Facultad de Ciencias Qumicas

Carrera de Bioqumica y Farmacia

PRCTICA N 5
Tema: Bacilos Esporulados: Recuperacin, Cultivo y Tincin
Alumnos: Jos Cayamcela, Mayra Crdova.
Grupo: 3B.
Fecha: 13 de Octubre del 2015.
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Objetivos

Recuperar bacilos esporulados anaerobios presentes en una muestra de tierra en donde habita un
caballo.
Realizar la tincin de Schaeffer para bacilos esporulados.
Distinguir la presencia de esporas en los microorganismos.
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Logros de aprendizaje vinculados

Desarrollar destrezas para la siembra en medios de cultivo para microorganismos anaerobios.

Fundamentar las condiciones requeridas para su cultivo.
Realizar las tinciones considerando las precauciones correspondientes.
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Fundamentos terico

Los la especie Clostridium son bacilos grandes mviles, grampositivos y anaerobios, muchos
descomponen protenas, forman toxinas o ambas cosas. Su hbitat natural es el suelo o el
intestino de los animales y el hombre, donde viven como saprfitos. Entre los patgenos se
encuentran los causantes del botulismo, ttanos, gangrena gaseosa y colitis seudomembranosa.
Las esporas de Clostridium tienen un dimetro mayor al de los bastoncillos en los cuales se
forman lo que le da resistencia hacia agentes que lo puedan degradar, como por ejemplo el sol.
Casi todos son mviles y poseen flagelos pertricos. Crecen solamente en condiciones de
anaerobios. (Ernest Jawetz, 2011)
El medio de cultivo tioglicolato tiene por sus componentes la calidad nutricional del caldo
triptena soya. Este permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos
los nutricionalmente exigentes. Adems, se observa que las bacterias estrictamente aerobias,
crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen
en las profundidades del medio. (BRITANIA, 2015)
La envoltura de las endosporas es ms compleja e impermeable que la envuelta de las clulas
vegetativas en las que se forma. Slo se puede teir el contenido de la espora alterando su
envoltura. La impermeabilidad de las cubiertas dificulta que las endosporas se decoloren una
vez teidas. El verde de malaquita es un colorante dbilmente bsico (tiene una carga positiva
dbil) y por tanto, se une dbilmente a la bacteria. Penetra en las clulas vegetativas. Cuando se
calienta la preparacin tambin penetra las endosporas. Durante el lavado con agua, el verde de
malaquita se elimina de las clulas vegetativas, pero no de la endospora. El colorante de
contraste (la safranina) solo puede teir a las clulas vegetativas (decoloradas por el agua).
(Coelho, 2012)

Bacteriologa clnica

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Materiales, equipos y reactivos

Equipos
Autoclave
Cocina elctrica
Balanza analtica
Camara de Flujo laminar

Materiales
Matraz Erlen Meyer 250ml
Varilla
Tubos tapa rosca
Espatula
Bandeja para Tinciones
Lampara de alcohol

Reactivos
Caldo de Tioglicolato
Colorantes para tincin de
Schaeffer
Agua destilada

Tabla1. Materiales , equipos y reactivos

Procedimiento

Cultivo
Cultivo de
de
Bacilos
Bacilos
anaerobios
anaerobios
esporulados
esporulados

Obtener
Obtener
muestra
muestra de
de
tierra
tierra en
en donde
donde
habitan
habitan
caballos,
caballos, de
de
una
una
profundidad
profundidad de
de
10
10 cm
cm donde
donde
haya
heces.
haya heces.

Transportar
Transportar
en
en una
una caja
caja
petri
petri con
con
film
film

Con
Con una
una
espatula
espatula
colocar
colocar 5gr
5gr
de
de muestra
muestra
en
un
tubo
en un tubo
con
con
Tioglicol.
Tioglicol.
Incubar
aa
Incubar
o
37
37oC
C por
por dos
dos
semanas
semanas

Datos a registrar

Medidas de bioseguridad observada.

Realizar
Realizar la
la
tincion
tincion de
de
Shaeffer
Shaeffer

Con
Con un
un asa
asa
tomar
tomar una
una
muestra
muestra del
del
borde
borde de
de la
la
tierra
y
tierra y el
el
medio
y
medio y
colocar
colocar en
en el
el
portaobjetos.
portaobjetos.
Dejar
secar.
Dejar secar.

Colocar
Colocar
verde de
verde
de
malaquita
malaquita yy
calentar
calentar por
por
55 min
min en
en
vapor
vapor de
de
agua.
agua.

Enjuagar
Enjuagar
con
con agua
agua yy
colocar
colocar
Safranina,
Safranina,
dejar
dejar actuar
actuar
por
por 11 min.
min.
Lavar
Lavar on
on
agua,
agua, dejar
dejar
secar
al
secar al aire
aire

Para el desarrollo de la practica se vio necesario trabajar con proteccin personal como son
guantes, mandil, cofia y mascarilla para evitar la contaminacin con las bacterias que se
trabajan.
Para la colocacin de la muestra en el portaobjeto se debe trabajar con el asa estril para evitar
contaminacin cruzada de otros microorganismos.
El lugar de trabajo debe estar limpio para realizar la practica y se debe dejar en las mismas
condiciones cuando se termina la practica.

Usos y fundamento del medio de Tioglicol.

En microbiologa clnica se usa por su capacidad de favorecer el desarrollo de una gran variedad
de microorganismos aerobios (en la superficie del medio) y anaerobios (dentro del medio).
Fue descripto originalmente por Brewer. Presenta la misma calidad nutricional del Triptena
Soya Caldo y favorece el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los
nutricionalmente exigentes. Las sustancias reductoras como tioglicolato de sodio, el sulfito de
sodio y cistena disminuyen el potencial de oxido reduccin y proporcionan una anaerobiosis
suficiente y debido a los grupos -SH- de estos compuestos, se neutralizan los efectos

Bacteriologa clnica

Observar
Observar
con lente
con
lente de
de
100x.
100x.
Las
Las esporas
esporas
se
se observan
observan
de
de color
color
verde
verde yy los
los
bacilos
bacilos
esporulados
esporulados
de
de color
color
rojo.
rojo.

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bacteriost- ticos de los derivados mercuriales, arsenicales y de otros metales pesados que
pudieran estar presentes en la muestra en estudio. El bajo contenido de agar le otorga la
propiedad de ser un medio fludo y retarda la dispersin de CO2 y O2. Debido a todas estas
caractersticas desarrollan microorganismos aerobios, anaerobios facultativos y estrictos.

Morfologa de los microorganismos esporulados observados.

Descripcin
morfolgica

Imagen

Bacilos Gram Negativos

de color rojo, alargados,
dispuestos en cadenas en
algunos casos.
Esporas de color verde,
redondas, localizadas en
el extremo de los bacilos
y tambin aislados a
estos.

Tabla 2.Caractersticas microscpicas de bacterias anaerobias

Conclusin

Se ah logrado cultivar bacterias anaerobias de la tierra que contena heces de caballo, esto se
evidencio con la tincin de Shaeffer, pues estas bacterias desarrollan formas esporuladas que
con esta tincin se observan de color verde; y les ayudan a mantener su material gentico y otras
inclusiones citoplasmticas intactas, evitando que adversidades climticas lo destruyan.
Tambin se observo bacilos gram positivos de color rojo.
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Recomendaciones

Nivel 2 de Bioseguridad
Usar ropa de proteccin y mandil anti fluidos, guantes, mascarilla y cofia.
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Bibliografa

Coelho, E. (2012). Tincin de esporas (tcnica de Shaeffer-Fulton). Buenos Aires: UGR.

Ernest Jawetz, J. L. (2011). Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg. California:
Mc Graw Hill.
Bernal, A. (26 de Mayo de 2014). Tecnicas de siembra. Recuperado el 11 de Avril de 2015, de
Prezi: https://prezi.com/bbplnfll4fc5/tecnicas-de-siembra/
BRITANIA. (12 de Octubre de 2015). Tioglicolato Medio Fluido Sin Indicador. Obtenido de
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tiogmedflusinindic.htm

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