INFORME PRÁCTICA DE LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

PRÁCTICA No. 8 – SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES POR

CROMATOGRAFÍA DE PAPEL
Ana Gabriela Bastidas Campaña, Bibiana Portillo, Eliana Rocío Pantoja;
Portillo, Sharon Daniela Grisales Yela, Ofir Liliana Pastas Caipe.

Universidad Nacional Abierta y a Distancia. Escuela de Ciencias Básicas,

Tecnología e Ingeniería - ECBTI. Programa de Química. CEAD: Pasto,
Pasto- Colombia. Tutor de laboratorio: Mag.GENNY MERA CORDOBA
geny.mera@unad.edu.co

Pasto, Laboratorios
Fecha de Noviembre 10 de CEAD de
Universidad de Nariño
entrega 2019 entrega
(Pasto), Calle 18 Cr. 50
Grupo
Correo electrónico Correo electrónico
Estudiante Código de
estudiante campus
tutor campus
Ana Gabriela geny.mera@unad.edu.co
Bastidas angabas@hotmail.com 67010421 1
Campaña
Bibianasantarosa93@hot
geny.mera@unad.edu.co
Bibiana Portillo 1004635473 1
mail.com

Eliana Rocío Elianapantoja1997@gmail

geny.mera@unad.edu.co
1086019556 1
Pantoja Portillo .com

Sandro Antonio saorbesm@unadvirtual.ed

geny.mera@unad.edu.co
1084846503 1
Orbes Mejía u.co

Sharon Daniela sdgrizalesy@unadvirtual.

geny.mera@unad.edu.co
1085315089 1
Grisales Yela edu.co

Ofir Liliana geny.mera@unad.edu.co

Ofirlilianap.hotmail.com 59797243 1
Pastas Caipe
 1. INTRODUCCIÓN

Los colores de los alimentos se deben a distintos compuestos,

principalmente orgánicos, algunos que se producen durante su manejo y
procesamiento y otros que son pigmentos naturales o colorantes
sintéticos o añadidos. La mayoría de los alimentos vegetales y animales
le deben su color a sus correspondientes pigmentos, que son sustancias
que tienen función biológica muy importante en el tejido. Éste es el caso
de la clorofila y la fotosíntesis y el de mioglobina y al almacenamiento
muscular del oxígeno, entre otros.
En Química existe una técnica instrumental para separar, aislar, purificar
e identificar los componentes de una mezcla compleja, tal técnica recibe
el nombre de cromatografía. La cromatografía es una técnica de
separación de una mezcla de solutos en función de la diferente velocidad
con la que se mueve cada uno de ellos a través de un medio poroso,
arrastrado por un disolvente en movimiento

2. OBJETIVOS

2.1. GENERAL

Desarrollar la práctica para extraer diferentes pigmentos, de productos

vegetales en este caso de la espinaca para su respectiva identificación.

2.2. ESPECÍFICOS

 Determinar los distintos componentes de una sustancia a través

del método de la cromatografía

 Analizar la influencia del solvente en la cromatografía.

3. MARCO TEÓRICO

Separación de mezclas: La separación de mezclas, contempla diversas

técnicas basadas en las propiedades que poseen los componentes de la
mezcla y a su vez si se encuentran en diferentes estados de la materia,
entre esos se encuentra la cromatografía que posee diversas técnicas,
una de las primeras y más efectiva es la cromatografía en papel, esta
técnica es efectiva debido a que la separación se produce al momento en
el que una de las sustancias líquidas asciende por un papel poroso, a
distintas velocidades por diferencia de solubilidad y velocidad de difusión,
conteniendo dos fases representativas, la fase móvil y la fase
estacionaria. La fase móvil se caracteriza por tener carácter polar, como
el metanol y/o etanol. La fase estacionaria se caracteriza por tener
carácter no polar, como la remolacha, la espinaca, la zanahoria, el repollo
morado y la tinta, entre otros. En la cromatografía, es la fase móvil la
cual asciende por el papel poroso para así producir el mayor o menor
avance de los componentes de la mezcla, pues cuanto más solubles los
componentes de la fase estacionaria, mayor desplazamiento tendrán y
entre más anchas sean las marcas mayor abundancia en la mezcla, esto
es posible de observar gracias a que normalmente la fase móvil, o los
solventes son incoloros. Los pigmentos se caracterizan por absorber luz y
presentar color por el reflejo de ciertos espectros de luz; en los vegetales
las hojas, los tallos y las raíces contienen diversos pigmentos entre ellos
las quinonas o flavinas (colorante de las flores), La espinaca, que es un
vegetal, cuenta con los siguientes pigmentos: Clorofila, es el pigmento
que lleva a cabo la fotosíntesis, esta absorbe toda la luz exceptuando la
de color verde, pues se refleja en el color verde característico de la
espinaca; Cuenta con la “clorofila a” y la “clorofila b”, la primera es de
color verde azulado y se encarga de la fotosíntesis, mientras la segunda
es un pigmento de apoyo. Carotenoides: estos se descomponen en el
cuerpo humano, al ser consumidos, y se convierten en vitamina A. Se
considera esencial para la salud; en las espinacas el pigmento beta
carotenoide es el más abundante. Estos pigmentos fotosintéticos utilizan
la energía solar que absorben en su estructura molecular y cumplen
funciones dentro de la célula, la más importante es llevar a cabo la
fotosíntesis, es decir, que es fundamental para la existencia de los
vegetales.
 4. MATERIALES, REACTIVOS Y PROCEDIMIENTO

Separación de Pigmentos
Vegetales por Cromatografía de
Papel

filtrar en un cortar una tira

triturar embudo con de papel
cuidadosam papel filtro filtro, con el colocar el
Seleccionar capilar colocar papel con
Colocar las ente hasta y recoger 3
hojas de Adicionar en en el papel de pigmento
hojas en un que el ml en un
espinaca, un Beaker cromatografia dentro del
mortero liquido tubo de
lavar quitar de 50 ml 1.5 entre 4 a 6 beaker con
junto con 10 adquiera ensayo gotas de metanol,
los nervios y mL de
ml de eter una pigmento; esperar un
venas de las Metanol
etilico. coloracion marcar con tiempo y
hojas,
verde lapiz a 2 cm observar
intensa del borde del
papel

Desarrollo del procedimiento:

 Lavamos las hojas de espinacas, retiramos los nervios y las

colocamos en un mortero, junto con el solvente extractante en este
caso utilizamos 10 ml de éter etílico.

 Trituráramos la mezcla hasta que las hojas se decoloraron y el

disolvente adquirió un color verde intenso.

 Filtramos con un embudo con papel de filtro y recogimos 3 ml de la

solución en un tubo de ensayo.
 Colocamos 1.5 ml de metanol en un beaker de 50 ml
 Cortamos una tira de papel filtro y con un capilar colocamos en el
papel de cromatografía 4 gotas de solución del pigmento.
 Introducimos el papel filtro con el pigmento dentro del beaker con
el metanol.
 Esperamos aproximadamente 15 minutos
  La muestra de pigmento ascendió aproximadamente 2 cm de su
punto de origen, es decir llego al centro de la tira.

Registro Fotográfico:
 RESULTADOS Y CÁLCULOS

RESULTADOS Y CÁLCULOS PARA EL INFORME DE LABORATORIO

1. Registre los resultados

Se trituraron las hojas de espinaca con ayuda de un mortero y pistilo, se

obtuvo una mezcla de una tonalidad verde muy intensa la cual indica que
hay varios tipos de clorofila presentes; con la ayuda de un capilar se
procedió a tomar ;2 gotas de solución de pigmentos y se fueron añadiendo
al papel cromatografía a una distancia de 2 cm del borde del papel se
realizó una línea con lápiz; al paso de un tiempo los pigmentos
adquirieron una coloración verde amarilla lo que indica una uniformidad
en la clorofila presente en la muestra. Después se introdujo el papel
cromatografía al interior de un vaso de precipitado etanol tapado con un
vidrio de reloj y se dejó actuar por un periodo 15 minutos
aproximadamente. Se marcaron los tipos de clorofila presentes en la
muestra analizada y un sistema de referencia para validar el resultado

b. Análisis de Resultados

Los cloroplastos deben su color verde a un pigmento denominado

clorofila. Sin embargo, lo que en realidad existe entre los cloroplastos es
una mezcla de pigmentos representados principalmente por dos tipos de
clorofila a y b1, por caroteno y xantofila, todas estas sustancias presentan
un grado diferente de solubilidad, lo cual permite su separación cuando
una solución de la misma asciende por capilaridad por una tira de papel
poroso, ya que las mas solubles se desplazaran a mayor velocidad, pues
acompañaron fácilmente al disolvente a medida que este va ascendiendo.
De esta forma al cabo de un cierto tiempo a lo largo del papel filtro se
irán situando los distintos pigmentos, tanto más desplazadas más solubles
serán los pigmentos a los que pertenecen y tanto más anchas mayor será
la abundancia de estos en la mezcla. Se pudo observar como la clorofila
b permaneció más fija sobre el papel debido a que es menos soluble en
estas sustancias a diferencia de la clorofila b y la xantofila y carotenos.
2. Indague sobre el uso y los diferentes tipos de cromatografía:
La cromatografía describe un procedimiento químico en el que se separa
una mezcla en su sus componentes individuales mediante una fase móvil
y una fase estacionaria. La fase estacionaria consta, según el
procedimiento, de materia sólida o un líquido, y la fase móvil de un líquido
o gas. La cromatografía usa diferentes procedimientos, que según el
campo de aplicación tiene sus ventajas y desventajas. Los procedimientos
más importantes son la cromatografía en papel cromatografía en capa
fina, la cromatografía en columna y la cromatografía de gases; Las
aplicaciones prácticas de la cromatografía se encuentran por ejemplo en
la producción, donde se usa la cromatografía para la limpieza y
aislamiento de sustancias. Por otro lado, en la analítica química se usa la
cromatografía para separar mezclas en compuestos homogéneos. La
cromatografía juega un papel importante en muchos sectores, como la
química orgánica, la bioquímica, la química inorgánica, la química
ambiental y la química alimenticia.

Cromatografía en papel: La cromatografía en papel pertenece a la

categoría "Cromatografía de líquidos". La fase estacionaria se compone
de una cinta de papel introducida verticalmente en un recipiente de cristal
y la fase móvil de un líquido. El movimiento de la fase móvil se produce
debido a la fuerza capilar. Un campo de uso de la cromatografía en papel
es el análisis de mezclas.

TIPOS DE CROMATROGAFRIA

Cromatografía en capa fina: La cromatografía en capa fina pertenece

a la categoría "Cromatografía de líquidos" y el principio de funcionamiento
es el mismo que el de la cromatografía en papel. La diferencia entre
ambos procedimientos se encuentra en la fase estacionaria, que en el
caso de la cromatografía en capa fina se compone de materia pulverizada
como la alúmina, gel de sílice o celulosa que se sitúan sobre plaquitas de
vidrio. Las ventajas de la cromatografía en capa fina son un tiempo de
ejecución rápido y una alta muestra de comprobación.

Cromatografía en columna: La cromatografía en columna pertenece a

la categoría "Cromatografía de líquidos". En la cromatografía en columna
la fase estacionaria se compone normalmente de un gel de sílice o alúmina
pulverizado que se introduce en un tubo de vidrio y este se rellena con un
disolvente (fase móvil). Con este procedimiento se dirige la prueba junto
con la fase móvil a través del tubo de vidrio, lo que produce que se separe
la mezcla y los componentes vayan saliendo sucesivamente. Campos de
aplicaciones de la cromatografía en columna son por ejemplo la limpieza
de preparados.
Cromatografía de gases: En la cromatografía de gases se usan dos
diferentes procedimientos.
1. La cromatografía de gas líquido
2. La cromatografía de gas sólido
El procedimiento más usado es la cromatografía de gas líquido. En este
caso se introduce el material portador (por ejemplo, aceite de silicona) en
un tubo espiral con un diámetro de 0,1 a 5 mm y una longitud de hasta 5
metros. El gas a analizar fluye junto al gas portador (nitrógeno, helio,
argón) a través de la espiral. En un extremo de la espiral un detector de
conductividad térmica mide las oscilaciones de temperatura. Según las
oscilaciones de temperatura es posible determinar los componentes de la
mezcla.
3. Responda:
a. La solubilidad en alcohol de los pigmentos es, de mayor a menor:
carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofilas. Indicar qué pigmento
corresponde a cada banda.

b. ¿Por qué se emplea éter etílico para extraer la clorofila?

La molécula de la clorofila tiene una compleja estructura, compuesta por

cadenas orgánicas, que le confiere un elevado carácter “hidrófobo”. En
consecuencia se debe realizar la extracción con un solvente orgánico
donde la clorofila tenga una elevada solubilidad como es el caso del éter
etílico pero también es muy soluble en otros solventes orgánicos

c. ¿Qué pigmentos son los más abundantes?

La clorofila la cual le da el color verde intenso

5. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Por medio de la macerada de las hojas de espica se inicia un rompimiento

del tejido vegetal, con la adición del alcohol etílico al 96% se realiza una
extracción de los distintos componentes que se encuentran contenidos en
las células vegetales de la espinaca. Por medio de la impregnación del
papel con la solución se adsorbió una parte de estos compuestos. Por
medio de la evaporación ascendente se muestra la distribución de los
colores tales como verde oliva, verde intenso, amarrillo y por ultimo color
naranja intenso

6. CONCLUSIONES

 Por medio de la práctica se logró identificar que la espinaca contiene

distintos tipos de clorofila denominadas como (a) y (b), observadas
por medio de la coloración que se distinguió en el papel. que la
clorofila-a tiene la característica del (verde intenso), clorofila-b del
(verde oliva).
 los pigmentos fotosintéticos pueden extraerse por diversos medios,
en este caso de los tejidos debido a la solubilidad en disolventes
orgánicos como el éter, debido a la capacidad de romper los enlaces
de los tejidos vegetales.
 Los carotenos son los encargados del transporte de la luz a la
clorofila el cual son los encargados de la transformación de la luz
en energía y/o encargados de la fotosíntesis con la ayuda de las
xantofilas.
 El pigmento mayoritario en el extracto es la clorofila a y b. También
existen otros pigmentos como el amarillo (xantofila) y anaranjados
(carotenos).
 Esto pigmentos se encuentran normalmente ocultos por la
abundancia de la clorofila.
 Estos pigmentos actúan como accesorios, ayudando a la clorofila
en la captación de la luz.

7. REFERENCIAS

Atkins, P. W. (2005). Principios de química: Los caminos del descubrimiento. Tercera edición.
Madrid. España: Médica Panamericana.

Lamarque, A. (2008). Fundamentos teórico-prácticos de química organica. Cordoba. Argentina:

Encuentro Grupo Editor.

Rodes, R. (2006). Manual de prácticas de fotosíntesis. México: Las prensas de ciencias.