1. En concreto. ¿Experimentalmente cómo se mide la actividad de una enzima?

¿qué es una
unidad internacional de inulinasa?

La actividad enzimática se expresa en términos de unidades de actividad. La definición de

unidades de actividad ha sido bastante arbitraria lo que dificulta muchas veces el análisis
comparativo de los resultados obtenidos por diversos obtenidos. En general se ha adoptado
la definición propuesta por la UI de bioquímica. Se define la UI como la cantidad de enzima
que cataliza la transformación de un micro mol de sustrato por minuto
las enzimas son catalizadores pero bioquimicos y su actividad se mide
relacionando la concentracion de su sustrato y la concentracion de su producto.
Esta relacion es la que nos indica que tan activa está una enzima.
Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que
cataliza la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad
específica es el número de unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg
prot) o por mililitro de disolución (U/ml).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad

de actividad enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de
sustrato por segundo.

2. En la determinación experimental en el rango de linealidad de la inulinasa soluble, porque

se tuvo que ensayar a diferentes diluciones de extracto crudo enzimático? ¿Cómo
preparas un blanco para el sustrato y un blanco para extracto crudo enzimático

esta determinación experimental consiste en fijar tiempos cortos, para ver con que
concentraciones de enzimas trabajar, que serán aquella q tengan un comportamiento
lineal, generalmente los tiempos son menores a 30`, pues así sabes q concentración de
enzima usar. Se hizo varias concentraciones para poder ver su comportamiento , como
reaccionaba en cada concentración en un tiempo corto y determinado . 5 tubos de 2.9 ml
sacarosa+ 100ul concentrado enzimático inulinasa
BE:2.9 ml tampon +100 ul enzima
BS: 2.9 ml sacarosa +100 ul tampon

3. Porque es importante e indispensable determinar experimentalmente los valores de los

parámetros cinéticos de una enzima soluble o inmovilizada? ¿cómo se denomina tales
parámetros cinéticos?

Para predecir el comportamiento del sistema enzimático. , Vmax y Km, Se puede

determinar utilizando las representación de elineweaver-burk, esta representación se
realiza con las inversas de los valores de V y s

La importancia del estudio de la cinética enzimático reside en dos principios básicos. En

primer lugar, permite explicar cómo funciona una enzima, y en segundo lugar, permite
predecir cómo se comportará esa enzima in vivo. Las constantes cinéticas definidas
 anteriormente, Km y Vmax, son los pilares fundamentales a la hora de intentar comprender
el funcionamiento de las enzimas en el control del metabolismo.
La velocidad V indica el número de reacciones por segundo que son catalizadas por una
enzima , las enzimas pueden ser caracterizadas por la concentración de sustrato a la cual la
velocidad de reacción es la mitad de la velocidad máxima. Esta concentración de sustrato
se conoce como constante de Michaelis-Menten (KM). Es la constante de disociación (la
afinidad del complejo enzima-sustrato (ES) por el sustrato). Valores bajos indican que el
complejo ES está unido muy fuertemente y raramente se disocia sin que el sustrato
reaccione para dar producto.

4. Una enzima está siendo analizada una concentración inicial de sustrato de 106 M CON UN
K de 3 x 10 -9 M y en un minuto de 2% del sustrato pasa a producto. Determina cual es la
velocidad máxima expresada?

5. Con los datos de tu experiencia del biocatalisis si se hubiera calculado los parámetros o
constantes cinéticas para la inulinasa inmovilizada ¿podrías inferir que sus valores
hubiesen sido equivalentes o semejantes a los obtenidos con la inulinasa soluble? Explica
concretamente por que

No. Debido a que siempre existe una disminución del poder catalítico de la enzima cuando
se realiza la inmovilización, esto puede ser debido a diversos factores como: restricciones
difusionales.

No son semejantes: porque los parámetros cinéticos de la enzima soluble son mayores
que en la enzima inmovilizada, la inmovilizada puede limitar el acceso del sustrato al
centro activo de la enzima, volviendo la actividad.

Efecto partición, cuando la [ ] del sustrato es diferente en la superficie del soporte.

 6. Que métodos de inmovilización de la inulinasa se utilizó en la experiencia de biocatalisis? ¿
qué ventajas se lograros con la enzima inmovilizada respecto a trabajar con la enzima
soluble

Ventajas

 Facilidad para parar rápidamente la reacción.

 El producto no se mezcla con la enzima.
 Usos repetitivos.
 Posibilidad de trabajar en continuo.

Desventajas

 Alteración de la conformación de la enzima respecto a su estado nativo.

 Pérdida de la actividad de la enzima durante su inmovilización.
 Resulta ser más caro.
ventaja desventaja

 Generalmente aumenta la  La rapidez de reacción es función

actividad dentro de las células del tamaño de partículas y la
inmovilizadas, sin embargo es densidad celular.
mucho menor que la actividad de  Es mas costoso
células suspendidas
 Fase heterogenea
 Retiene la capacidad catalítica en el
tiempo
 El producto que se obtiene es mas
limpio

7. Para que le ha sido útil obtener el perfil X versus keS/K para el reactor por lotes con la
inulinasa inmovilizada

para determinar la concentración de sustrato en producto en función de la velocidad máxima de

reacción, el tiempo y la constante de saturación, pues representa un comportamiento casi lineal
en comparación a las demás curvas características de un reactor enzimático. Permite elaborar un
esquema que predice el comportamiento real de un reactor agitado a diferentes concentraciones
de sustrato.
8. Los resultados de un estudio comparativo del efecto de los valores de pH y T respecto a la
actividad de la inulinasa libre e inmovilizada se muestran en las figuras 1 y 2
respectivamente, escriba correcta y sucintamente lo que expresan