Universidad de San Carlos de Guatemala

Facultad de Agronomía
Área de Ciencias
Subárea de Ciencias Químicas
Laboratorio de Bioquímica

Hoja de trabajo práctica 3.

Estudio cuantitativo de proteínas
Nombre Carné

Kevin Jordany Méndez Hurtarte 202003053

Instrucciones: Realice la siguiente hoja de trabajo. Deje constancia de sus cálculos en donde sea
necesario. Evite copiar textos donde se le solicita analizar. Adjunte el archivo en formato pdf previo al
día y hora límites indicadas en el aula virtual.

SERIE I
Instrucciones: Responda los siguientes cuestionamientos en base al video
https://youtu.be/MPWLQxa0Eio .

a) ¿Cuál es el valor de la absorbancia y la transmitancia de la solución F y A? Incluya el uso de

la fórmula 2 - log(transmitancia) y compare resultados.
Solución A:

%T= 99% absorbancia:

Absorbancia: 0.1 A= 2-log(99)= 4.36*10-3

Solución F:
%T= 98% absorbancia:
Absorbancia: 0.1 A= 2-log(98)= 8.77*10-3

b) Describa el procedimiento realizado para la calibración del espectrofotómetro.

Primero se establece la longitud de onda para realizar el estudio cuantitativo de
proteínas. Luego, se introduce la cubeta que contiene el blanco del reactivo,
posteriormente, utilizando el control de intensidad de luz se fija la aguja hasta que
marque 100% en la escala de transmitancia. Finalmente, se extrae la cubeta y el
espectrofotómetro esta calibrado.
 c) ¿De qué se compone la muestra No. 2, 3, y 5? Indique sustancia y el objetivo de ellas.
Están compuestas por una solución de sulfato de amonio y Reactivo de Biuret utilizado
para indicar la presencia de proteínas y otros compuestos.

SERIE II
Instrucciones: Diríjase al simulador virtual http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm y de acuerdo a
la visto en el laboratorio, realice las siguientes actividades (también puede guiarse en el panel de
instrucciones presentes en el simulador). Trabaje de manera clara, ordenada y legible cada uno de los
aspectos.

ACTIVIDAD I Relación entre absorbancia y concentración utilizando el reactivo para-nitrofenol (pNF).

Cuadro 1. Resultados obtenidos de la relación entre absorbancia y concentración.

Muestra mL de pNF mL de agua mL total Absorbancia Concentración

1 2 1 3 1.069 40.5

2 3 0 3 1.588 60.17

3 1 2 3 0.538 20.08

Cálculos concentración
Sabiendo que la concentración de pNF es igual a 61µM y su absorción según el análisis en el
simulador es de 1.610 a A405 entonces:
𝐴1 𝐴2
=
𝐶1 𝐶2
Muestra 1:
1.610 1.069
= =Entonces la concentración de la muestra 1 es igual a 40.5µM
61µM 𝑋

Muestra 2:
1.610 1.588
= =Entonces la concentración de la muestra 1 es igual a 60.17 µM
61µM 𝑋

Muestra 2:
1.610 0.538
= =Entonces la concentración de la muestra 1 es igual a 20.08 µM
61µM 𝑋
 a) Análisis cualitativo (10 puntos):
Observe los resultados obtenidos y la relación entre el color de las cubetas y el valor de la absorbancia,
explique con base científica esta relación (cite la autoría).
Para un mismo espesor de muestra, paso óptico o anchura de la cubeta, la absorbancia es
proporcional a la concentración. (Ángel Herráez,2019).
por esta razón las cubetas que tienen mayor concentración de pNF (muestra 1 y 2) reflejaron
una mayor absorbancia en el análisis.

b) Análisis cuantitativo (10 puntos):

Calcule la concentración de pNF en la mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en
la botella es de 61 µM pNF. Realice una curva en excel ponderando los resultados de concentración
frente absorbancia.

Cubeta 1
61 ∗ 2
= 40.67
3
Cubeta 2
61 ∗ 3
= 61
3
Cubeta 2
61 ∗ 1
= 20.33
3

Análisis Cuantitativo
1.8
1.6
1.4
1.2
A( 405)

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 10 20 30 40 50 60 70
pNF (µM)
ACTIVIDAD II Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas (ensayo de Bradford)
Cuadro 2. Resultados del ensayo de cuantificación de proteínas (ensayo de Bradford)

Muestra Absorbancia Concentración de proteínas

Blanco o.430 No contiene

1 0.178 266.67

2 0.538 800

3 0.363 533.33

a) Análisis cualitativo (15 puntos): Observe los resultados obtenidos y la relación entre el color
de las cubetas y el valor de la absorbancia, explique con base científica esta relación (cite la
autoría).
Debido a que la absorbancia es proporcional a la concentración, podemos observar que
las cubetas con mayor concentración de proteína de Bradford ( cubetas 2 y 3) poseen
mayor coloración y por lo tanto su absorbancia es igualmente mayor.

b) Análisis cuantitativo (15 puntos): calcule la concentración de proteínas en la mezcla final de

cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 364 mg/L. Realice una curva
de sus resultados en excel representando concentración vs absorbancia.

0.6

0.5

0.4
A(595)

0.3

0.2

0.1

0
0 50 100 150 200 250 300 350 400
Concentracion Proteina (mg/l)
Uso de la curva patrón (20 puntos)
Haga uso de su curva realizada en el inciso anterior (ensayo de Bradford) y determine la concentración
de proteínas a partir de los siguientes datos de absorbancia. Inserte la curva realizada y especifique
de forma clara y ordenada cómo obtuvo los resultados.
Muestra Transmitancia Concentración de proteínas

1 98 7.42

2 96 15.24

3 93 27.48

A=2-log(T)
A=2-log(98)=8.77*10-3
A=2-log(96)=0.018
A=2-log(93)=0.032

0.430 8.77∗10−3
= =Entonces la concentración de la muestra 1 es igual a 7.42µM
364 𝑋

0.430 0.018
= =Entonces la concentración de la muestra 1 es igual a 15.24µM
364 𝑋

0.430 0,032
= =Entonces la concentración de la muestra 1 es igual a 27.48µM
364 𝑋

0.035

0.03

0.025
Absorbancia

0.02

0.015

0.01

0.005

0
0 5 10 15 20 25 30
Concentración