UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
CARRERA DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA
CICLO ACADÉMICO: OCTUBRE – MARZO 2017

MICROBIOLOGÍA II

DATOS INFORMATIVOS:

Estudiante: Campaña J., Fiallos H., Pérez H.

Profesor: Dr. Carlos Rodríguez; Ph.D.
Nivel: 4to BQ
Práctica de Laboratorio N°: 5
Fecha de Realización: 20 de enero de 2017
Fecha de Presentación: 23 de julio de 2017

TEMA:
“TINCIÓN DE CÁPSULAS Y ENDOSPORAS”

1. RESULTADOS
Tabla N°1. Tinción de Endosporas y Cápsula

Endospora Cápsula Endospora

100x 100x 100x

Gram (+) bacilo Gram (-) bacilo Gram (+) bacilo
JC-15 HP-01 HF-01
Fuente: Laboratorio de Microbiología II
Observación de endosporas y capsulas en microscopio con el lente de 100x con la ayuda
del aceite inmersión, debido a la presencia de esporas en las células Gram (+) existe una
coloración verdosa alrededor de la forma vegetativa de color rojo por la safranina. La
observación de capsulas en Gram (-) se obtuvo por medio de la fijación del cristal
violeta a la capsula y el contratinte de sulfato de cobre para así eliminar el exceso de
colorante.
Tinción de cápsulas
- Realizar el frotis sin fijar al calor.
- Una vez seca la muestra colocar cristal de violeta o violeta de genciana (1%) por
de 5 a 7 minutos, terminado el tiempo se lava el colorante con CuSO 4 (20%).
- Secar la muestra y observa en el microscopio.
Tinción de esporas
- Preparar frotis.
- Teñir con verde malaquita.
- Poner a vapor de agua hirviendo la placa con el colorante de forma que el
colorante humee durante 5 min.
- Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
- Teñir con safranina 1 min.
- Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
- Secar la preparación y observar en el microscopio.

DISCUSIÓN
Debido al tamaño de la célula existe ciertas limitantes en su observación donde se ha
considerado que la principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio
que la rodea; el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de
colorantes. Existen diferentes tipos de tinciones de los cuales nos permiten obtener
información acerca de una bacteria y ciertos orgánulos presentes en ellas por lo cual se
desarrollaron dos tipos de tinciones para Gram (+) y Gram (-) siendo estas utilizadas en
mayoría en la investigación, mencionado esto las siguientes son la tinción de
endosporas y la de capsulas bacterianas (Morales, X. 2015).

Según Kimball, Y. (1998). Algunos géneros bacterianos, entre los que destacan
Clostridium y Bacillus, producen en su interior formas de resistencia denominadas
endosporas. Se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables
formándose una espora por cada forma vegetativa. Por su contra parte tenemos las
cápsulas bacterianas que son importantes tanto para la bacteria como para otros
organismos. A las bacterias les proporcionan una cubierta protectora y además sirven de
reservorio de alimento almacenado. Su mayor capacidad de virulencia se encuentra en
esta parte viscosa de la célula bacteriana cumpliendo funciones fagocitarias y anti fagos.
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores
ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el
microscopio óptico como estructuras para refractar y de difícil tinción por lo cual es el
objetivo del verde de malaquita el cual al ser calentado lleva a la célula a un estado
desfavorable. Según Winn and Koneman. (2008). La corteza se forma después entre las
dos capas de forespora y calcio donde la bacteria agrega una capa más a la forespora. La
esporulación se completa y la endospora es lanzada al exterior cuando se degrada
la célula vegetativa, y es ahí donde el verde de malaquita tiñe la espora formando un
halo verde en la célula. Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante
en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el
segundo colorante el cual será la safranina, en la muestra de bacilos Gram (+) de código
JC-15 al ser presentado al microscopio en el lente de 100x se observó las endosporas
teñidas de verde y las formas vegetativas de un color rojizo.

El glucocalix bacteriano es un polímero viscoso, pegajoso, gelatinoso y se encuentra

rodeando a la célula y está compuesto por polisacáridos, polipéptidos o ambos. La
cápsula es una capa rígida organizada en matriz impermeable que excluye colorantes
como la tinta china por lo cual no pueden ser teñidas de una forma sencilla, su
desarrollo se logra en una reacción de expansión de la capsula con albumina y el
contraste contra un fondo de sulfato de cobre es absorbido por el material de la cápsula
que ha sido decolorizada cumpliendo la función de contratinte y tiñendo el soma con
violeta de cristal. La muestra de bacilos Gram (-) de código HP-01 por medio de un
microscopio en lente de 100x arroja positivamente formas capsulares en la bacteria de
dicha muestra (Troya H., 2013).

2. CONCLUSIONES

Se concluyó que la presencia de endosporas han permitido apreciar células vegetativas

bacterianas que debido a su supervivencia en ambientes desfavorables por medio de
esporas que son liberadas después de la esporogénesis teniéndose de verde malaquita
estas conformaciones siendo entre las más comunes las Gram +.
Se llegó a la conclusión que las técnicas de tinción de esporas y capsulas difieren en el
colorante (verde malaquita para esporas y cristal violeta para capsulas), también en el
fijado (calor húmedo para esporas, y temperatura ambiente para capsulas), lo que hizo
que se tiñan las estructuras requeridas.
Se determinó las diferencias entre las capsulas y endosporas, existen una gran variedad
de bacterias de las cuales hay formas de bacterias como algunas Gram +, capaces de
formar ciertas conformaciones para su protección en situaciones desfavorables para la
misma y otras como las Gram – que por lo general contiene esta capa desde su
formación. Las endosporas son un medio externo capaz de brindar soporte vital y
protección a la célula en casos extremos de supervivencia, por su contra parte las
capsulas son el medio de protección de la célula además cumpliendo funciones vitales
para su reproducción y su acción en el huésped.

3. RECOMENDACIONES

 Trabajar siempre con guantes al tratar con la verde malaquita ya que es

cancerígeno.
 Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con
precaución, ya que pueden conducir a errores. Las moléculas de colorante
forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares
auténticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el
mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse
muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos
equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente.
 La aplicación de agua destilada en la capsula podría producir un error en la
observación de las misma debido a que es hidrosoluble por eso la aplicación de
sulfato de cobre, se recomienda tomar en cuenta esta información.

4. BIBLIOGRAFÍA
Kimball, Y. 1986. Biología. Cuarta edición. Addison - Wesley Iberoamericana.
Wilmington, EU. Disponible
en: http://www.monografias.com/trabajos69/tincion-esporas
bacterianas/tincion-esporas-bacterianas2.shtml#ixzz4WYRtf7w6. Obtenido el
20 de Enero de 2017
Morales, X. (2015). Tinción resumen. Disponible en
http://documents.mx/documents/tincion-resumen.html. Obtenido el 20 de
Enero de 2017
Troya H., (2013) Tinción de la cápsula bacteriana. Disponible en
http://microbiologiaulat2013.blogspot.com/2013/12/tincion-de-la-capsula-
bacteriana.html Obtenido el 20 de Enero de 2017
Winn, W. and Koneman, E. (2008). Koneman diagnóstico microbiológico. Buenos
Aires: Editorial Médica Panamericana. Obtenido el 20 de Enero de 2017