porta objeto
 Asas bacteriológicas
 Solución salina al 0.85%
 Mechero
 Cultivos bacterianos.
 Aceite de inmersión.
 Microscopio

5. FUNDAMENTO DE LAS PRUEBAS

Al adicionar a las células microbianas el cristal violeta o violeta de genciana, se forman enlaces
con los ácidos que conforman la pared celular, los cuales se fortalecen por la adición del lugol;
posteriormente, al adicionar el alcohol acetona, se arrastra con el exceso de colorante, y las
células se tiñen de morado; finalmente al adicionar safranina, esta se une a las células que no
tomaron el colorante cristal violeta, coloreándose de color rosado.

6. MONTAJE DEL PROCEDIMIENTO

Tome la respectiva lámina y observe al microscopio.
Siga los pasos indicados por el docente.

Para la coloración de Gram realice el siguiente procedimiento:

1. Tome una lámina portaobjeto,

2. Vierta una gota de Solución salina.
3. Tome el cultivo bacteriano
4. Retire la tapa (dispóngala sobre el mesón).
5. Tome el asa bacteriológica y toque una colonia del medio sólido (muestra).
6. Disponga la muestra sobre la lamina portaobjeto con la solución salina y distribúyala en
forma circular.
7. Deje secar a temperatura ambiente.
8. Fije la muestra flameando la lámina.
9. Proceda a teñir cubriendo la lámina con el cristal violeta.
10.Deje actuar por un minuto
11.Lave con agua corriente.
12.Cubra con lugol y deje actuar por un minuto.
13.Lave con agua corriente
14.Cubra con alcohol-acetona
15.Lave con agua corriente.
16.Agregue safranina y deje actuar por 30 segundos.
17.Lave con agua corriente.
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18.Deje secar a temperatura ambiente.

19.Enfoque con el objetivo de menor tamaño 4x, 10x y luego observe al microscopio en
objetivo de 100X con aceite de inmersión.

7. EVALUACIÓN
1. De la siguiente bacteria Pseudomonas aeruginosa (Grupo 1), Acidithiobacillus thiooxidans
(Grupo 2), Frankia sp. (Grupo 3), Nitrobacter sp (Grupo 4), Alcanivorax borkumensis (Grupo 5),
Realice lo siguiente:

a. ¿Cuáles medios de cultivo (Clasifiquelo) se utilizan para su aislamiento?.

b. De acuerdo a la coloración, realizando cada paso con la pared celular de la bacteria
¿cómo se clasifica? y según su morfología ¿que és? (Realice dibujos correspondientes).
c. ¿Qué aplicabilidad tiene esta bacteria en microbiología ambiental?.

8. BIBLIOGRAFÍA
Madigan, M.T., Martinko, J.M., Bender, K.S., Buckley, D.H. y Stahl, D.A. Brock. 2015. Biología
de los microorganismos, 14ª Edición. Editorial Pearson Educación S.A. Madrid-España.
Fresan, M. 2002. El vencedor del mundo invisible: Louis Pasteur.
Atlas, R:M y Bartha R. 2004. Ecología Microbiana y Microbiología Ambiental. 4ª Edición.
Editorial Prentice Hall.

9. ANEXOS

10. CONTROL DE CAMBIOS

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VERSIÓN FECHA DE DESCRIPCIÓN DE LOS CAMBIOS

APROBACIÓN REALIZADOS

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ