PRACTICA No.

4 – FACTORES FISICOS Y QUIMICOS EN LA ACTIVIDAD

ENZIMATICA

PROCEDIMIENTO.
1. Ingresar al simulador de ensayo de actividad enzimática, mediante el enlace
de la Figura1.
2. Antes de iniciar el desarrollo de la práctica da clic en el fundamento del
ensayo. Figura 2, parte inferior derecha de la pantalla (recuadro rosado en la
imagen).

Figura 1. Simulador de ensayo de actividad enzimática disponible en línea

Consultado el 13 de abril de 2020 y disponible en línea:
http://biomodel.uah.es/lab/abs/activ_enz.htm

Figura 2. Simulador de ensayo de actividad enzimática disponible en línea

Consultado el 13 de abril de 2020 y disponible en línea:
http://biomodel.uah.es/lab/abs/activ_enz.htm

3. Construya una tabla en Excel o en un libro de notas como la tabla que se

observa en la parte derecha del simulador, si desea puede utilizar esta tabla e ir
agregando filas durante la simulación del experimento.
4. Seleccionar 3 temperaturas en un rango de 30◦C a 80◦C y seleccionar 3 pH en
el rango de 3 a 11, en lo posible buscar que tanto las temperaturas como los pH
tengan representantes en toda la amplitud de los rangos. Para seleccionar el pH
o la temperatura debe desplazar los controles hacia arriba o hacia abajo.

5. Construir una tabla donde realice las combinaciones de cada temperatura con
cada pH como se indica en la tabla 1, si no la construye {o antes de iniciar el
experimento y no va a usar la tabla del simulador). Al final deberá tener 9
combinaciones entre las dos condiciones a evaluar (reemplace las temperatura 1
a 3 y pH 1 a 3 seleccionados por usted en el punto 1), y registre la absorbancia
obtenida al realizar la simulación.

6. Con cada una de las combinaciones realizar la simulación siguiendo los 4

pasos que le indica el simulador.

Combinaciones pH T (ºC) A540 - Absorbancia

4 30 0,003
1 7 30 0,035
8 30 0,053
4 40 0,003
2 7 40 0,032
8 40 0.047
7. Registre en la tabla después de cada simulación el valor de la absorbancia
obtenido en la pantalla del espectrofotómetro en la casilla de la combinación
4 45 0,009
correspondiente. 3 7 45 0,096
8 45 0,144
4 50 0,015
4 7 50 0,164
8 50 0,245
4 55 0,036
5 7 55 0,393
8 55 0,587
4 60 0,052
6 7 60 0,567
8 60 0,848
4 70 0,075
7 7 70 0,817
8 70 1,221
4 75 0,072
8 7 75 0,781
8 75 1,168
4 80 0,059
9 7 80 0,639
8 80 0,955
8. Una vez realizados todos los ensayos simulados grafique la absorbancia en
función de la temperatura o del pH (debe tener presente que deberá realizar 9
gráficas, ya que por ejemplo, con cada uno de los pH siempre tendrá 3 datos te
temperatura donde variará la absorbancia y lo mismo sucederá cuando grafique
siendo constante la temperatura por cada temperatura tendrá 3 pH con
absorbancia variable).
9. A partir de estas gráficas determine la temperatura y el pH óptimo para la
actividad de la enzima 6-O-α-L-ramnosil-D-glucosidasa, justifique la respuesta.

Temperatura: 70 º
pH: 8
Estos son los valores óptimos para la actividad enzimática pues que con ellos el
valor de absorbancia es el más alto y esto permite que la enzima realice su
función.