BIOQUMICA METABLICA

MOMENTO PRCTICO

ELABORADO POR:

GLADIS ELENA JARAMILLO CORREA. C.C.43714242

ALBA ESTELLA SANCHEZ ARISMENDI C.C. 43482132

SANTIAGO CALLE C.C.97101213629

VIVIANA CLAVIJO

GRUPO: 352001_49

TUTORA: HERNAN ALONSO RUIZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS AGRCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO

AMBIENTE.

MEDELLIN

2015
 INFORME PRCTICA BIOQUMICA METABLICA

OBJETIVO DE LA PRCTICA
Reconocer y cuantificar Biomolculas presentes en el metabolismo de plantas y animales

JUSTIFICACIN DE LA PRCTICA

Bioqumica Metablica es la ciencia que estudia todo lo relacionado con la estructura y

actividad de las diversas biomolculas, en sus respectivas vas metablicas, que forman
parte de la dinmica celular de organismos animales y vegetales, presentes en todo tipo de
agro ecosistemas; por ende, permite comprender la estructura y cintica de los compuestos
que intervienen en las diversas reacciones bioqumicas metablicas aerbicas y
anaerbicas. As mismo, teniendo en cuenta que es una ciencia terico experimental que
posee conceptos, leyes, principios y teoras cientficas, se constituye en un pilar
fundamental para la interpretacin significativa de las mltiples reacciones biomoleculares
que gobiernan los diferentes procesos exergnicos y endergnicos, enfocados a mantener
las funciones vitales de sistemas auttrofos y hetertrofos, los cuales interaccionan
permanentemente con el fin de garantizar la bioactividad de nuestro planeta. En
consecuencia, la intencionalidad del curso se centra en el estudio de la bioqumica
estructural, biotermodinmica, actividad molecular y bioqumica metablica aplicada,
importantes en lo bioactividad de los sistemas biolgicos, de tal forma que puedan ser
interrrelacionados e incorporados por los estudiantes en su dimensin cognitiva, para lograr
un verdadero aprendizaje significativo autnomo de la bioqumica metablica.

PRACTICA I. ACTIVIDAD URESICA EN MUESTRAS DE ORIGEN

BIOLGICO

No se realiz esta prctica por falta de reactivos.

PRCTICA II. CARBONO ORGANICO, MATERIA ORGNICA Y CAPACIDAD
AMORTIGUADORA () DE SUELOS

Introduccin

La capacidad amortiguadora, se refiere al potencial qumico que tienen los sistemas

edficos para regular y controlar su pH, cuando son sometidos a procesos de acidificacin
alcalinizacin; dicha regulacin se da por la presencia de sistemas amortiguadores
biolgicos, existentes en la materia orgnica e inorgnica del suelo.

Objetivos

Cuantificar la capacidad amortiguadora de muestras de suelos mediante tcnicas

potenciomtricas en presencia de los indicadores adecuados.

NOTA: La prctica tena como objetivos realizar un balance de materia orgnica en

muestras de suelo, a partir de la determinacin del carbono orgnico por mtodo de
titulacin volumtrica y tcnica espectrofotomtrica, adems cuantificar la capacidad
amortiguadora de muestras de suelo mediante tcnicas potenciomtricas y de titulacin
volumtrica pero por falta de algunos reactivos requeridos solo se pudo realizar la
cuantificacin de la capacidad amortiguadora de muestras de suelos mediante tcnicas
potenciomtricas.

Materiales

Erlenmeyer de 125mL , pipetas graduadas de 10mL, esptula metlica , agitador de vidrio,

probeta graduada de 100mL , beaker de 250mL, Potencimetro, balanza analtica, celdas,
embudos, papel filtro, muestras de suelo.

Reactivos

NaOH 0,6N, agua destilada y solucin buffer fosfato

Procedimiento

Capacidad amortiguadora (), Mtodo Potenciomtrico

 Alistar 4 beakers erlenmeyers y rotularlos del 1 al 4
Al primer frasco y segundo frasco, adicionar +/- 20 gramos ( Wm ) de suelo y 40
mL de agua destilada , agitar con varilla de vidrio en agitador magntico por
5min, introducir el electrodo del potencimetro, esperar 60 segundos y observar el
pH, registrar como pH1 .
Posteriormente , agregar 5 mL de NaOH 0,1N , agitar de nuevo por un minuto y
volver a medir el pH2
En el tercer y cuarto beakers, adicionar 5mL de agua destilada y 5 mL de solucin
buffer pH 7,0, respectivamente, introducir el electrodo del potencimetro esperar 60
segundos y observar el pH, registrar como pH1 . (en la gua referan 20 mL, se hizo
con 5 mL ya que no haba suficiente solucin buffer para todas las pruebas)
Posteriormente , agregar 5 mL de NaOH 0,1N , agitar de nuevo por un minuto y
volver a medir el pH2

Registrar todos los valores en la tabla de datos correspondiente.

MUESTRA DE SUELO 1

Suelo tomado de la vereda Betania, El Carmen de Viboral, Antioquia.

Altura sobre el nivel del mar 2150m.

Suelo perteneciente a una huerta casera al que se le ha aplicado Roca fosfrica, Micorrizas
y compost de origen vegetal.

MUESTRA DE SUELO 2

Suelo tomado del corregimiento de San Jos, San Roque, Antioquia.

Altura sobre el nivel del mar 870m.

Suelo perteneciente a un potrero, actualmente tiene ganado en pastoreo y no ha recibido

fertilizacin.

RESULTADOS

TABLA 1. DATOS POTENCIOMETRICOS PARA CAPACIDAD

AMORTIGUADORA DE SUELOS
MUESTRAS PESO (Wm) VOLUMEN pH1 pH2
(mL)
Suelo 1 20 40mL 7,66 10,53
Suelo 2 20 40mL 4,9 11,4
Agua destilada 5 mL c/u 10 mL 10,7 12,5
+ Solucin
Buffer

Clculos

Capacidad amortiguadora Mtodo Potenciomtrico

Capacidad Amortiguadora con respecto a NaOH, para muestras de suelos

0,6 40
= 1000
(2 1)

5 0,6 40
. = 1000
(10,53 7,66) 20

120
1. = 1000
57,4

1. = 2090

5 0,6 40
. = 1000
(11,4 4,9) 20

120
2. = 1000
130

2. = 923,076
Capacidad amortiguadora () Con respecto a NaOH, para muestras de agua y solucin
buffer.

0,6 20
= x 1000
(2 1) 10

5 0,6 10
= x 1000
(12,5 10,7) 10

30
= x 1000
18

= 18000

REGISTRO FOTOGRFICO

Pesaje de muestra de suelo Potenciometro

Reactivo utilizado NaOH0,6 N Toma de pH.

III. DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES (CNE),
EN FORRAJES, POR EL MTODO DE FENOL-CIDO SULFRICO:

Introduccin

Los carbohidratos no estructurales estn formados por el almidn y azcares solubles. Son
degradados por la flora amilo ltico y dan AGV con predominio del propinico, que es
utilizado como precursor de la glucosa. Los CNE son una fuente de energa rpida para
La catalasa como biocatalizador de origen proteico, es una enzima xido-redactase que
participa en la degradacin del perxido de hidrgeno (H2O), hasta Oxgeno molecular
(O2) y agua (H2O).

Objetivo:
Determina la cantidad de carbohidratos totales No estructurales, basndose en su contenido
de almidones hidrolizables y azcares solubles.

PROCEDIMIENTO

Materiales y reactivos

- vaso de precipitados

- Beaker

- espectrofotmetro

- tubos de plstico

- bao termosttico

- micro pipetas y puntas

- 0.9% NaCl

- pipetas de vidrio y pipeteado manual

- 0.2% HClO4

- tubos de espectrofotmetro
- solucin de glucosa estndar 0.2mM

1.1 Extraccin:

Pesar +/- 2.0g de muestra en balanza analtica y registrar como: (Wm),

depositarla luego en un vaso de precipitado y agregar 50 ml de solucin de HCl
0,6N. Agitar constantemente con la varilla de vidrio durante 3 minutos.

Llevar el beaker con la solucin al bao termostatado y calentar a 90C, durante

20 min.

Dejar enfriar por 5 min y filtrar sobre papel filtro. Medir el volumen del
filtrado(Vf) y pasar 5mL a un tubo de ensayo, adicionar a ste 5mL de NaOH
0,6N, agitar por 15 segundos, tapar y rotular as: FFCNE: Filtrado de forraje
para carbohidratos no estructurales.

Este experimento se realiz con forraje, pasto y concentrado.

MATARRATON

El Matarratn (Gliricidia sepium) es una especie con alto potencial de produccin de

biomasa para el consumo y elevado valor nutritivo que se presenta como una alternativa
prctica y econmica para incrementar la productividad animal y contribuir, de esta
manera, a disminuir los costos de produccin.

Esta fue trada del Municipio SAN ROQUE

Corregimiento san Jos del Nuz

Altura sobre nivel del Mar 870

Extrado de un cerco vivo sin abonar reproducido por regeneracin natural de suelos.
Observacin de las reacciones

Cuando se agreg 50 ml de solucin de HCl 0,6N al contenido de matarraton macerado se

observ un cambio inmediato del color material vegetal la cual cambio de verde a caf y
pareca que se empezaba a desintegrar la partculas, cuando se llevo a una temperatura de
90 rpidamente empez a hacer burbujas como si estuviese cocinando el material y
empez a oscurecer la solucin.

PASTO BRACHARIA

Se trata de un cultivo adaptado a condiciones tropicales calientes y hmedas, donde las

precipitaciones pluviales sobrepasan los 1,000 mm. Se adapta bien a suelos cidos e
infrlites, sin embargo, posee gran potencial de respuesta con mejoras del nivel de fertilidad
del suelo. Tiene la capacidad de formar pastizales que toleran el pisoteo y pasteo intenso y
continuo.

Procedencia: Corpoica

A.S.N.M: 870

Cultivado para pastoreo con planes de fertilizacin que incluye aplicacin de enmiendas y
aplicacin de urea.

Observacin de las reacciones

Al agregar los 50 ml de solucin de HCl 0,6N al contenido de pasto brachiaria macerado se

observa un cambio leve en el color de la solucin conservando tratndose de conservar su
estado natural al introducirse al bao Mara a una temperatura de 90 se observa que pasado
4 minutos empieza hervir el contenido haciendo burbujas y nos e noto un cambio notorio en
el color de la solucin.

CUIDO PARA PRODUCCIN DE LECHE

Despus de agregar los 50 ml de solucin de HCl 0,6N al contenido de concentrado se
observo un cambio de color inmediato, se subieron las partculas y luego se precipitaron al
introducirse al bao Mara a una temperatura de 90 a los dos minutos se observo que las
partculas estaban precipitadas y empezaron a subir a la superficie, se empez a tornase ms
oscura la solucin, partculas de cuido se observan en continuo movimiento, suben y bajan
, pasado los veinte minutos esta solucin tiene un olor dulce lo cual se hace que sea un
producto ms atractivo a las papilas gustativas de los animales.

1.2 Cuantificacin:

1.2.1. Mezcla Reactiva

Alistar 3 tubos de ensayo, rotularlos as: B=blanco; St=Estndar; m

=muestra y adicionarles cuidadosamente, los siguientes reactivos en el
orden indicado:

Tubos de ensayo

Reactivos (ml) B St m

Agua destilada 2,0 0,0 0,0

Glucosa 1% 0,0 2,0 0,0
FFCNE 0,0 0,0 2,0
Fenol 5% 1,0 1,0 1,0
H2SO4 5,0 5,0 5,0
Concentrado
H2O destilada 2,0 2,0 2,0
Agitar cuidadosamente 20 seg, incubar a 90C, por 10min, sacar los tubos, agitar
nuevamente 10 seg y dejarlos enfriar completamente
Lectura espectrofotomtrica
Alistar el espectrofotmetro a una , calibrar el aparato con el tubo blanco,
ajustando a 100% de Transmitancia (%T) y 0,000 de Absorbancia (A)
Leer la Absorbancia (A) de los tubos st y m; registrar en su tabla de datos

En caso de que no se pueda determinar directamente la absorbancia, debido

al modelo de espectrofotmetro utilizado, entonces, Leer el % de
Transmitancia (%T),de los tubos st y m, convertir estos valores a
Absorbancia (A), mediante la ecuacin : A =2- Log%T , trabajar con 3
cifras decimales, ejemplo:0,023**

Tabla de datos

Completar la siguiente tabla: Matarraton

Tabla 6.Datos para la cuantificacin de CNE

INDICADORES DESCRIPCIN VALOR
Wm Peso de la muestra 2 gramos
Vf Volumen del filtrado 27.5 ml
Ast Absorbencia del estndar 0,022 A
Am Absorbancia del tubo que contena el 0,191
FFCNE

Tabla Datos para la cuantificacin de CNE Bracharia

INDICADORES DESCRIPCIN VALOR

Wm Peso de la muestra 2 gramos

Vf Volumen del filtrado 24 ml

Ast Absorbencia del estndar 0,042 A

Am Absorbancia del tubo que contena el 0,126
FFCNE

Tabla Datos para la cuantificacin de CNE Concentrado Produccin Leche

INDICADORES DESCRIPCIN VALOR

Wm Peso de la muestra 2 gramos

Vf Volumen del filtrado 27.5

Ast Absorbencia del estndar 0,494 A

Am Absorbancia del tubo que contena el 1,637

FFCNE

REGISTRO FOTOGRAFICO

Matarraton Pasto Concentrado Las tres muestras

 Muestras calentar a 90C, durante 20 min.

Imagen 1. Pesa de las muestras Imagen 2. Muestra con solucin fra de

buffer fosfato
Imagen 3. Filtrado de las muestras Imagen 4. Filtrado de las muestras

Imagen 5. Muestras con volumen final,

rotuladas.

3. CALCULOS

AM
%CNE = 0,01 x Fd
Ast
 5 25 100
=
2

Mues1 Matarraton

5 25 100
=
2 27.5 2

= 2.5 0.90 50 = 112,5

= 112,5

AM
% = 0,01 x Fd
Ast

0,191
% = 0,01 x 112,5
0,022

% = 8,681 1,125

% = 9,766

Muestra 2 pasto Brachiaria

 5 25 100
=
2 24 2

= 2.5 1.041 50 = 130.125

= 130,125

AM
% = 0,01 x Fd
Ast

0,126
% = 0,01 x 130,125
0,042

% = 3 1,30

% = 3,9

Muestra 3 concentrado produccin de leche

5 25 100
=
2 27.5 2

= 2.5 0.90 50 = 112,5

= 112,5
 AM
% = 0,01 x Fd
Ast

1,637
% = 0,01 x 112,5
0,494

% = 3.313 1,125

% = 3,727

REGISTRO FOTOGRAFICO

Filtrado muestras Reactivos Calibracin Absorvancia

Equipo
DISCUSIN DE RESULTADOS

Los carbohidratos son las fuentes principales de energa en las dietas de las vacas lecheras.
Entre 50 y 80% de la materia seca del forraje y de los granos son carbohidratos. Tres clases
principales de carbohidratos existen en los alimentos: 1) Azcares sencillos (por ejemplo,
glucosa y fructuosa); 2) Los carbohidratos de almacenamiento, llamados carbohidratos no
estructurales (por ejemplo, almidn y fructuosas); 3) Los carbohidratos estructurales o
fibrosos (celulosa y hemicelulosa) (Jos Alberto Maiztegui)

Con el procedimiento realizado en laboratorio y la aplicacin de las formulas se pudo

calcular la cantidad de carbohidratos no estructurales de la muestra, esta informacin nos
permite realizar diferentes apreciaciones a cerca del material analizado as como sus
cualidades en caso de necesitar evaluar sus propiedades alimenticias o de uso.

CONCLUSIONES

El contenido de carbohidratos no-fibrosos incrementa la energa en la dieta, y as mejora el

suministro de energa y determina la cantidad de protena bacteriana producida en el rumen.

El clculo de los carbohidratos no estructurales nos permite analizar los materiales de las
muestras permitiendo evaluar la importancia de algunos alimentos en cuanto a sus
cualidades como fermentacin rpida, entre otras.

Los carbohidratos no estructurales pueden significar una quinta parte de la composicin de

un forraje determinado.

Conociendo la cantidad de CNE de una especie podemos calcular los dems componentes
de la misma y que tan tierna o lignificada esta una planta.
 PRACTICA IV. ACTIVIDAD CATALITICA DE LA CATALASA (ACAT)

OBJETIVOS
Determinar la actividad de la catalasa por mtodo permanganomtrico.
Cuantificar la cantidad enzimtica de la catalasa en muestras de origen vegetal y
animal.

INTRODUCCIN

La catalasa como biocatalizador de origen proteco, es una enzima xido-reductasa que

participa en la degradacin del perxido de hidrgeno (H2O), hasta Oxgeno molecular
(O2) y agua (H2O).

La reaccin bioqumica enzimtica (RBE) que cataliza es la siguiente:

Catalasa
1H2O2 pH= 6, 8; T=30C 1 H2O + O

Dicha biomolcula, est presente en peroxisomas y mitocondrias de clulas animales y

vegetales, protegindolas de la toxicidad de los radicales libres perxido, impidiendo su
acumulacin y beneficiando el metabolismo celular. Tambin, tiene una participacin
activa en los procesos de foto-respiracin vegetal ,promoviendo la oxidacin del glicolato
generado a nvel del estroma del cloroplasto en una etapa posterior al ciclo de Calvn de la
fotosntesis , hasta el aminocido glicina (cido-2-aminoetanoco), el cual es oxidado
finalmente en la mitocondria- por medio de reacciones de desaminacin oxidativa-hasta
CO2, NH3 y H2O. En las clulas animales y vegetales, el perxido hidrgeno H2O2 se
produce durante la oxidacin de las coenzimas FAD y FMN, biomolculas importantes en
la oxidacin de sustratos a partir del oxgeno molecular. Tambin se genera por la
oxidacin de cidos grasos (AG) en los peroxisomas. Molecularmente, la catalasa est
codificada como EC 1.11.1.6 por la: enzyme comisin numbers y se clasifica como
perxido de hidrgeno xidorreductasa, conformada espacialmente en su estructura
cuaternaria como una protena homotetramrica de peso molecular que oscila entre 210 a
280 Kilodaltons (kD) con 4 subunidades idnticas, constitudas por un grupo prosttico de
protoporfirina y el grupo hemo (Fe- III), representando estos, un 1,1 % y 0,09 %
respectivamente del peso molecular total de la enzima. En esta prctica, la actividad de
catalasa se determinar por el mtodo permanganomtrico, en el cual se titula el perxido
residual, es decir, el que no particip en la RBE, con una solucin de permanganato de
potasio (KMnO4) de concentracin conocida.

METODOLOGIA
Materiales: Montaje de titulacin (soporte universal, bureta, pinzas, Erlenmeyer), pipeta
graduada, probeta graduada, beaker de 400ml; tubos de ensayo con gradilla.

Reactivos: H2O2 0,05m - H2SO42N - KMnO4 0,01m - Extractos de catalasa (ECAT)

PROCEDIMIENTO

Extraccin

Frutas, verduras, suelos concentrados

Pesar ms o menos 2g de muestra picada o pulverizada, registrar el valor como: W y
colocarla en un tubo de centrifuga, luego adicionar 10mL de solucin fra de buffer fosfato
0,05M, pH=6,8-7,0, agitar, con agitador de vidrio (3min) y centrifugar a 2500rpm durante
5min. Sacar el sobrenadante, filtrar y medir su volumen, registrarlo como: V y tomar 5 ml
de ste para depositarlo en un tubo de ensayo, taparlo, rotularlo como: EVCAT (extracto de
verdura para catalasa) o EFCAT (extracto de fruta para catalasa), o ECCAT (extracto de
concentrado para catalasa), o ESCAT, colocarlos inmediatamente en bao de hielo.
Tabla N1
Muestras Peso (gramos)
Suelo 2,17
Verdura (Habichuela) 2.0414
Concentrado 2,0438
Fruta (Manzana) 2,02

Imagen 1. Pesa de las muestras Imagen 2. Muestra con solucin fra de

buffer fosfato

Imagen 3. Filtrado de las muestras Imagen 4. Filtrado de las muestras

Tabla N2
Muestras Volumen Final
Suelo 8,4mm
Verdura (Habichuela) 8mm
Concentrado 1,5mm
Fruta (Manzana) 9mm

Imagen 5. Muestras con volumen final,

rotuladas.

Cuantificacin
Mezcla Reactiva

Alistar 7 tubos de ensayo y rotularlos as: B, 1, 2, 3, 4, 5, 6, colocarlos en bao de hielo y

adicionar los siguientes reactivos en el orden dado:

Tabla N3
Reactivos Tubos de ensayo
(ml) B 1 2 3 4 5
H2O219 4 4 4 4 4 4
Buffer 5 4 4 4 4 4
fosfato
H2SO4 2N 1 0 0 0 0 0
EVCAT 0 1 0 0 0 0
EFCAT 0 0 1 0 0 0
ECCAT 0 0 0 1 0 0
SSCAT 0 0 0 0 1 0
ESCAT 0 0 0 0 0 1

Agitar vigorosamente los tubos por 30 segundos, colocarlos nuevamente en el bao de hielo
y dejarlos en reposo durante 5min, para que se desarrolle la RBE.

H2SO4 2N 0 1 1 1 1 1

Agitar los tubos, con cuidado, por 15 segundos, hasta mezclarlos completamente, sacar la
solucin del tubo blanco y pasarla a un Erlenmeyer o beaker.

Imagen 6. Muestras con los reactivos antes Imagen 7. Muestras despus del bao frio
del bao frio. y de la aplicacin de cido sulfrico.
Titulacin permanganomtrica REDOX

Alistar el montaje de titulacin, colocar el erlenmeyer debajo de la bureta y titular

adicionando lentamente el KMnO, agitando, hasta que aparezca y permanezca un color
rosado o violeta plido, por 30 segundos, en la solucin reactiva, registrar los ml de
permanganato gastados en este proceso.

Repetir el procedimiento con los tubos restantes, registrar volmenes de KMnO, en la tabla
de datos.

Tabla N4
Indicadores
Muestras/Tubos
Wm (g) Vf (ml) VKMno4 (ml)
Blanco 0,2
Suelo 2,17 8,4mm 5,5
Verdura (Habichuela) 2.0414 8mm 3,2
Concentrado 2,0438 1,5mm 1,2
Fruta (Manzana) 2,02 9mm 1,8
 Imagen 8. Titulacin. Imagen 9. Muestras despus de la
titulacin.

CLCULOS

( KMnO4() KMnO4 x 0,01

=

10
= ( ) 10 22
1

Suelo
(0,2 5,5
= 1000
2,17 8,4

5,3
= 1000
18,22

ACAT = -2907,61 gr/ml

Verdura

(0,2 3,2
= 1000
2,012 8

3
= 1000
16,096

ACAT = - 1863,81 gr/ml

Concentrado

(0,2 1,2
= 1000
2,043 1,5

1
= 1000
3,06

ACAT = - 3263,17 gr/ml

Fruta

(0,2 1,8
= 1000
2,02 9

1,6
= 1000
18,18

ACAT = - 880,08 gr/ml

 Bibliografa

Granados, J. (2011). Modulo bioqumica metabolica. Bogot. Universidad Nacional

Abierta a Distancia

Granados, J. (2015). Protocolo de prcticas. Universidad nacional abierta y a distancia.

Mauricio torres, 2010, glucosa, en lnea, 06/03/2011, Saludara interactiva

Jos Alberto Maiztegui, M. M. LOS ALIMENTOS NUTRICION DE RUMIANTES .

http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201111/ComposicionAnalisisy_clasificaciondelosAl
imentos.pdf.