1. BQ.

Enzimas
Natalia Nuñes
APUNTES

ENZIMAS - Primer tema de BQ.

Las enzimas son proteínas. Las proteínas son un conjunto de aminoácidos

unidos entre sí por enlaces peptídicos y que se encuentran como “enmarañados”
formando una estructura secundaria.
Como toda proteína tienen cinco (5) características importantísimas.
1. Son proteínas que catalizan reacciones químicas dentro de un sistema
biológico.
Van a tener que realizar una reacción química. Va a estar dentro de un
sistema biológico, no está en el aire así perdida por la vida. Esta
esencialmente adentro de una célula, y para ser un sistema biológico
tienen que tener condiciones.
• Temperatura adecuada.
• pH adecuado.
• Disponibilidad de sustratos.
• Presión.
Para que pueda catalizar necesito darle condiciones adecuadas, y dentro
de lo que es estrictamente la cinética enzimática vamos a tener cuatro (4)
características importantes.

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Natalia Nuñes
APUNTES

La grafica de la figura representa el progreso de la reacción, ósea es el

tiempo en el eje de las x y la energía en el eje de las y. (La grafica sin los
nombres que contiene ha ido en parciales y exámenes.)

Las enzimas aceleran los tiempos en el que voy a degradar una molécula,
por ejemplo, el azúcar. Pero lo aceleran a tal punto de que esa
degradación sea en un tiempo compatible con mi vida. No puedo esperar
dos días a degradar tres cucharas de azúcar, la necesito en una hora.

• Van a aumentar la velocidad de las reacciones, pero lo van a hacer

disminuyendo la energía necesaria para la activación de la
reacción.
En la figura la reacción sin enzima se representa con una curva violeta, es una
energía muy alta. En la figura la reacción con enzima se representa con una
curva verde, con una enzima es mucho más rápida por que disminuyen la
energía de activación.
• No modifican los equilibrios. Es decir, tanto la energía de los
reactivos es la misma con o sin la presencia de enzimas al igual
que la energía de los productos tanto en una reacción con o sin
enzimas.
A pesar de que disminuyen no alteran los equilibrios. El reactivo tiene la misma
energía cuando arranca la reacción y el producto va a tener la misma energía
cuando finaliza la reacción independientemente de que haya o no una enzima.
A esto se lo conoce como el equilibrio de la reacción. No alteran el equilibrio ni
de los reactivos ni de los productos.
Si no alteran el equilibrio no alteran la diferencia de energía libre de Gibbs (delta
G).
• No modifican el delta G (DG). (Diferencia de la energía libre de
Gibbs ya que no modifican los equilibrios de reactivos y de
productos.

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2. Tienen en su estructura un gran poder catalítico.

El poder catalítico es la capacidad que tiene una enzima para degradar
cosas.
Degrada únicamente su sustrato. El sustrato son las moléculas que van
en el sitio catalítico, ósea en el sitio que es para degradar las cosas.
Hay una serie de pasos que hay que cumplir para que la enzima pueda
degradar en su sitio catalítico.
El sitio catalítico también es llamado sitio activo, que es el lugar donde va
el sustrato. Los sitios activos pueden ser uno o pueden ser varios,
depende mucho de la enzima.
En general nuestras enzimas tienen uno o dos sitios activos.

La enzima se une a su sustrato mediante dos (2) pasos.

1. La enzima se une con el sustrato y forma el complejo enzima sustrato.
La enzima tiene que reconocer en su sitio activo al sustrato (O reactivo),
estos se unen, tienen una determinada afinidad medible y es una
contante.
En la figura se encuentra representada como la flecha que se encuentra
en el medio de (E) y (ES) apuntando con dirección a (ES), que es la
velocidad a la que se unen enzima con sustrato en el sitio activo y se la
llama K1.
Una vez que se une la enzima con el sustrato se forma el complejo enzima
sustrato (ES).
La constante K1 nos habla de la afinidad, ósea que tan afín es para unirse
el sustrato con la enzima y formar el complejo enzima sustrato (ES).
Luego de formado el complejo enzima sustrato (ES).
La constante K2 nos habla de cómo la enzima, el complejo, degrada en el
sitio activo al sustrato y la libera formando el producto.

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La enzima (E) tiene dentro de su estructura un lugar llamado sitio activo,

que es donde se une el sustrato (S) (O reactivo) de la enzima.
Luego de unidos forman el complejo enzima sustrato (ES).
Para que la enzima se una al sustrato existe una constante llamada K1.
El complejo enzima sustrato se debe degradar liberando por un lado la
enzima y por otro el producto. (Ocurrió efectivamente la reacción).
El tiempo en el que ocurre la reacción enzimática lo definimos como K2.
Uno es como la enzima se une al sustrato y el otro es como la enzima
degrada el sustrato.
K1 sería KM. KM es una constante que la definimos como un valor de
concentración de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad
máxima.
El valor de KM es inverso a la afinidad de la enzima por el sustrato. Si
tengo un mayor valor de KM la afinidad de la enzima por el sustrato baja
y si tengo un menor valor de KM la afinidad de la enzima por el sustrato
sube.
K2 sería KCat. KCat es la constante catalítica o número de recambio,
habla de cómo catalizar una reacción, ósea como transformar ese
complejo enzima sustrato en el producto. Cuan rápida es capaz de
funcionar, que tan eficiente es. Depende de la enzima.
Para una determinada unidad de tiempo y con la enzima rodeada de
sustrato (Saturada, la apuramos para que trabaje lo más eficiente posible)
es el tiempo en el cual se convierte el sustrato en producto por una
molécula de enzima. Es un valor fijo que depende de la enzima.

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3. Tienen un alto grado de especificidad por su sustrato.

Pueden decidir que molécula es capaz de entrar en el sitio activo de la
enzima.
• Cada enzima puede tener uno o más sustratos.
• Una vez que el sustrato entró en el sitio activo la reacción debe
ocurrir y debe ocurrir rápido (Ocurrir en tiempos compatibles con la
vida):

4. Funcionan en ciertas condiciones que deben ser óptimas.

• pH levemente básico, aproximadamente 7,3 – 7,4.
• Temperatura adecuada. Menor a 37°C en mis células, 34°C –
36°C.
• Presión 1 atm.
• Disponibilidad de oxígeno, agua y sustrato.

5. Algunas enzimas requieren, además de condiciones óptimas y sustrato,

de cofactores (Orgánicos o inorgánicos) para llevar a cabo la reacción, así
como también la presencia de energía en forma de ATP, ADP, NADH,
FADH2, GTP, otros.

TIPOS DE CINÉTICA ENZIMÁTICA:

Hay dos (2) tipos de cinéticas enzimáticas.
1. Michaelis-Menten.
Curva hipérbole.

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Principio de la hipérbole:
Parece bien lo que llamamos directamente proporcional, a medida que van
subiendo los valores del eje horizontal suben los valores del eje vertical
formándose una línea recta en la hipérbole.
Mitad de la hipérbole:
Después de cierto punto aparece una curva, se empieza como a quedar. A
medida que aumentan los valores del eje horizontal, los valores del eje vertical
se mantienen constantes.
Final de la hipérbole:
Llega hasta un punto en el que le continúo agregando sustrato, pero la velocidad
de la reacción no aumenta más. Sobre el final de la hipérbole, en la parte que
esta paralela a la concentración de sustrato, ósea paralela al eje horizontal, se
dice que la enzima alcanzó la velocidad máxima (Vmax).
¿Cómo encuentro el KM?
KM es la concentración de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad
máxima.
Observo el valor de la velocidad máxima. Observo la hipérbole y la altura
máxima de la hipérbole me va a indicar en el eje vertical la velocidad
máxima de reacción.
Observo la mitad de la velocidad máxima de reacción. Identifico a que
punto de la hipérbole pertenece y en ese punto identifico para que valor
del eje horizontal (Concentración de sustrato) pertenece, hallando así el
valor de KM (Valor de concentración de sustrato al cual se alcanza la
mitad de la velocidad máxima).

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En este tipo de gráficos de Michaelis-Menten se pueden describir dos (2) tipos

de comportamiento.
Voy agregando concentración de sustratos y la velocidad aumenta de forma
proporcional. El punto se ubica antes de la panza de la curva y ahí puedo
dividir el grafico en dos partes.
1- La primera parte, desde el inicio hasta el punto antes de la panza de
la curva, la velocidad de la reacción aumenta de forma proporcional
con el agregado de sustrato. A mayor sustrato mayor velocidad.
A esto lo llamamos comportamiento o cinética de orden 1.
2- La segunda parte, desde el punto antes de la panza de la curva hasta
el final, la velocidad de la reacción aumenta o no aumenta, pero de
forma no proporcional frente al agregado de concentración de
sustratos.
A esto lo llamamos comportamiento o cinética de orden 0.

¿Cómo hallar el valor de KM a partir de una tabla de datos?

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Tenemos en la figura que contiene la tabla de datos que frente al agregado de

concentración de sustrato la velocidad de reacción sube.
¿Hasta cuándo sube? Se puede observar que frente al agregado de 2,0 de
sustrato la velocidad aumenta a 15,1 y que frente al agregado de 2,5 de sustrato
la velocidad aumenta a 15,2. Se concluye que prácticamente no subió, frente al
agregado de 0,5 más de sustrato prácticamente no subió cuando anteriormente
subía sensiblemente. En el valor de velocidad 15 ya estamos en la velocidad
máxima de reacción.
Para hallar el KM se debe tomar la mitad del valor de la velocidad máxima de
reacción, que es 15,2/2=7,5 y buscar cual es la concentración de sustrato a esa
velocidad de reacción.
Acá se presenta un problema, los valores de la gráfica correspondientes a la
velocidad de reacción y concentración de sustrato son mayores al valor que
resulta de la división entre dos de la velocidad máxima de reacción, por lo cuál
el valor de concentración de sustrato también será menor. Va a ser menor a 0,5,
cuanto exacto no lo sé, pero seguro menor a 0,5.
KM= <0,5.

Ecuación de Michaelis-Menten:
Únicamente aplicable a enzimas que cumplan la cinética de Michaelis-Menten
cuya curva es una hipérbole.
Velocidad inicial (V0) = Velocidad máxima (Vmáx) * Concentración de sustrato ([S])
KM + Concentración de sustrato ([S])

Existen 2 variantes de la ecuación Michaelis-Menten:

• Si la enzima se encuentra en orden 1.

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V0 = Vmáx * [S]
KM
• Si la enzima se encuentra en orden 0.

V0 = Vmáx

Por lo general se usa la variante de la ecuación Michaelis-Menten cuando la

enzima se encuentra en orden 1.

Otras fórmulas:
Eficiencia catalítica = Constante catalítica (KCat) / KM

V0 = KCat * [S]

Vmáx = KCat * Concentración de enzima total [Enzima total]

Grafico de Lineweaver-Burk o de dobles recíprocos:

• Aplica para los dos tipos de cinética.

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Ecuación de la recta:

Y= A * X + B

Teniendo en cuenta la ecuación de Michaelis-Menten a la inversa les quedó:

10 | P á g i n a
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¿Cómo se calcula la velocidad máxima (B)?

Si la letra indica que B= 5 y me pregunta ¿Cuánto vale la velocidad máxima?

Vmáx= 5. No. No es 5.
Para calcular la Vmáx se debe hacer la división 1/5.
Vmáx= 1/5.

¿Cómo se calcula el KM?

Si la letra indica que donde se encuentra ubicado KM (-1/KM) tiene un valor de -

4 y me pregunta ¿Cuánto vale la velocidad máxima?
KM= 1*-4.

¿Cómo se calcula la pendiente (A)?

Se toman un fragmento de la recta por medio de dos puntos diferentes y se

calcula como: Pendiente= KM/Vmáx.

Ejemplo de aplicación de lo visto:

La letra indica que: y=35*x+17. Hallar Vmáx.

B= 17

B= 1/Vmáx

Vmáx= 1/B

Vmáx= 1/17= 0.06

Hallar KM:

A= 35

11 | P á g i n a
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A= KM/Vmáx

KM= A*Vmáx

KM= 35*0.06= 2.06

INHIBICIONES ENZIMÁTICAS:

• Irreversibles. No se ven en este curso.

La enzima se une de forma covalente y se modifica la estructura de la
proteína.
• Reversibles.
La enzima se une de forma NO covalente.

Son tres (3):

• Competitiva.

Se observan dos curvas. Una con presencia de un inhibidor (En color rojo) y otra
sin presencia de un inhibidor (En color negro).
Vmáx no se modifica (Cortan el mismo punto por lo que: Vmáx= 1/5= 0,2 en los
dos casos).
KM aumenta (Aumentó de: KM= 1/5= 0,2 a KM= 1/3= 0,33).
Anteriormente se mencionó que a mayor KM menor afinidad.
Se concluye que en presencia de un inhibidor, en la inhibición competitiva, la
afinidad de la enzima por el sustrato disminuye.

12 | P á g i n a
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Frente a la presencia de un inhibidor algo debe ocurrir.

Competitiva, deriva de competir. Compiten el sustrato y el inhibidor que van a ir
mismo lugar, al sitio activo.
Son muy parecidos y la enzima se confunde al momento de a elección de a quien
unir al sitio activo.
Para revertir la inhibición se debe agregar más sustrato por lo cual es más
posible o probable que la enzima se una con el sustrato y no con el inhibidor.

• No competitiva.

Se observan dos curvas. Una con presencia de un inhibidor (En color rojo) y otra
sin presencia de un inhibidor (En color negro).
KM no se modifica (Cortan el mismo punto por lo que: KM= 1/6= 0,16 en los dos
casos).
Vmáx disminuye (Disminuyó de: Vmáx = 1/4= 0,25 a Vmáx = 1/7= 0,15).
Acá el inhibidor se une a un lugar distinto del sitio activo. No compiten el sustrato
con el inhibidor por llegar al sitio activo porque se une en otro lugar.
Esta enzima lo que hace directamente es al no unirse al sitio activo la afinidad
por el sustrato no va a cambiar, pero en presencia del inhibidor va trabajar más
lento. Si o si va a trabajar más lento, su velocidad máxima no va a ser la misma.
Para prevenir la inhibición se debe agregar más enzima.

13 | P á g i n a
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APUNTES

Esto que se viene observando en el gráfico de Lineweaver-Burk o de dobles

recíprocos también se puede observar en un gráfico de Michaelis-Menten:
(Se pregunta con cualquiera de los dos graficos).

Se observa lo anteriormente mencionado en el gráfico de Lineweaver-Burk o de

dobles recíprocos.
Inhibidor competitivo:
Vmáx no cambia (Al compararla con la hipérbole normal ambas terminan en el
mismo punto).

14 | P á g i n a
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KM en presencia del inhibidor competitivo aumentó.

Inhibidor no competitivo:
Vmáx disminuyó aproximadamente a la mitad.
KM en presencia del inhibidor no competitivo es igual.

• Acompetitiva.
El inhibidor se une cuando esta formado el complejo enzima sustrato.
INSERTAR GRAFICO

Se observan dos curvas. Una con presencia de un inhibidor (En color rojo) y otra
sin presencia de un inhibidor (En color negro).
Vmáx disminuye. Dsiminuye de Vmáx 1/4= 0,25 a Vmáx 1/2= 0,5.
KM disminuye.
Inhibición atípica. Como disminuye el KM la afinidad de la enzima por el sustrato
aumenta entonces le cuesta largar el producto.

2. Alostéricas, reguladoras o cooperativas.

Curva sigmoidea (Con forma de s).
Características:
Todas las enzimas que tengan este tipo de cinética son enzimas muy
grandes, óseas proteínas con varios complejos que se llaman
oligómericos (Muchos complejos) y que su función es regular la vía
metabólica en la que estén. Son enzimas reguladoras, y para cumplir su
función requieren de moduladores alostéricos.
Estos moduladores pueden ser:
• Moduladores positivos.
Disminuye el K 0,5, aumenta la afinidad de la enzima por el
sustrato.
Activan una vía metabólica, por lo tanto son activadores de
la enzima.
Vmáx no cambia en ninguno de los dos casos.
Desplazan la curva hacia la izquierda.

• Moduladores negativos.

Aumentan el K 0,5, disminuye la afinidad de la enzima por el

sustrato.

15 | P á g i n a
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Natalia Nuñes
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Es una forma de regulación, que una vía se haga más lenta

agregando moduladores negativos, por lo tanto, son
inhibidores de la enzima.
Vmáx no cambia en ninguno de los dos casos.
Desplazan la curva hacia la derecha.

La mitad de la Vmáx estaría a la altura donde estaría el interruptor. Al ubicar el

valor que le corresponde de la concentración de sustrato encontramos lo que
llamamos el K 0,5, que es lo mismo que el KM pero sirve para diferenciar cuando
se está hablando en una enzima alostérica de una enzima en Michaelis-Menten.
Es igual y la definición es igual que KM.

Terminó.

16 | P á g i n a