OBSERVACIÓN Y RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS PROCARIOTES

I. FUNDAMENTO

La principal característica de la célula procariota es que carece de núcleo celular. Las bacterias, los organismos
procariotes más representativos, comprenden por una parte, especies de importancia médica puesto que
producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los animales pero, por otra parte, una
gran mayoría representa beneficios para la agricultura, la industria y la salud humana y animal.

Los preparados microscópicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que tienen por
objeto identificar en forma rápida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la finalidad de
resolver algún problema de interés particular. Los preparados microscópicos más frecuentes en Biología son:
- Preparados “en fresco”
- Preparados “en seco”
Los preparados “en Fresco” son preparaciones microscópicas acuosas, que se caracterizan por que la sustancia
examen, no está adherida de un modo fijo a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo tanto, al ser
manipulada ésta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado.

Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensión, fijación y coloración), y
se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo
tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la muestra.

La coloración implica la penetración del colorante por fenómeno osmótico y su fijación se debe a fenómenos de
absorción de partículas o iones. Químicamente la coloración es la unión de las moléculas del colorante con los
elementos constituyentes de la célula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tiñen con los
colorantes ácidos; otros tienen pH ácido y se tiñen con colorantes básicos. Sin embargo es necesario señalar
que tanto el núcleo como el citoplasma tienen características anfótericas de manera que se pueden teñir, el
núcleo con algunos colorantes ácidos y el citoplasma con algunos colorantes básicos.

El mecanismo de coloración de las muestras biológicas pueden ser afectados por:

 Pureza del colorante
 Concentración del colorante
 pH de la solución del colorante
 Temperatura del medio ambiente
 Sustancias adicionales (mordientes)
 Tiempo de coloración

Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de estos factores que inciden básicamente en la
complementación del aprendizaje del estudio de estructuras celulares, identificación de tejidos y
microorganismo.

Para observar células procariotas se utiliza la Tinción Gram, técnica diseñada por el médico danés Hans
Christian Gram. Esta consiste en poner en contacto las células bacterianas con colorantes básicos como violeta
de genciana, utilizando la solución de lugol como mordiente. Esto forma un compuesto yodado que se fija
fuertemente en determinadas bacterias. Según la coloración que adquieran, las bacterias se clasifican en:

GRAM POSITIVAS: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloración violeta. GRAM
NEGATIVAS: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se decoloran con solventes orgánicos. Se
utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste, adquiriendo una
coloración rosada.

La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus paredes bacterianas. Las bacterias
Gram positivas poseen una pared celular con mureina y ácido teitoico. En cambio, las Gram negativas tienen
una pared mucho más compleja que contiene, además del peptidoglucano, una asociación de proteínas lípidos
y lipopolisacáridos.

Además de la coloración esta técnica nos permite distinguir en las bacterias:

a) morfología: cocos, bacilos, espirilos, cocobacilos, vibrios, etc)
b) agrupación: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina
A: forma de caña o bacilos
B: Redondos en líneas: estreptococos
C: redondos en cúmulos: estafilococos
D: Redondos en pares: diplococos
E: Forma de espirales: espirilos
F: En forma de coma: vibrios

II. OBJETIVOS

 Reconocer los distintos tipos de bacterias y si se usa tinción Gram reconocer si son Gram+ o Gram -
según se tiñan o no con la Tinción Gram.

III. MATERIALES

Encontrarás en el laboratorio:
 Microscopio óptico
 Alcohol acetona
 Mechero de alcohol
 Cloruro de sodio 0.9%
 Azul de metileno
 Soluciones para la tinción: - Fucsina o safranina
- Violeta de genciana
- Aceite de inmersión
- Lugol

Material que el estudiante debe llevar a la práctica:

 Yogurt natural (sin color ni sabor)
 Vinagre (no industrial)
 Nostoc sp “Cushuro”
 Sarro dentario
 Palitos mondadientes
 Bisturí
 Pinza

IV. PROCEDIMIENTO

La tinción Gram se realizará sobre las muestras de yogur y vinagre (no industrial) que los alumnos traerán.

Bacterias del yogurt y/o vinagre no industrial

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas
(cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el
tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha
práctica con el enfoque del microscopio.

Bacterias del vinagre

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino
o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas
del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos
rectos con flagelos polares.

Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una de las 3 muestras indicadas.
 1 Realizar una extensión de la muestra de cultivo bacteriano sobre un portaobjetos
2 Secar ante un mechero.
3 Cubrir el preparado con violeta de genciana por 1 minuto.
4 Enjuagar la lámina con agua destilada
5 Añadir lugol por 1 minuto.
6 Lavar con agua destilada y decolorar con alcohol acetona.
7 Añadir fucsina o safranina y dejar que actúe por 1 minuto.
8 Lavar con agua corriente, secar con chorro a baja presión,
9 Coloque una gota de aceite de inmersión encima de la lámina cubreobjetos y observar al
microscopio con el objetivo de inmersión.

Bacterias del sarro dental

El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está
constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que
se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose
observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
Realizar los siguientes pasos para la obtención y tinción de la muestra de sarro dentario:

1 Colocar una gota de ClNa 0.9% en una lámina portaobjeto;

2 Extraer una muestra de sarro dentario con un palito mondadiente;
3 Colocar sobre la gota de ClNa 0,9$ y homogenizar bien con el palito,
4 Realizar una extensión de la muestra sobre un portaobjetos
5 Secar ante un mechero flamenado ligeramente,
6 Cubrir con azul de metileno
7 Dejar secar
8 Enjuagar con agua a chorro de baja presión para no arrastrar la muestra
9 Secar flameando la lámina portaobjeto sobre el mechero
10 Observar en el microscópio primero en el panorámico y luego en el de inmersión.

Nostoc sp “ Cushuro”
Con una pinza de disección tomar una pequeña muestra de Nostoc colocar sobre una lámina portaobjeto y
extender bien para quedar transparente y observar al microscopio con objetivo panorámico y luego a 40x

PARTE PRACTICA : Completar el gráfico

Cada alumno dibujará las muestra observadas y mostrará al profesor antes de retirarse de la
práctica

Cuestionario:
1. ¿Qué es la mureina? ¿Dónde se encuentra? ¿Cuales son las moléculas
que lo forman?
2. ¿Qué son los mesosomas?
3. ¿Qué diferencia hay entre bacterias GRAM+ y GRAM-?
4. ¿Qué son los priones?
5. Cita al menos tres bacterias causantes de enfermedades y comenta sus
efectos sobre la salud.
6. ¿Qué es un antibiótico y cual es su utilidad en medicina?
7. ¿Qué relación tienen los virus con el cáncer?