PRÁCTICAS DE ENZIMAS: ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE

LA ALFA-AMILASA SALIVAL

Introducción:
La saliva es una secreción que contiene entre otras cosas, mucoproteínas y alfa-amilasa. Estas
últimas son las encargadas de la digestión del almidón, sustancia de reserva mayoritaria de las
plantas y fuente muy importante de carbohidratos para los animales.
Uno de los métodos más importantes para conocer el mecanismo de una enzima, es mediante el
estudio y caracterización de su cinética, es decir, el estudio de las velocidades de reacción y la
forma en que cambian en respuesta a cambios en los parámetros experimentales como la
temperatura o la concentración de sustrato. Así, esta práctica tiene por objeto la determinación
experimental de la cinética de la alfa-amilasa secretada en la saliva humana.

Objetivos:

 Familiarizarse con las propiedades de los enzimas y observar la actividad de la alfa-

amilasa salival.
 Relacionar los resultados obtenidos con la cinética de las reacciones enzimáticas.
 Entender la aplicación del método científico en al resolución de problemas.

Material y recursos necesarios:

Micropipeta de 200 a 1000 microlitros.
Tubos de ensayo
Vaso de precipitados
Espectrofotómetro.
Celdas para espectrofotómetro. (¡Por favor mucho cuidado con ella que son caras!)
Cronómetro.
Reactivos.
Lugol: 1 gr de yodo + 2 gr. de yoduro de potasio disueltos en 300 ml. de agua destilada
y filtrados.
Suspensión de almidón (almidón soluble Panreac): 100 mg /ml, 50 mg/ml, 25 mg/ml, 10 mg/ml
y 5 mg/ml.

Procedimiento:

1. Preparar una disolución de 100mg/ml de almidón soluble y llena 5 tubos, uno con esta, y los
demás, realizando en cada uno las diluciones siguientes (50 mg/ml, 25 mg/ml, 10 mg/ml y 5
mg/ml) a partir de la primera disolución. No olvides rotular los tubos.

2. Obtener por cada equipo 1 ml de saliva y colocarla en un tubo de ensayo rotulado. Cuando se
tome la alícuota de saliva debe tomarse del fondo del tubo de forma que no tenga espuma.

5. Preparar la mezcla de reacción dentro de un tubo, agitar, y lo más rápido posible colocarla en
la cubeta del espectrofotómetro. Las mezclas de reacción se prepararán de acuerdo a la tabla que
se presenta a continuación.

7. Para la lectura de cada tubo se procede de la siguiente manera:

PRÁCTICAS DE ENZIMAS: ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE
LA ALFA-AMILASA SALIVAL

Con el espectrofotómetro ajustado a 660 nm (o 505 nm), introducir la cubeta en el

espectrofotómetro, tomar la lectura inmediatamente (esto representa el tiempo cero) y después
medir cada 30 segundos hasta completar 3 minutos por lo que de cada tubo se tendrán las
siguientes lecturas: 0, 30, 60, 90, 120 y 180 segundos.

Cuestiones para los alumnos:

- Buscad información sobre el enzima alfa-amilasa salival: ¿Qué reacción cataliza?¿Dónde se

encuentra? ¿Por qué es tan importante?

- ¿Qué factores creéis que pueden influir en la actividad de la alfa-amilasa? Emitid una hipótesis
sobre la influencia de uno de esos factores sobre la actividad enzimática de la catalasa ¿Cuál es
la variable dependiente? ¿Y la independiente? Cómo se podría diseñar un experimento similar al
anterior pero que permita comprobar la hipótesis que has emitido. Para ello tened en cuenta que
no debéis modificar más de una variable independiente en cada experimento.

- Calcula la concentración de almidón final en cada mezcla de reacción.

Sabiendo que Abs= cte. [ ] y conociendo la Abs a tiempo 0 para cada muestra y la concentración
de almidón a la que corresponde, calcula todos las demás concentraciones de almidón.
- Elabora un informe sobre los resultados de tu investigación en el que se reflejen los siguientes
apartados:
a) Problema a investigar
b) Hipótesis planteadas (una o varias)
c) Diseño experimental realizado que incluya material y métodos
d) Resultados obtenidos (organízalos en tablas y gráficas, expresa la velocidad de reacción en
mg de producto/min)
e) Conclusiones, comenta los resultados y relaciónalos con los visto en clase sobre las enzimas.

Este informe puede tener formato de presentación, vídeo, animación, artículo de divulgación,
póster científico, etc.