TECNICAS DE COLORACION.

OBSERVACION DE CÉLULAS
PROCARIOTAS

PARTE I: TECNICAS DE COLORACION Y PREPARACION DE MUESTRAS

I. FUNDAMENTO
La coloración implica la penetración del colorante por fenómeno
osmótico y su fijación se debe a fenómenos de absorción de
partículas o iones. Químicamente la coloración es la unión de las
moléculas del colorante con los elementos constituyentes de la
célula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tiñen con los
colorantes ácidos; otros tienen pH ácido y se tiñen con colorantes
básicos. Es necesario señalar que tanto el núcleo como el citoplasma
tienen características anfóteras.
El mecanismo de coloración de las muestras biológicas puede ser
afectados por:
 Pureza del colorante
 Concentración del colorante
 pH de la solución del colorante
 Temperatura del medio ambiente
 Sustancias adicionales (mordientes)
 Tiempo de coloración.
Los preparados microscópicos, constituyen una serie de preparados
rutinarios de laboratorios que tienen por objeto identificar en forma
rápida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la
finalidad de resolver algún problema de interés particular. Los
preparados microscópicos más frecuentes en Biología son:
- Preparados “en fresco”
- Preparados “en seco”
Los preparados “en fresco” son preparaciones microscópicas
acuosas, que se caracterizan por que la sustancia examen, no está
adherida de un modo fijo a la superficie de la lámina portaobjeto y
por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones se corre
el riesgo de perder u estropear el preparado.
Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento
previo (extensión, fijación y coloración), y se caracterizan porque la
sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lámina
portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes
posiciones no se estropea o pierde la muestra.
Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de
estos factores que inciden básicamente en la complementación del
aprendizaje del estudio de estructuras celulares, identificación de
tejidos y microorganismo.

PARTE II: OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS

PROCARIOTES

I.FUNDAMENTO
La principal característica de la
célula procariota es que carece de
núcleo celular. Las bacterias, los
organismos procariotes más
representativos, comprenden, por
una parte, especies de importancia
médica puesto que producen una
serie de infecciones y padecimientos
en el hombre y en los animales, pero,
por otra parte, una gran mayoría
representa beneficios para la
agricultura, la industria y la salud
humana y animal.
Para observar este tipo de células se
utiliza la Tinción Gram, técnica diseñada por el médico danés Hans
Christian Gram. Esta consiste en poner en contacto las células
bacterianas con colorantes básicos como violeta de genciana,
utilizando la solución de lugol como mordiente.
Esto forma un compuesto yodado que se fija fuertemente en
determinadas bacterias. Según la coloración que adquieran, las
bacterias se clasifican en:

GRAM POSITIVAS: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y

adquieren una coloración violeta. GRAM
NEGATIVAS: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se
decoloran con solventes orgánicos. Se utiliza adicionalmente la
safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste,
adquiriendo una coloración rosada.
La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial
de sus paredes bacterianas. Las bacterias Gram positivas poseen una
pared celular con mureina y ácido teitoico. En cambio, las Gram
negativas tienen una pared mucho más compleja que contiene,
además del peptidoglucano, una asociación de proteínas lípidos y
lipopolisacáridos.
Además de la coloración esta técnica nos permite distinguir en las
bacterias:
a) Morfología: cocos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc)
b) Agrupación: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina.

Bacterias del yogurt

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación

natural de la leche. A escala industrial se realiza la
fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una
asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y
el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta
preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías
bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas).
Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de
longitud) facilita la observación, aunque no se tenga mucha
práctica con el enfoque del microscopio.

Bacterias del vinagre

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético

resultante de la fermentación espontánea del vino o de
bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del
vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido acético,
principalmente Acetobacter aceti, aunque también
Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos polares.

Bacterias del sarro dental

El sarro dental es un depósito consistente y adherente

localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido
principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias
junto con sus productos metabólicos. La flora bacteriana de la
cavidad bucal es muy variable dependiendo de las
condiciones que se den en el momento de hacer la
preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas,
pudiéndose observar gran variedad de morfologías:
espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.

Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una

de las 3 muestras indicadas.

1. Realizar una extensión de la muestra de cultivo

bacteriano sobre un portaobjetos
2. Secar ante un mechero.
3. Cubrir el preparado con violeta de genciana por 1
minuto.
4. Enjuagar la lámina con agua destilada
5. Añadir lugol por 1 minuto.
6. Lavar con agua destilada y decolorar con alcohol
acetona.
7. Añadir fucsina o safranina y dejar que actúe por 1
minuto.
8. Lavar con agua corriente, secar
9. Coloque una gota de aceite de inmersión y observar al
microscopio con el objetivo de inmersión.
TÉCNICA DE COLORACIÓN GRAM