Laboratorio de Bioquímica

Taller 1

1. Instrucciones

a) En la celda 1: 3 mL de Hemoglobina

1mL 2mL 3mL

b) En la celda 2: 3 mL de Reactivo de Bradford

c) En la celda 3: 3 mL de proteína -Bradford

2. Actividad 1

RELACIÓN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN

Materiales: Utilizaremos una disolución de para-nitrofenol (pNF), que es un compuesto con color
amarillo en medio alcalino.
Calibración: 
Llenar una cubeta con 3 mℓ de agua:

Introducir en el espectrofotómetro:

Ajustar la longitud de onda a 405 nm:

Pulsar el botón “A=0”:

Sacar la cubeta y vacíala:

Diseño del experimento: Utilizando el para-nitrofenol (pNF) y agua, prepara 3 muestras en sendas

cubetas, que contengan distintos volúmenes de pNF y siempre un volumen total de 3 mℓ.

Tabla 1. Datos Curva de Calibración

Cubeta 1 2 3
Volumen de 1 2 3 m
pNF L
Volumen de 2 1 0 m
H2O L
Una vez preparadas las 3 mezclas en las 3 cubetas, introdúcelas de una en una al espectrofotómetro
y anota sus medidas de absorbancia.
Tabla 2. Medidas de Absorbancia.

Cubet 1 2 3
a
A405 0,532 1,073 1,608

Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las cubetas y el valor de

absorbancia. Comparando las 3 medidas, ¿observas alguna dependencia entre el valor de
absorbancia y la mayor o menor concentración de pNF en la cubeta?

Rta: Si se presenta dependencia entre el valor de la absorbancia, a medida que aumenta la

intensidad del color (más concentrada la muestra), aumenta el valor de la medida de la absorbancia.

Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de pNF en la mezcla final de cada

cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 80 µM pNF. Prepara una tabla con los
datos y traza una gráfica representando A frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?
 Tabla 3. Concentración de pNF en cada cubeta.

Cubeta C (µM) A405

1 40 0,532
2 53 1,073
3 80 1,608

cURVA DE CALIBRACIÓN
2

1.5 f(x) = 0.03 x − 0.42

R² = 0.96
A 405

0.5

0
35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85
[Pnf]

A partir de la gráfica, resuelve esta pregunta:

Se mezcla 1 mℓ de una muestra problema con 2 mℓ de agua. Calcula la concentración de pNF en la

muestra de partida si el ensayo ha proporcionado un valor A405 = 1.322
22
Escribe tu resultado: c =   µM .