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I. FUNDAMENTO
La principal característica de la célula procariota es que carece de núcleo celular. Las bacterias, los
organismos procariotes más representativos, comprenden por una parte, especies de importancia médica
puesto que producen una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los animales pero, por otra
parte, una gran mayoría representa beneficios para la agricultura, la industria y la salud humana y animal.
Los preparados microscópicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que tienen por
objeto identificar en forma rápida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la finalidad de
resolver algún problema de interés particular. Los preparados microscópicos más frecuentes en Biología son:
- Preparados “en fresco”
- Preparados “en seco”
Los preparados “en Fresco” son preparaciones microscópicas acuosas, que se caracterizan por que la
sustancia examen, no está adherida de un modo fijo a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo tanto, al
ser manipulada ésta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el preparado.
Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensión, fijación y coloración),
y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lámina portaobjeto y por
lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la muestra.
La coloración implica la penetración del colorante por fenómeno osmótico y su fijación se debe a fenómenos
de absorción de partículas o iones. Químicamente la coloración es la unión de las moléculas del colorante con
los elementos constituyentes de la célula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino y se tiñen con los
colorantes ácidos; otros tienen pH ácido y se tiñen con colorantes básicos. Sin embargo es necesario señalar
que tanto el núcleo como el citoplasma tienen características anfótericas de manera que se pueden teñir, el
núcleo con algunos colorantes ácidos y el citoplasma con algunos colorantes básicos.
Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de estos factores que inciden básicamente en
la complementación del aprendizaje del estudio de estructuras celulares, identificación de tejidos y
microorganismo.
Para observar células procariotas se utiliza la Tinción Gram, técnica diseñada por el médico danés Hans
Christian Gram. Esta consiste en poner en contacto las células bacterianas con colorantes básicos como
violeta de genciana, utilizando la solución de lugol como mordiente. Esto forma un compuesto yodado que se
fija fuertemente en determinadas bacterias. Según la coloración que adquieran, las bacterias se clasifican en:
GRAM POSITIVAS: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloración violeta. GRAM
NEGATIVAS: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se decoloran con solventes orgánicos. Se
utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste, adquiriendo una
coloración rosada.
La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus paredes bacterianas. Las
bacterias Gram positivas poseen una pared celular con mureina y ácido teitoico. En cambio, las Gram
negativas tienen una pared mucho más compleja que contiene, además del peptidoglucano, una asociación
de proteínas lípidos y lipopolisacáridos.
II. OBJETIVOS
Reconocer los distintos tipos de bacterias y si se usa tinción Gram reconocer si son Gram+ o Gram -
según se tiñan o no con la Tinción Gram.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio:
Microscopio óptico
Alcohol acetona
Mechero de alcohol
Cloruro de sodio 0.9%
Azul de metileno
Soluciones para la tinción: - Fucsina o safranina
- Violeta de genciana
- Aceite de inmersión
- Lugol
IV. PROCEDIMIENTO
La tinción Gram se realizará sobre las muestras de yogur y vinagre (no industrial) que los alumnos traerán.
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas
(cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el
tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha
práctica con el enfoque del microscopio.
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino
o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias
aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.
Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una de las 3 muestras indicadas.
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está
constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que
se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose
observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
Realizar los siguientes pasos para la obtención y tinción de la muestra de sarro dentario:
Nostoc sp “ Cushuro”
Con una pinza de disección tomar una pequeña muestra de Nostoc colocar sobre una lámina portaobjeto
y extender bien para quedar transparente y observar al microscopio con objetivo panorámico y luego a
40x
Cuestionario:
1.¿Qué es la mureina? ¿Dónde se encuentra? ¿Cuales son las
moléculas que lo forman?
El peptidoglucano o mureína constituye la estructura básica de la pared
celular de las bacterias y es ligeramente diferente en bacterias Gram-
Positivas y Gram-Negativas, aunque en ambas está formado por los
mismos componentes, una secuencia alternante de N-acetil-
glucosamina (NAG) y ácido acetil-murámico (NAM), unidos mediante
un enlace B-1,3.
2.¿Qué son los mesosomas?
Los mesosomas son invaginaciones en la membrana plasmática de las
bacterias Gram positivas y algunas Gram negativas, que son
observadas únicamente en células fijadas químicamente para la
observación en microscopia electrónica.
3. ¿Qué diferencia hay entre bacterias GRAM+ y GRAM-?
Las Gram positivas tienen una red de mureína que está bien
desarrollada y puede llegar a tener hasta 40 capas. En cambio,
las gram negativas cuentan solamente con una capa.
Streptococcus pneumoniae
Meningitis neumocócica
Mycobacterium Tuberculosis